1、 死時間(dead time，t0)-不保留組分的保留時間。即流動相（溶劑）通過色譜柱的時間。在反相HPLC中可用苯磺酸鈉來測定死時間。死體積(dead volume，V0)-由進樣器進樣口到檢測器流動池未被固定相所占據的空間。它包括4部分：進樣器至色譜柱管路體積、柱固定相顆粒間隙（被流動相占據，Vm）、柱出口管路體積、檢測器流動池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過程，其它3部分只起峰擴展作用。為防止峰擴展，這3部分體積應盡量減小。V0F×t0（F為流速）梯度方法的建立：Rs：分離度，表示兩峰分離程度的物理量。k：容量因子，表示某溶質在固定相和流動相中物質的量的比，在等度洗脫中。一種物

2、質的k值是恒定不變的。上面兩試針對的是梯度洗脫，表示的平均容量因子。a：分離因子，兩個溶質的容量因子的比。通常k大的作為分子。表示兩物質分離能力的大小。N：理論塔板數，表示柱子的分離能力，也就是柱效。：梯度時間；F：流速；：死體積；：梯度變化圍。常見問題和維護：整個液相系統最值得關注的常數：壓力除體系受到污染之外，幾乎所有柱前的問題都能在壓力變化上表現出來。壓力來源：泵上的壓力傳感器最常見的問題：壓力小（幾乎為零）：說明沒有流動相流過柱子。可能原因：柱前漏夜流速設為0了流動相干了吸濾頭沒有放流動相液面之下流路中有大段氣泡處理方法：漏液：從泵的出口到柱子的前端接口（柱后漏液幾乎不會影響壓力值）順

3、次檢查。泵上有自己的漏液傳感器。檢測到漏液。會停止工作并蜂鳴，變紅。同時顯示錯誤信息：ERROR：LEAK DETECTED。發現漏液點，先停泵，重新接好。將漏液擦干。有的漏液不明顯，這時壓力的也不會太小，檢查時要注意，可用手仔細摸各個接口，感覺是否濕冷。流路中有大段氣泡：通過大流速（如5ml/min）沖洗可以去除泵體氣泡。也就是常說的PURGE。按下泵的面板上的purge鍵即可。每次PURGE的時間和流速可以在面板上設定。通常不改。初始值應該是5ml/min，3min。但有時候泵體空氣太多，purge都不可以，或者很難抽上流動相，這是可以在purge的同時，用注射器，在泵的廢液出口處抽。直到

4、沒有氣泡。關于偶爾出現的氣泡，不用太過在意，因為：1. 有脫氣機在。2. 在purge時，由于流速太大，難免會出現氣泡。尤其是在purge閥開超過180度，廢液出口處出現氣泡就跟平常了。3. 只要氣泡不在泵腔堆積，就幾乎不會影響到分析結果。只要出了泵口，在高壓下會被壓縮的很小。不影響流路的延續性。所以，只要觀察壓力變化，如果壓力沒有異常波動，就行。在泵體有氣泡堆積時，壓力波動會變大。什么樣的波動算正常，需要大家注意觀察。根究經驗，在以恒定流速，梯度不變時，面板上以MP為單位的顯示值應該幾乎不變。頻繁出現的氣泡會影響到流路的延續性，應該注意。吸濾頭堵，管路臟（通常是水相）有可能帶來頻繁出現的氣泡

5、。可以先A，B的溶劑瓶調換一下。PURGE三五次。后換回來，再PURGE兩次。清洗一下管路。壓力過大：說明流路堵了逐段排查，先從柱（預柱）前接口（因為柱子最易堵）斷開，以一定流速走：壓力正常，說明是柱子及其后的某一段堵了（通常是柱子）。換柱子（或預柱）。壓力還高：說明是柱前某段堵了。這時再將進樣器出口（接柱子）的peek管接頭擰下：壓力正常：說明是這段peek管堵了。換peek管。壓力還高：說明是進樣器之前的部分堵了。通常是進樣器六通閥堵了。反沖或清洗流通閥。其它部分依次類推。壓力波動大：說明流路中的液流不平穩，這時色譜圖通常保留時間不穩定，峰型也不好。得到的線性，重復性也不會好。可能原因：泵

6、體有氣泡，泵頭單向閥壞。先確認是哪一臺泵有問題。先走100%A相。看是否壓力還是波動大，還大則說明A泵有問題。壓力正常則說明A泵正常。再走100%的B相，過程如上。確認好泵之后，先purge一下，以驅趕氣泡。Purge兩次后，還是壓力波動大，這有可能單向閥壞了，需要清洗或更換。Ctc自動進樣器的常用維護操作（實驗室現場操作）：換針：調針位：調針位：設定洗針體積：一些小概念：PEEK：聚醚醚酮色譜管道，外徑多為1/16inch，1inch=2.54cm，1/16in=2.54cm，徑大小以顏色標準，紅色（我們用的）最小，為0.13mm（應該是國際統一標準）PEEK接頭手緊即可不銹鋼接頭要用工具緊

7、接頭分一體的和分為主體和壓緊環兩部分的。后者在擰緊的過程中，不易帶動管道扭曲變形。不銹鋼的壓緊環是一次性的單位換算：1MPa=10bar=7500.6torr=14.5psiPsi：pound per square inch (psi)Torr：托里徹利，標準大氣壓的1/760。也就是mmHg（毫米汞柱）其它問題：殘留大：很可能是洗針過程有問題，注意觀洗針時有沒有抽上液體，抽上來的液體是否有很多氣泡。出現過由于轉子磨損，洗針液不能順暢流出進樣口。造成洗針不充分。清洗或更換轉子。也可能進樣過程有問題，注意觀察進樣針活塞是否推到底。可能由于流通閥堵塞，造成壓力大，進樣針沒法推到底。重現性不好：標波

8、動大，可能噴霧針臟了，使得噴霧不均勻。可能是液相方法沒有開發好。峰型差，峰太寬都有可能造成面積不重復（不會差別太大）。注意觀察重現性不好的那幾針，是否峰型比較特殊，保留時間也有較大變化，如果是，很有可能是由于pump里進了氣泡，造成流速不穩，這點可以從壓力變化得到確認，但是好像沒法記錄壓力曲線。質譜檢測器的色譜圖：chromatogram，強度和時間的圖。等同于紫外檢測的色譜圖。質譜檢測器的光譜圖：spectrum，某一時間點（段時間平均）的強度相對質荷比的圖下圖上半為一色譜圖，下半部為圖是灰色方塊（2.5min左右），平均強度相對質荷比的光譜圖。類似于紫外中的全波長圖。分辨率：unit分辨率定義為半峰寬為0.7。其意義如下：=WW=1.70=0.7則W=0.7*1.70=1.19差不多剛好實現單位質荷比的分離線性圍：信號強度與樣品濃度的關系可用如下關系式表示：R=ARCX。R為信號強