1、不同季節虎杖根莖與莖葉中大黃素含量變化研究                       作者：胡冠宇,夏醒醒,尹政,陳勤【摘要】  目的 通過測定藥用植物虎杖在不同季節時其不同生長部位中的有效成分大黃素含量及其變化規律,旨在為虎杖的最佳采收時間提供依據。方法 采用高效液相色譜法,Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm,5 m)色譜柱,甲醇-0

2、.1%磷酸(8020)為流動相；檢測波長：254 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：27 ；進樣量：20 L。結果 通過測定不同季節虎杖的莖葉與根中的大黃素含量,發現根中大黃素含量最高,且大黃素含量在8月最高。結論 虎杖在生長發育過程中,大黃素含量變化是有規律的,可根據其根中的大黃素含量確定最佳的采收時間。 【關鍵詞】  虎杖；大黃素；采收時間；高效液相色譜法    Abstract：Objective To find the changing regularity of emodin content in different tissues of

3、 Polygonum cuspidatum gathered in different seasons by HPLC, so to decide the best gathering time. Methods The separation was performed on Diamonsil-C18 (250 mm×4.6 mm, 5 m) column, using methanol-0.1%H3PO4 (8020) as mobile phase, detected at 254 nm. The flow rate was 1.0 mL/min, the column tem

4、perature was 27 . Results Among the rhizome and stem leaf of Polygonum cuspidatum, the content of emodin in the rhizome was the highest. Over a year, the content of emodin was the highest in august. Conclusion The content of emodin changes regularly in the process of growth and development of Polygo

5、uum cuspidatum, The best gathering time could be determined by the emodin content in the rhizome of Polygouum cuspidatum.    Key words：Polygonum cuspidatum；emodin；gathering time；HPLC    虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)是蓼科蓼屬多年生草本植物,在我國有廣泛的分布,常見于江蘇、浙江、安徽、山東、廣東、廣西、四川

6、、陜西、云南、貴州等地。傳統藥用部分為其干燥根和根莖,性味苦寒,具有祛風利濕、祛痰止咳、清熱解毒、活血化瘀等功效。其主要化學成分有蒽醌、酚性物質及黃酮類化合物等,其中蒽醌類化合物主要有大黃素、大黃素甲醚、大黃酚等。大黃素有較廣泛的生物活性,具有抑菌、抗炎、免疫調節和抗腫瘤等作用1。由于大黃素具有顯著的藥理學功效,故有著廣泛的應用。    傳統經驗認為,大多數根莖類中藥都在春秋季節時采挖,因為在這個季節里中藥材中的有效成分往往貯藏于根中。中藥大辭典也記載虎杖的根及根莖應在春秋二季采挖2。然而,植物在其生長發育過程中,體內合成的次生代謝物質(包括有效成分或稱生物活性成

7、分)隨著季節的變化,其不同生長部位的含量可能存在很大的差異,僅憑經驗模式采挖,并不一定適合所有的中藥材,藥材質量也就無法得到保證。本試驗采用高效液相色譜(HPLC)法測定虎杖的根莖和葉部位中大黃素的含量,通過跟蹤觀測安徽合肥地區39月間虎杖中大黃素含量的動態變化,以期為確定虎杖的最佳采收季節提供依據。1  材料    Agilent 1100 series 高效液相色譜儀；色譜柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 m)；Agilent色譜化學工作站。大黃素對照品(中國藥品生物制品檢定所提供,供含量測定用,批號756-9

8、203)；虎杖藥材采于安徽省委黨校植物園,經本實驗室鑒定為虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.。甲醇為色譜純；水為重蒸水；其余試劑均為分析純。2  方法與結果2.1  色譜條件    色譜柱：Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm,5 m)；流動相：甲醇-0.1%磷酸(8020)；檢測波長：254 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：27 ；進樣量：20 L。2.2  對照品溶液的配制    精密稱取大黃素對照品1.0 mg,以甲醇溶解并定

9、容至10 mL,搖勻,配成100 g/mL的溶液。2.3  供試品溶液的制備3    取虎杖莖葉與根適量,分別干燥研細,過60目篩,精密稱取約0.1 g,加入三氯甲烷25 mL和2.5 mol/L硫酸溶液20 mL,稱定重量,置80 水浴回流2 h,冷卻后稱重,用三氯甲烷補足失重,搖勻,分取三氯甲烷,精密量取10 mL,水浴蒸干,殘渣加甲醇使溶解,定容至10 mL,用0.45 m微孔濾膜濾過,備用。2.4  線性關系試驗    取100 g/mL的對照品溶液,用甲醇稀釋為100、16.67、8.33、1.67、0.

10、83 g/mL,按上述色譜條件測定,每個濃度重復3次,進樣量為20 L。以對照品峰面積積分值為縱坐標,以進樣濃度為橫坐標進行線性回歸,得回歸方程為：Y134 405X16.119(R0.999 9)。表明大黃素在0.83100 g/mL濃度范圍內線性關系良好。2.5  精密度試驗    精密吸取同一對照品溶液20 L,重復進樣5次,測定大黃素的峰面積值,RSD1.83%,表明儀器精密度良好。2.6  穩定性試驗    將待測樣品溶液在室溫下貯存,在相同的色譜條件下,每隔2 h進樣1次,共5次,測定大黃素的峰面積值,

11、RSD0.91%,表明該樣品溶液在10 h內基本穩定。2.7  重復性試驗    取同一代樣品5份,每份0.1 g,精密稱取,按“2.3”項中的方法處理,測定大黃素的峰面積值,結果大黃素峰面積值RSD1.85%。結果表明重復性良好。2.8  加樣回收率試驗    采用加樣回收法。精密稱取已知含量(21.609 g/mL)的樣品,分別精密加入一定量的大黃素(8.333 g/mL)對照品,按正文樣品溶液的制備方法及上述的色譜條件,依法測定峰面積,計算回收率。結果見表1。表1  加樣回收率試驗結果(略)

12、0;2.9  樣品含量測定    精密稱取干燥虎杖不同組織粉碎品,按“2.3”項下方法制備供試品溶液,吸取20 L供試品溶液注入高效液相色譜儀,測定含量。結果見表2,HPLC圖見圖1。表2  樣品中大黃素含量測定結果(略) 3  討論    虎杖為多年生草本植物,4月中旬開始展葉,58月份為生長旺盛期,89月份為花期,一般在10月底部分葉片開始發黃脫落,11月中旬落完。結果表明,大黃素平均含量根部明顯高于莖葉。在根中,大黃素含量在39月間基本呈遞增趨勢,至8月達到頂峰；與此同時,莖葉中大黃素含量

13、則呈遞減趨勢。這說明虎杖在生長發育過程中,其有效成分大黃素的生成量最高出現在葉中(3月份),隨后,呈下降趨勢,而此時根莖中卻是全年最低點；隨后根莖中的大黃素含量逐漸升高,至4月份時,根莖中的大黃素含量就明顯超過葉中,8月份時為全年最高點。對于這一情況,我們認為有兩種可能：其一,植物在生長發育過程中,合成次生代謝物質的基因在植株不同部位中轉錄與表達的時間不同；其二,生長早期,由于虎杖幼嫩的莖葉營養豐富,物理結構不堅韌,易遭受微生物、食草動物侵襲,大黃素可能在這個時期通過體內轉運通道從根部轉移到莖葉中以起到一種化學防御作用,而在生長晚期,這種次生代謝產物含量隨器官成熟而逐漸下降貯存于根莖中。這種現象在其他植物中也有發現,例如,喜樹幼葉中喜樹堿含量是成熟葉的100倍4。從試驗結果來看,我們認為,虎杖的采收時間應在8月份較為適宜。    為了保證試驗結果的重復性和可靠性,本試驗樣品均是在植物園的不同樣本區,選擇采樣30株作為樣本,每次采集同一樣本植株上的莖葉和根莖,低溫烘干,混合粉碎成60目細粉,保證了采樣的代表性。【參考