1、微生物的實驗室培養(5年15考)(2013新課標全國卷、四川理綜、江蘇卷，北京卷、浙江、山東，天津)一、培養基1概念：按照微生物對營養物質的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養基質2營養構成3培養基的種類及用途劃分標準培養基的種類特點用途物理性質液體培養基不加凝固劑工業生產半固體培養基加凝固劑，如瓊脂觀察微生物的運動、鑒定固體培養基微生物的分離與鑒定、活菌計數、菌種保藏化學成分天然培養基成分不明確的天然物質工業生產合成培養基培養基成分明確分類、鑒定用途選擇培養基培養基中加入某種化學物質，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物的生長培養、分離出特定微生物(如在培養酵母菌和霉菌時，可在培養

2、基中加入青霉素；在培養金黃色葡萄球菌時，可在培養基中加入高濃度的食鹽等)鑒別培養基根據微生物的代謝特點，在培養基中加入某種指示劑或化學藥品鑒別不同種類的微生物，如可用伊紅美藍培養基檢測飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤)特別提醒 自養微生物與異養微生物所需的營養物質不同：自養微生物所需的碳源、氮源來自含碳、含氮的無機物，而異養微生物需要的碳源、氮源來自含碳、含氮的有機物，因此可根據培養基中營養物質判斷微生物的代謝類型。含氮無機物不但能給自養微生物提供氮源，也能作為能源物質，提供能量，如NH3既作為硝化細菌的氮源也作為能源。二、無菌技術1消毒2滅菌3消毒和滅菌比較

3、比較理化因素的作用強度消滅微生物的數量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態的微生物不能滅菌強烈全部微生物能三、微生物的純化培養及菌種的保藏1原理:在培養基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個菌落，這個菌落就是一個純化的細菌菌落。2制備固體培養基的流程3純化大腸桿菌的方法常用的微生物接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。(1) 平板劃線法：是通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。(如下圖示) (2)稀釋涂布平板法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面，進行培養。( 如下圖所示)系列稀釋操作

4、(如下圖所示) 涂布平板操作(如下圖所示) (3)兩種純化細菌的方法的比較項目優點缺點適用范圍平板劃線法可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離不能計數適用于好氧菌稀釋涂布平板法可以計數，可以觀察菌落特征吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延適用于厭氧菌和兼性厭氧菌4.培養：接種后的培養皿放入恒溫箱內培養5菌種保藏 (1)臨時保藏(2)長期保存法：甘油管藏法，放在20_下保存特別提醒 (1)配制牛肉膏蛋白胨固體培養基的注意事項倒平板的適宜溫度是50 左右，溫度過高會燙手，過低培養基又會凝固。平板需倒置，這樣既可使培養基表面的水分更好地揮發，又可防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。(2)平

5、板劃線操作的注意事項第一次劃線及每次劃線之前都需要灼燒接種環。灼燒接種環，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。劃線時最后一區不要與第一區相連。劃線用力大小要適當，防止用力過大將培養基劃破。微生物培養與分離的考查1(·江蘇)某研究小組從有機廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是()。A培養基分裝到培養皿后進行滅菌B轉換劃線角度后需灼燒接種環再進行劃線C接種后的培養皿須放在光照培養箱中培養D培養過程中每隔一周觀察一次解析本題考查微生物的分離和培養過程中的操作要求和培養條件等相關知識，意在考查考生的知識運用能力和實驗處理能力。培養微生物的過程中應先滅菌再倒平板，A錯誤；每

6、一次劃線前都要進行接種環的灼燒滅菌，B正確；接種后的培養皿應在恒溫培養箱中進行培養，光照會影響溫度等條件；培養過程中觀察間隔的時間一般不超過24 h。答案B微生物實驗室培養的拓展應用2(·新課標全國理綜)臨床使用抗生素前，有時需要做細菌耐藥實驗。實驗時，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實驗步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素的敏感性。回答下列問題：(1)為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用_法或_法將樣本接種于固體培養基表面，經過選擇培養、鑒別等步驟獲得。(2)取該單菌落適當稀釋，用_法接種于固體培養基表面，在37 培養箱中培養24 h，使其均勻生長，布滿平板。(3)為了檢

7、測該致病菌對于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養一段時間后，含A的濾紙片周圍出現透明圈，說明該致病菌對抗生素A_；含B的濾紙片周圍沒有出現透明圈，說明該致病菌對抗生素B_；含C的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說明_；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現了一個菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的_。(4)根據上述實驗結果，為達到抗菌目的，最好選用抗生素_。解析(1)在微生物的培養過程中，常用來分離微生物的方法是稀釋涂布平板法或平板劃線法。(2)為了使微生物在培養基上能夠均勻分布，一般用稀釋涂布平板法將微生物

8、接種在培養基上。(3)在抗藥性檢驗過程中，如果在菌落周圍出現透明圈，說明此種抗生素可抑制該細菌；透明圈的大小表示此種抗生素抗菌效果的強弱。據此可判斷抗菌效果強弱依次是A、C、B；D的透明圈中出現了一個菌落，說明該菌落對此種抗生素具有耐藥性。答案(1)平板劃線稀釋涂布(或涂布)平板(2)稀釋涂布平板(涂布)(3)敏感不敏感該致病菌對C的敏感性比對A的弱耐藥菌(4)A歸納比較1培養基的配制原則(1)目的要明確：配制時應根據微生物的種類、培養目的等確定配制的培養基種類。(2)營養要協調：注意各種營養物質的濃度和比例。(3)pH要適宜：細菌為6.57.5，放線菌為7.58.5，真菌為5.06.0，培養

9、不同微生物所需pH不同。2培養基的營養構成(1)各種培養基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽；(2)不同培養基還要滿足不同微生物對pH、特殊營養物質以及氧氣的要求。3微生物和動植物營養要素的比較項目碳源氮源能源無機鹽、水動物糖類、脂肪等蛋白質或其降解物同碳源都需要，種類及功能基本相同 微生物異養型糖類、脂肪、醇、有機酸等蛋白質或其降解物、銨鹽、硝酸鹽、N2等同碳源自養型CO2、碳酸鹽等NH3、銨鹽、硝酸鹽等氧化無機物或利用光能銨鹽、硝酸鹽光能綠色植物32. (8分)農業生產上有一種廣泛使用的除草劑在土壤中不易被降解，長期使用會污染土壤。為修復被污染的土壤，可按圖示程序選育出能降

10、解該除草劑的細菌。已知該除草劑(含氮有機物)在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養基不透明。ABCD(1) 微生物接種是微生物學研究中最常用的基本操作技術，該技術的核心是_，應該在_旁完成。圖中B、C所示操作的目的是將聚集的菌種逐步_。(2) 在選育過程中，應將土壤浸出液接種于以_為唯一氮源的固體培養基上。為了篩選出高效的目的菌，可比較單菌落周圍透明圈的大小。實驗結果如右圖顯示的AE五種菌株中，_是最理想菌株。(3) 若想對初步篩選得到的目的菌進行純化并計數，可采用的接種方法是_。對分離的細菌數目統計時，統計的菌落數目往往比活菌的實際數目_。(4) 操作過程中有三種材料或用具需要消毒或滅菌：培

11、養細菌用的培養基與培養皿；操作者的雙手；玻棒、試管、燒瓶和吸管。其中需要滅菌的是_。(填序號)32. (8分)(1) 無菌操作酒精燈火焰稀釋獲得單個菌落(2) 該除草劑E(3) 稀釋涂布平板法少(4) 【微生物培養】35（15分）I下表所示為某微生物培養基的配方，請回答：（1）依物理性質劃分，該培養基屬于_培養基；依用途劃分，則屬于_培養基。 （2）依培養基的成分，所培養微生物的同化作用類型是_。 （3）如要鑒定自來水中的大腸桿茵是否超標，至少要加入_、_和_，除去_。 I（1）液體 選擇 （2）異養 （分） （3）瓊脂 伊紅和美藍 青霉素（分） 【微生物培養】33（8分）土壤中含有大量的難溶

12、性磷酸鹽，為了從土壤中篩選出能夠將難溶性磷酸鹽轉化為植物能吸收的可溶性磷的優良解磷菌株，以便將其添加到有機肥中，改善植物磷元素供應。科研人員進行如下實驗：實驗原理：固體培養基中難溶性磷酸鹽在微生物的作用下溶解，會在菌落周圍形成透明圈（如右圖），透明圈直徑（D）與菌落直徑（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小。實驗步驟：菌株透明圈直徑（D）菌落直徑（d）D/dM-3-0118.812.31.5B3-5-620.78.02.6T1-4-019.16.51.4步驟1 取某地區土樣5g制得土壤溶液后稀釋，取稀釋液1mL接種到基礎培養基A上，在適宜溫度下培養72h。步驟2 在基礎培養基A上用接

13、種環挑取代表性菌落再次接種，培養34d后觀察菌落特征和透明圈的大小，初步篩選出三種優良解磷菌株（如右表）。分析回答：（1）從物理形態看，培養基A屬于 培養基。培養基中磷源應該是 。（2）步驟1中接種方法是 ，步驟2中接種環的滅菌方法是 。（3）根據實驗結果可以確定溶解磷能力最強的菌株是 。（4）為進一步測定初步篩選的三種菌株實際溶解磷的能力，研究人員將它們接種到基礎培養基B中，并在37、200 r·min-1 搖床培養，定期取上清液，測定溶液中可溶性磷含量，得到右圖所示曲線。 用搖床進行培養的好處是 。 結果表明最優良的解磷菌株是 。33.（8分，除特殊注明外，每空1分）（1）固體

14、難溶性磷酸鹽 （2）稀釋涂布平板法 灼燒（3）B3-5-6（4）增加培養液中的溶氧量；使菌株與培養液充分接觸，有利于物質的交換（2分）M-3-01【微生物培養】高考及模擬題31.(8分)人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動物的胃,可用來發酵處理秸稈,提高秸稈的營養價值。 為了增強發酵效果,研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產菌株,并對其降解纖維素能力進 行了研究。請回答下列問題: (1)在樣品稀釋和涂布平板步驟中,下列選項不需要的是 _ (填序號)。 酒精燈 于培養皿 顯微鏡 無菌水 (2)在涂布平板時,滴加到培養基表面的菌懸液量不宜過多的原因是 _ 。 (3)向試管內分裝含瓊脂的培養基時,若試管口粘附有培養 基,需要用酒精棉球擦凈的原因是 _ 。 (4)剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物,但并不與纖維素降 解產物纖維二糖和葡萄糖發生這種反應。研究人員在剛 果紅培養基平板上,篩到了幾株有透明降解圈的菌落(見 右圖)。 圖中降解圈大小與纖維素酶的 _