1、    高效液相色譜法測定復方黃酮膠囊中熊果酸的含量【摘要】 目的建立復方黃酮膠囊中熊果酸的含量測定 方法 。方法高效液相色譜法，C18柱，以甲醇水磷酸（90100.03）為流動相，流速為0.5 ml/min，檢測波長為220 nm。結果熊果酸在0.9829.82 g /ml范圍內與峰面積線性關系良好，相關系數為0.999 8，平均回收率為98.32%，RSD為0.56%（n=6）。結論該方法簡便，準確，重現性好，適用于復方黃酮膠囊的質量控制。 【關鍵詞】 復方黃酮膠囊 熊果酸 高效液相色譜法 含量測定Determination of Ursolic A

2、cid in Compound Flavone Capsule by HPLCAbstract：ObjectiveTo establish the method for determining the content of ursolic acid in Compound Flavone Capsules .Methods The  C18 column with methanol- water- phosphorous acid (90100.03) as the mobile phase was used. The flow rate was 0.5 ml/min an

3、d the detective wavelength was 220 nm . ResultsThe linear range of calibration curve was 0.9829.82 g/ml (r = 0.999 8). The average recovery was 98.32% and the RSD was 0.56% (n= 6).ConclusionThe method is simple and accurate with a good reproducibility. It can be used for the quality control of Compo

4、und Flavone Capsules.Key words：Compound Flavone Capsules; Ursolic acid ； HPLC； Determination復方黃酮膠囊為銀杏葉提取物和山楂葉提取物的復方制劑，可用于 治療 心腦血管疾病，效果良好。此黃酮類制劑多以總黃酮作為質量控制指標，已報道的測定方法主要有絡合比色法，此法易受雜質干擾，定量誤差較大。熊果酸為山楂葉提取物的主要成分，本實驗采用高效液相色譜法測定復方黃酮膠囊中熊果酸的含量，以進一步完善該制劑的質量標準。結果表明此方法操作簡單、準確、重現性好。1 儀器與試藥 Waters600E型高效液相色譜儀，Wate

5、rs996型PDA二極管陣列檢測器，WatersM32色譜工作站(美國)。METTLER AE-240型 電子 天平（瑞士）；熊果酸對照品由 中國 藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純；水為重蒸水；其余為 分析 純。2 方法與結果2.1 色譜條件色譜柱：NovaPak C18柱（4.0 mm×250 mm，4 m）；流動相：甲醇水磷酸（90100.03）；檢測波長220 nm；柱溫35；流速為0.5 ml/min。在此條件下熊果酸峰與雜質峰能得到較好分離。見圖12。檢測波長的選擇：在三維圖譜上查看熊果酸對照品的紫外吸收，并綜合考慮檢測波長的穩定性，選擇其測定波長為220 nm。2.2

6、 溶液的制備2.2.1 對照品溶液制備精密稱取熊果酸對照品約1 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。2.2.2 供試品溶液制備取樣品膠囊20粒，傾出 內容 物，研細，精密稱取平均粒重約0.25 g，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，超聲處理(150 W，50 kHz)30 min，取出，放冷。用甲醇補足減失的重量，搖勻。離心(1 200 r/min)10 min，取上清液作為供試品溶液。2.3 線性關系考察精密吸取熊果酸對照品儲備液（0.982 mg/ml）1，2，4，6，8，10 ml分別置于10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。精密吸取上述溶液各10 l，注入液

7、相色譜儀，測定峰面積Y。以進樣量（g）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，并以最小二乘法 計算 ，得回歸方程Y3 665 512X122 141，r0.999 8。結果表明熊果酸在0.9829.82 g/ml范圍內與峰面積有良好的線性關系。2.4 精密度實驗取供試品溶液，按以上色譜條件重復進樣6次，測定峰面積，結果RSD為 0.36%(n6)。2.5 穩定性實驗取供試品溶液，按以上色譜條件每隔一定時間進樣 1 次，測定峰面積，結果RSD為0.68%，顯示供試品溶液至少在 48 h內穩定。2.6 重現性實驗精密稱取同一批號（20060109）樣品6 份，按2.2.2項下 方法 操作，測定峰面

8、積并 計算 熊果酸含量，結果熊果酸的平均含量為2.35 mg/粒，RSD=2.1%(n6)。2.7 空白實驗取不含主藥的各種輔料，按制備工藝制得不含主藥的空白試樣。取相當于平均粒重的空白試樣，按2.2.2項所述方法操作，對空白樣品進行測定，結果表明，在對照品相應位置無干擾。2.8 回收率實驗精密稱取已知含量樣品（20060109）6 份，精密加入熊果酸對照品適量，按“2.2.2”項下方法操作 ，測得峰面積并計算含量。結果顯示，平均回收率為98.32%，RSD=0.56%（n6)。2.9 樣品測定取本品3批，按“2.2.2”項下方法操作，并按上述色譜條件，吸取對照品溶液與供試品溶液各10 l，注

9、入液相色譜儀，測定含量，結果每粒膠囊含熊果酸分別為2. 35，2.32，2.38 mg。3 討論復方黃酮膠囊為銀杏葉提取物和山楂葉提取物的復方制劑，熊果酸為山楂提取物的主要成分。熊果酸的含量測定采用HPLC法24，專屬性強，因此，文中建立了HPLC法測定復方黃酮膠囊中熊果酸含量的方法，以進一步完善該制劑的質量標準。在三維圖譜上查看熊果酸對照品的光譜掃描圖，208 nm處有最大吸收，但考慮到波長(208 nm)接近末端吸收，而且溶劑甲醇截止吸收波長為205 nm，從檢測波長的穩定性方面考慮，為了減小溶劑的短波吸收干擾，選擇220 nm為檢測波長。在此檢測波長下對照品和樣品都能得到較好的光譜圖。分

10、離條件的選擇曾先后試驗甲醇水(855)、甲醇水冰醋酸(85150. 04)等流動相系統，結果分離效果不好。水的比例調高時熊果酸色譜峰已嚴重變形成為饅頭峰。采用本文中的流動相，熊果酸色譜峰峰形良好，并且柱效高，陰性對照無干擾，經用二極管陣列檢測器 分析 ，得到熊果酸對照品及供試品中熊果酸的色譜圖及光譜圖，其光譜吸收相同，峰純度良好。對3批樣品測定：每粒膠囊的熊果酸含量均在2 mg以上，故本品的含量測定限度擬定為2 mg/粒以上。【 參考  文獻 】1張 妍，李厚偉，張永春，等.山楂中總黃酮幾種提取分離方法的考察及含量測定J.哈爾濱醫科大學學報，2001，35（3）：183.2姬生國，王 東，付 蕾，等. 健胃口服液中熊果酸