1、安徽農業科學,JournalofAnhuiAgri.Sci.2008,36(3):845-846,935責任編輯李瑋責任校對李瑋超聲波提取山楂葉總黃酮的工藝研究呂幫玉,楊新河(孝感學院生命科學技術學院,湖北孝感432000)摘要目的為進一步開發利用山楂葉提供技術依據。方法對影響超聲波提取山楂葉總黃酮的多個因子進行單因素和正交試驗分析,并對超聲波法和傳統方法提取山楂葉總黃酮進行試驗比較。結果70%乙醇超聲波提取總黃酮得率最高。總黃酮得率在2040min內,隨提取時間的增加而明顯增加,4050min內趨于平衡。總黃酮得率在料液比(gml,下同)116120時增加較快,128時略有所下降。總黃酮得率

2、在4060時隨著溫度的升高而增大且5060時增幅較大,超過60時隨溫度的升高而下降。影響總黃酮得率的主次因素依次為:乙醇濃度>超聲時間>超聲溫度>料液比。結論超聲波提取的最佳條件為:70%乙醇,料液比1(g)20(ml),溫度70,時間50min,2次,總黃酮的得率可高達98.87%;超聲波提取總黃酮效果較好。關鍵詞超聲波;山楂葉;總黃酮;提取中圖分類號S661.5文獻標識碼A文章編號0517-6611(2008)03-00845-02StudyontheUltrasonicExtractionTechnologyonTotalFlavonoidsfromHawthornLe

3、af(LVBang2yuetalCollegeofLifeScienceandTechnology,XiaoganUniversity,Xiaogan,Hubei432000)AbstractObjectiveThestudyaimedtosupplytechnicalbasisforfurtherexploitingandutilizinghawthornleaf.MethodMultiplefactorsinfluencingex2tractingtotalflavonoidsfromhawthornleafbyultrasonicwavewereconductedforsinglefac

4、torandorthogonalexperimentalanalysesandtheultrasonicandtraditionalmethodsofextractingtotalflavonoidsfromhawthornleafwerecompared.ResultThetotalflavonoidsyieldofultrasonicextractionwith70%ethanolwashighest.Thetotalflavonoidsyieldincreasedobviouslyalongwiththeincrementofextractiontimeduring2040minandt

5、endedtobalanceduring4050min.Thetotalflavonoidsyieldincreasedfasterwhiletheratioofmaterialtoliquidwas116120,decreasedalittlewhentheratiowas128.Thetotalflavonoidsyieldincreasedalongwiththeenhancementoftemperaturewhilethetemperaturewas4060andtheincrementwasbiggerwhenthetemperaturewas5060,anddecreasedal

6、ongwiththeenhancementoftemperaturewhenthetemperaturewas60.Theorderoffactorsinfluencingtotalflavonoidsyieldwasethanolconcentration>ultrasonictime>ultrasonictemperature>ratioofmliquid.ConclusionTheoptimumconditionofextractingtotalflavonoidswithultrasonicwavewaswith70%ethanol,ratioofmaterialto

7、at60,for50minandtwice,underwhichthetotalflavonoidsyieldcouldreach98.87%.Theeffectofflavwwasbetter.KeywordsUltrasonicwave;Hawthornleaves;Flavonoids;Extraction我國各地均有山楂栽培,山楂葉資源豐富。酮類化合物含量高達2%,為果實含量的20倍。研究表明,抗癌、抗腫瘤作用,作用2(l)3A+0.0021(r=0.9999)。1.3取山楂葉粉末5.000g,用100ml甲醇溶液進行索氏提取至無色,提取液抽濾,濾渣用甲醇沖洗2次,洗液與濾液合并,定容

8、至250ml。按“1.2”方法測定A值,查出提取液中黃酮類化合物(以蘆丁計)含量,并求出山楂葉中黃酮類化合物的總含量為1.99%(作為山楂葉中黃酮類化合物的參照含量比較標準)。1.4超聲提取方法準確稱取山楂葉粗粉5.000g,放入帶。因此,可充分發揮我國山楂葉的資源優勢,提高山楂樹的經濟價值。筆者研究了超聲波提取山楂葉總黃酮,旨在探索一種簡單、低成本、快速、有效的工藝,為進一步開發利用山楂葉提供技術依據。1材料與方法1.1材料和儀器材料:蘆丁(購于中國生物藥品制品檢定塞的100ml三角瓶中,加入一定量相應濃度的乙醇水溶液,然后在相應溫度下超聲提取一定的時間,過濾,濾渣重復提取1次,將提取液合并

9、,用水稀釋到250ml,然后用移液管吸取1ml提取液,按“1.2”方法測定A值,查出提取液中黃酮類化合物的含量,以此求出山楂葉中黃酮類化合物的提取率。2結果與分析2.1超聲波提取單因素試驗2.1.1乙醇濃度對黃酮提取率的影響。精確稱取5.000g粉所);山楂葉(采自孝感);NaNO2、Al(NO3)3、NaOH、HCl、無水甲醇(均為A.R級)。儀器:SP2210UVPC紫外可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司);光電分析天平TG328B型(上海第二天平儀器廠);KQ2500DE型數控超聲波清洗器;梅特勒2托利多Delta320pH計;SFHB23循環水多用真空泵等。1.2標準曲線的繪制先用無

10、水甲醇將烘干的標準品蘆丁碎后的山楂葉,分別用濃度為40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇水溶液在50下,料液比(gml,下同)116,40Hz配制成濃度1.128、0.940、0.752、0.564、0.376、0.188mg/ml的標準溶液,依次移取不同濃度的標準液1ml,分別置于帶刻度的10ml試管中,各加甲醇至5ml,分別加入5%NaNO2溶液0.5ml,搖勻,室溫放置6min,再加10%Al(NO3)3溶液0.5ml,超聲波提取30min,抽濾,濾渣重復提取1次,將提取液合并,用水稀釋定容至250ml,測定其吸光值,得總黃酮提取率與乙醇濃度之間的關系(圖1)。從圖1看出,

11、70%乙醇超聲波提取總黃酮提取率最高;隨濃度的增大總黃酮提取率降低。因此,從提取率來看,乙醇濃度應控制在60%80%。2.1.2提取時間對總黃酮提取率的影響。精確稱取5.000g搖勻,室溫放置6min,加4%NaOH溶液4.0ml,搖勻,室溫放置15min,在波長500nm測定吸光度。同時以試劑空白作對照,以吸光度A為縱坐標,以濃度C為橫坐標,標準曲線方作者簡介呂幫玉(1974-),女,湖北荊州人,實驗師,從事天然產物化學研究。收稿日期2007210213粉碎后的山楂葉,60%的乙醇在50,40Hz超聲波進行提取,分別超聲提取20、30、40、50、60min、料液比116,抽濾,濾渣重復提取

12、1次,將提取液合并,用水稀釋定容至250ml,測定其吸光值,得總黃酮提取率與超聲時間之間的關系(圖2)。846安徽農業科學2008年度在4060,隨著溫度的升高總黃酮提取率隨之增大,5060增幅較大,但溫度超過60,隨著溫度的升高總黃酮提取率反而下降。因此,提取溫度選在60為宜。圖1乙醇濃度對黃酮提取率的影響Fig.1Effectofethanolconcentrationonextractionrateofflavonoids從圖2看出,在2040min,隨著超聲提取時間的增加總黃酮提取率增加明顯,4050min總黃酮提取率趨于平衡。因此,提取時間以50min為宜。圖4提取溫度對總黃酮提取率

13、的影響Fig.4Effectofextractiontemperatureonextractionrateofflavonoids2.1.5提取pH值對總黃酮提取率的影響。精確稱取5.000g粉碎后的山楂葉,60%的乙醇50下,料液比116,調pH值分別為5、6、7、8、9,40Hz超聲波提取30min,抽濾,濾渣重復提取1次,將提取液合并,用水稀釋定容至250ml,測定其吸光值,值之間的關系(圖5)。圖5表明,pH5;時,因此,提取時不圖2Fig.2Effectofextractiontimeon00g粉碎后的山楂葉下,用40Hz超聲波提取30min,12、116、120、1

14、24、128,抽濾,濾渣重復提取1次,將提取液合并,用水稀釋定容至250ml,測定其吸光值,得總黃酮提取率與超聲料液比之間的關系(圖3)。從圖3看出,總黃酮提取率隨提取溶劑比例的增大而增加,料液比在116120增加較快,料液比128時卻略有所下降,可見,并不是提取溶劑越大越好。因此,料液比可選在120。圖5提取pH值對總黃酮提取率的影響Fig.5EffectofpHvalueonextractionrateofflavonoids表1正交實驗極差分析Table1Rangeanalysisfororthogonalexperiment編號No12345678A%50(1)50(1)50(1)60

15、(2)60(2)60(2)70(3)70(3)86.8278.8091.7712.97Bg/mlCDmin總黃酮提取率%Extractionrate81.1789.2890.1379.9778.4280.7896.8891.36圖3料液比對總黃酮提取率的影響Fig.3Effectofmaterial/liquidratioonextractionrateofflavonoidsK1K2K3R116(1)50(1)40(1)120(2)60(2)50(2)124(3)70(3)60(3)116(1)60(2)60(3)120(2)70(3)40(1)()()124350150(2)116(1)7

16、0(3)50(2)120(2)50(1)60(3)83.4984.4481.5886.3585.362.8683.3386.773.4488.6587.157.072.1.4提取溫度對總黃酮提取率的影響。精確稱取5.000g粉碎后的山楂葉,60%的乙醇,料液比116,超聲提取30min,分別在40、50、60、70、80下,40Hz超聲波提取,抽濾,濾渣重復提取1次,將提取液合并,用水稀釋定容至250ml,測定其吸光值,得總黃酮提取率與超聲溫度的關系(圖4)。當溫注:括號內數值為各因素的水平。Note:Numericalvalueinparenthesesmeanlevelofeachfact

17、or.(下轉第935頁)36卷3期張順堂等野生稻種質資源優異基因定位和利用的研究進展935還不很清楚。而且,野生稻的農藝性狀不好,遺傳背景比較復雜,與栽培稻的遺傳差異較大,不利基因的頻率較高,野栽雜交后代性狀不易穩定,尤其是產量、品質、抗逆性等多基因控制的數量性狀,因此用傳統育種技術和方法往往難以奏效。隨著生物技術和信息技術的突破,分子生物學研究的深入發展,利用新手段、新方法,如AB2QTL、DNA分子標記、熒光原位雜交技術(FISH)、基因組原位雜交技術(GISH),基于DNA分子圖譜的基因克隆技術、定位克隆技術等,為野生稻的研究和利用展現了廣闊的前景。參考文獻1湯圣祥,江云球,張本郭,等.

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