1、石蠟切片與冰凍切片培訓(xùn)教程石蠟切片和冰凍切片優(yōu)缺點比較項目石蠟切片冰凍切片目的及抗原穩(wěn)定性定位準(zhǔn)確定位不準(zhǔn)，抗原易彌散，定性快抗原保真酶活性需修復(fù)活性好，易出陽性結(jié)果操作步驟繁瑣，耗時長簡易快捷保存室溫，可長期保存-80C半年左右切片厚度2-5um，易得連續(xù)切片5-10um，不易得連續(xù)切片制片效果片子漂亮，組織形態(tài)結(jié)構(gòu)保存好，石蠟自發(fā)熒光有干擾抗原易陽性，冰晶易導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)破壞適用一抗指定感染性標(biāo)本，骨，鈣化組織，脂肪，小組織臨床快速診斷，原位雜交，免疫熒光，某些酶的顯示如ATP酶，琥珀酸脫氫酶等 冰凍切片概述：冰凍切片是將活組織迅速冰凍、切片、染色，進(jìn)行病理診斷的方法。主要應(yīng)用:（1）快速病

2、理診斷 （2）顯示組織中的脂質(zhì) （3）在組織化學(xué)上顯示酶活性 （4）神經(jīng)組織學(xué)的鍍銀和鍍金染色法 （5）免疫熒光的研究準(zhǔn)備材料：（1）切片機(jī)刀片（2）冰凍包埋劑 （3）液氮罐 （4）液氮專用凍存管（5）組織鑷（6）手術(shù)刀或組織剪 （7）培養(yǎng)皿 （8）生理鹽水 （9）粘附載玻片冰凍切片機(jī)儀器說明功能鍵 說明 燈光開關(guān)按鈕，用于冷凍箱照明。 手動除霜按鈕，用于激活和終止手動除霜。 鎖定按鈕，鎖定解鎖定控制面板以避免無意修改輸入的參數(shù)。要鎖定或解鎖定，按下約5秒。 用箭頭所指的+和-鍵在鐘型標(biāo)記的面板上可以設(shè)置實際時間。按下 或按鈕超過1秒，時間值連續(xù)增加或減少（自動重復(fù)功能）。功能鍵 說明UVC

3、紫外燈開關(guān)按鈕，用于冷凍箱消毒，開啟后30分鐘后自動熄滅 用箭頭所指的+和-鍵設(shè)置自動除霜循環(huán)的起始。同時，時和分標(biāo)記之間的LED閃爍。自動除霜循環(huán)每24小時進(jìn)行一次。 用+和-鍵設(shè)置冷凍箱的溫度。實際溫度是標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù)。要顯示需要的數(shù)值，觸摸+和-鍵。用+和-鍵置需要的數(shù)值。按下或按鈕超過1秒，冷凍盒溫度值連續(xù)增加或減少。完成設(shè)置后5秒將顯示實際值。 用于激活Peltier元件冷凍快速冷凍站。一旦激活，制冷系統(tǒng)的壓縮機(jī)將在40秒后啟動以加強(qiáng)熱傳導(dǎo)效應(yīng)。儀器無Peltier元件顯示為“LL”，有Peltier元件顯示為“PE”。 功能鍵 說明 粗調(diào)后退按鈕，用于標(biāo)本遠(yuǎn)離刀片的快速移動。 微調(diào)后退按

4、鈕，用于標(biāo)本遠(yuǎn)離刀片的慢速移動。 粗調(diào)前進(jìn)按鈕，用于標(biāo)本靠近刀片的快速移動。 微調(diào)前進(jìn)按鈕，用于標(biāo)本靠近刀片的快速移動。（注意：以上粗調(diào)和微調(diào)按鈕均可采用點按步進(jìn)移動或長按連續(xù)移動。）冰凍切片操作流程 取材：手術(shù)過程中取下的新鮮組織，不能太大太厚，厚者冰凍費時，大者難以切完整，大小約為24242mm； 設(shè)定冷凍溫度：應(yīng)視不同的組織選擇不同的冷凍箱冷溫度,冷凍不足無法切片，冷凍過度切片易碎，如：a 軟骨、睪丸、脾臟等高密度組織，冷凍箱溫度在-10 15；b 甲狀腺、腦、心臟、肌肉等組織，溫度在-1525；c 肝、乳腺、膀胱等含脂肪的組織，溫度在-25以下。 包埋冷凍：取出組織標(biāo)本盤，放平擺好組織

5、，周邊滴上包埋劑（一般為OCT），速放于冷凍臺上，冰凍。小組織應(yīng)先取一標(biāo)本盤，滴上包埋劑讓其先冷凍，再放上組織，滴上包埋劑冷凍。 修平組織：將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機(jī)標(biāo)本頭上，啟動粗進(jìn)退鍵，轉(zhuǎn)動旋鈕，將組織修平。 調(diào)節(jié)防卷板與切片：制作冰凍切片，關(guān)鍵在于防卷板的調(diào)節(jié)上，這就要求操作者要細(xì)心，準(zhǔn)確地將其調(diào)較好，調(diào)校至適當(dāng)?shù)奈恢谩Ｕ{(diào)好切片厚度，切片時，切出的切片能在第一時間順利地通過刀與防卷板間的通道，平整地躺在持刀器的鐵板上。這時便可掀起防卷板，取一粘附載玻片，將其附貼上即可。冰凍切片冷凍溫度選擇表組織 10-1515-2525-50腎上腺骨髓腦膀胱乳腺-脂肪乳腺-較少脂肪軟骨宮頸脂肪心臟和

6、血管小腸腎臟喉唇肝臟肺淋巴肌肉鼻胰腺前列腺卵巢直腸皮膚帶有脂肪皮膚不帶有脂肪脾臟或血性組織睪丸甲狀腺舌刮宮物冰凍切片常見問題、原因、解決方法常見問題原因解決方法切片拖尾現(xiàn)象-標(biāo)本不夠冷-刀片或防卷板不夠冷-設(shè)置較低的溫度-等到刀片或防卷板達(dá)到冷凍箱溫度切片褶皺-刀片刃緣損壞-防卷板邊緣損壞-使用刀片的不同部位或更換新刀片-更換防卷板切片卷曲在防卷板上防卷板未能伸出刀片刃緣足夠遠(yuǎn)重新正確調(diào)節(jié)防卷板切片撕裂-標(biāo)本溫度過低-刀片的鈍部、污垢、灰塵、霜凍或者生銹-防卷板頂緣損壞-組織中有硬顆粒-刀背的污垢-升高標(biāo)本溫度-使用刀片的不同部位或更換新刀片-更換防卷板-更換組織- 清潔污垢切片沒有適當(dāng)鋪平-

7、 靜電/氣流- 標(biāo)本不夠冷- 大面積標(biāo)本- 防傾板位置錯誤- 防傾板未與刃緣校直- 錯誤的間隙角- 刃緣變鈍或損壞- 刀片和/或防傾板上有污垢- 去除原因- 選擇較低的溫度- 平行修整標(biāo)本，增加切片厚度- 重新放置防傾板- 正確校準(zhǔn)防傾板- 選擇正確的角度- 使用刀片的不同部位或更換刀片- 用干布或刷子清洗標(biāo)本盤不能拆卸- 下面的濕氣造成標(biāo)本與冷凍架或標(biāo)本頭凍在一起-過多的冰凍包埋劑溢出造成標(biāo)本盤與冷凍架凍在一起- 接觸點滴加高濃度酒精或加熱-滴加包埋劑時不要過多，不要溢到標(biāo)本盤最外圈時鐘面板上的出錯信息顯示如下：EO：XX（如數(shù)字2027）-切片機(jī)故障-通知管理員來處理石蠟切片概述：石蠟切片

8、法是以石蠟作包埋劑，用旋轉(zhuǎn)切片機(jī)將材料切成薄片，經(jīng)一系列處理制成永久制片的方法。準(zhǔn)備材料： （1）切片機(jī)刀片（3）液氮罐 （4）液氮專用凍存管（5）組織鑷（6）手術(shù)刀或組織剪 （7）培養(yǎng)皿 （8）生理鹽水 （9）載玻片 （10）乙醇 （11）二甲苯 （12）福爾馬林（13）蠟 （14）包埋盒 （注意：若自己進(jìn)行石蠟包埋還需準(zhǔn)備10-14號材料）石蠟切片制片流程 組織取材福爾馬林溶液固定過夜 70酒精24小時 85酒精24小時 95酒精（）23小時 95酒精（）12小時 100酒精（）12小時 100酒精（）0.51小時100酒精：二甲苯（1：1）0.51小時 二甲苯（）2030分鐘 二甲苯（）

9、1020分鐘 浸蠟（）40分鐘 浸蠟（）40分鐘 組織包埋 蠟塊整修，切片 選片、粘片及展片貼好的切片置于烤片機(jī)烤干30分鐘120分鐘 （注意：組織大小：約1.5*1.5*0.5厘米 福爾馬林溶液配制：40%甲醛100ml,磷酸二氫鈉4克，無水磷酸氫二鈉6.5克，蒸餾水900ml）石蠟切片機(jī)操作規(guī)程1.打開切片機(jī)后背開關(guān)，將蠟塊固定于切片機(jī)頭上的標(biāo)本夾內(nèi)，使用修片模式，設(shè)置好修片厚度，調(diào)整蠟塊到稍離開刀口能夠切到的位置上，注意蠟塊組織切面與切片刀口要垂直平行。2.勻速搖動手輪并點按微調(diào)按鈕調(diào)整蠟塊切面恰好與刀口接觸，接觸后搖動手輪進(jìn)行修片。3.修片時若發(fā)現(xiàn)蠟塊切面與切片刀口不夠垂直平行可以通過

10、標(biāo)本夾旁邊的控制桿與標(biāo)本切面角度調(diào)節(jié)旋鈕來調(diào)整蠟塊切面。調(diào)整后稍微調(diào)整蠟塊離開刀口一點再重復(fù)第2步重新修片。4.修片修到可以切出完整的最大組織切面時切換回切片模式，設(shè)置好切片厚度進(jìn)行切片，注意前一兩個切片的厚度還沒更換好應(yīng)舍棄。5.切出蠟帶后，右手用鑷子夾住蠟帶粘住刀口的一端輕輕拉起，盡可能將蠟帶拉直展開，左手用毛筆拖住蠟帶中間，轉(zhuǎn)移輕鋪于選片盒中。6.在選片盒中用鑷子將蠟帶分成你需要的段數(shù)，并將一些破損的切片夾開去除，用已標(biāo)記好的載玻片撈片。7.將已粘片的載玻片置于預(yù)熱好水溫（4245）的展片機(jī)內(nèi)進(jìn)行展片，一般幾秒即可使切片展平，然后將載玻片置于預(yù)熱好（6570）的烤片機(jī)上烤干，烤片時間為3

11、0分鐘120分鐘。8.使用完切片機(jī)后，鎖好手輪，取下蠟塊，卸下刀片，關(guān)閉切片機(jī)，用毛筆清理切片機(jī)，稍微往上提并拉出切片廢料U型盤進(jìn)行清理。石蠟切片機(jī)儀器說明 石蠟切片常見問題及原因1、切片上卷且不能形成連續(xù)蠟帶。原因： a、切片刀不夠鋒利 b、切片刀與蠟塊角度不當(dāng) c、石蠟硬度過大，黏度不夠 d、蠟塊四周留蠟邊太少 2、切片上出現(xiàn)裂紋。原因： a、切片刀上有小缺口或刀不平整 b、組織中可能含有較硬的物質(zhì)，如包埋紙、線頭、鋼絲等 c、組織過硬變脆(如凝血塊、膠凍樣物質(zhì)、甲狀腺、腺瘤等) d、石蠟中含雜質(zhì)較多e、包埋時石蠟凍結(jié)太慢3、切片粘附在刀上或蠟塊上且不易取下。 原因：切片時有靜電作用，產(chǎn)生靜電吸引，在冬季或氣候干燥時最常出現(xiàn)這種情況。4、切片易碎或組織脫出與石蠟分離。原因： a、組織固定不佳、脫水透明不夠 b、浸蠟時間過長、溫度過高 c、組織脫出是由于脫水透明時間不夠，或組織中含有酒精，石蠟不易滲入組織中，故導(dǎo)致石蠟與組織分離 d、石蠟、二甲苯使用時間過久5、切片皺縮。原因