1、生物技術制藥試卷A一、名詞解釋：（本題共10小題，每小題5分，共計50分）1、生物藥物：是指利用各種生物材料，綜合采用各種生物技術的原理和方法制造的一類用于預防、治療和診斷的制品。2、抗生素：由微生物產生，在低濃度下能殺滅和抑制病原體，但對宿主不會產生嚴重的副作用的物質，或使用化學方法半合成的衍生物和全合成的仿制品。廣義的抗生素還包括一些抗腫瘤藥、殺蟲劑和除草劑。3、補料分批發酵：是指將種子接入發酵反應器進行培養，經過一段時間之后，間歇式地、或者連續地補加新鮮培養基，使菌體進一步生長的方法。4、限制性內切酶：生物體內能識別并切割特異的雙鏈DNA序列的一種內切核酸酶。它是可以將外來的DNA切斷的

2、酶，即能夠限制異源DNA的侵入并使之失去活力，但對自己的DNA卻無損害作用，這樣可以保護細胞原有的遺傳信息。由于這種切割作用是在DNA分子內部進行的，故名限制性內切酶。5、載體：將外源目的DNA導入受體細胞，并能自我復制和增殖的工具。6、轉化細胞系：正常細胞經過某個轉化過程，失去正常細胞的特點而獲得無限增殖能力的細胞系。7、微載體培養：將細胞吸附于微載體表面，再在培養液中進行懸浮培養，使細胞在微載體表面生長成單層的方法稱為微載體培養法。8、毛狀根：受到發根農桿菌感染后形成的根組織，易于培養，改變了植物的次生代謝。毛狀根生長快速和次級代謝產物含量高，特別適用于從木本植物和難于培養的植物中得到較高

3、含量的次級代謝產物。9、氣升式反應器：沒有攪拌，氣體通過噴管進入剪切力更小，主要用于懸浮細胞的分批式培養，近年開發用于貼壁細胞的微載體培養，并進行半連續、連續和灌流式培養。10.酶固定化：指經物理或化學方法處理，使酶（細胞）限制或固定于特定空間位置，使之不但能連續發揮催化作用，而且反應后酶又可以反復利用的技術。二、簡答題（本題共5小題，每小題8分，共40分）1.簡述生物藥物新藥的研發流程。答：新藥研究和開發的主要過程：(1)確定研究計劃；(2)準備候選菌株；(3)選擇合適藥理模型初篩(搖瓶)、復篩(小型發酵)體外試驗、細胞試驗；(4)提純有效成分進行化學分析；(5)精制樣品(中型發酵)；(6)

4、臨床前n期(Preclinicaln);(7) I期臨床(PreclinicalI);(8) n期臨床(Preclinicaln);(9)出期臨床(Preclinical出)；(10)注冊申請上市、試生產；(11)售后監測(Post:marketingsurveillance)。2.簡述生物藥物的優點和缺點。答：生物藥物是指利用各種生物材料，綜合采用各種生物技術的原理和方法制造的一類用于預防、治療和診斷的制品。優點：(1)用量少，藥理活性高；(2)特異性強，治療的生理生化機制合理，療效可靠；(2)毒副作用小、價值高；(3)缺點：(1)成分復雜：大多數是混合物；(2)不穩定：易變性，易失活，易降

5、解。(3)提取純化工藝復雜、生產技術難度高；(4)生理副作用常有發生。3 .給出下列生物藥物的中文名稱：IFN;TNF;IL;G-CSF;EPO;GM-CSF;r-SK;r-SAK;GH;EGF;bFGF;rhTPO;t-PA;SRM答：IFN(人a-干擾素)；TNF(腫瘤壞死因子)；IL(白細胞介素)；G-CSF(粒細胞集落刺激因子)；EPO(促紅細胞生成素)；GM-CSF(粒細胞/巨噬細胞集落刺激因子)；r-SK(重組鏈激酶)；r-SAK(重組葡激酶)；GH(生長激素)；EGF(表皮細胞生長因子)；bFGF(堿性成纖維細胞生長因子)；rhTPO(重組人血小板生成素)；t-PA(組織，纖溶酶

6、激活劑）；SRM（生長激素釋放抑制素）。4 .簡述微生物發酵制藥的基本流程。答：微生物發酵制藥基本流程：菌種選育（自然界選種、誘變育種、基因工程、細胞工程）+培養基配制（根據培養基的配制原則制備，實踐中需多次試驗配方）+滅菌（殺滅雜菌（胞體、抱子及芽抱）擴大培養和接種發酵過程（檢測進程，滿足營養需要；嚴格控制溫度、pH、溶氧、轉速等）分離純化（菌體：過濾、沉淀；代謝產物：蒸播、萃取、離子交換）5、簡述基因工程操作流程答：基因工程的操作流程：（1）分：分離目的基因；（2）切：對目的基因和載體適當切割；（3）接：目的基因與載體連接；（4）轉：重組DNA轉入受體細胞；（5）篩：篩選出含有重組體的受體

7、細胞；（6）表：目的基因在受體細胞中表達，受體細胞成長為基因改造生物。三、設計題（本題共1題，共計10分）請設計一個基因工程藥物的生產工藝流程（應包括工程菌構建、擴大培養方法、產物分離純化、質量檢測等環節）。答：干擾素a-2b的制備干擾素（INF）是人體細胞分泌的一種活性蛋白質，具有廣泛的抗病毒、抗腫瘤、免疫調節等等作用，是人體防御系統的重要組成部分，干擾素（INF）最早被用于誘導人體產生白細胞。（1）基因工程菌的組建誘生的白細胞或者成纖維細胞提取核酸通過寡dT-纖維素柱提取mRNApBR322質粒JJ5%-23%蔗糖密度梯度離心提取12S-mRNAPstI內切酶切割由mRNA轉錄成cDNA切

8、割段位于3內酰胺基酶基因內結果導致內酰胺基酶失活，不抗青霉素雙鏈cDNA用末端PstI酶切割J再用DNA轉移酶接上dT或者dG在pBR322質粒DNA的切割段加上dA或者dC+退火獲得雜交質粒轉化大腸桿菌K-12擴增雜交質粒篩選能夠抗四環素、但是對氨芳青霉素敏感的細菌克隆株采用雜交翻譯法挑選含有干擾素cDNA的克隆將干擾素cDNA克隆進表達載體在大腸桿菌中進行高效表達(進入下游工藝)(2)基因工程菌的發酵生產人干擾素a-2b的基因工程菌為SW-IFNa-2b/E.coliDH5a。質粒使用PL啟動子，含有四環素抗性基因。種子培養液含1%蛋白月東、0.5%酵母提取物、0.5%NaCl基因工程菌接

9、種到4個1000ml三角燒瓶之中，每個燒瓶內裝有250ml種子培養基，30c搖床培養10小時，作為發酵罐的種子用15L發酵罐進行發酵，裝發酵培養基10L攪拌轉速500r/min、通氣量為1:1v/v*min、溶氧量為50%30c發酵8小時，42c誘導2-3小時鑒控手段：每隔不同時間，取2毫升發酵液，10000r/min離心除去上清液，稱量菌體濕重。(3)干擾素的制備發酵物質4000r/min離心30min,除去上清液，得濕菌，從其中取100g。懸浮于20mmol/L磷酸緩沖液(PH=7.0)500ml之中，冰浴條件下進行超聲破碎。4000r/min離心30min,除去上清液。沉淀部分用100m

10、l提取液在室溫條件下，進行攪拌抽提2小時提取液15000r/min離心30min,下層不溶棄去。取上清液，用20mmol/L磷酸緩沖液(PH=7.0)稀釋至尿素濃度0.5mol/L加入0.1mmol/L二疏基蘇糖醇，4c攪拌15小時。15000r/min離心30min,除去不溶物。上清液用截流量=10000相對分子質量的中空纖維超濾器濃縮濃縮液采用SephadexG50層析柱分離，層析柱2cm*100cm、先用20mmol/L磷酸緩沖液(PH=7.0)平衡固定相，上柱之后，用同一緩沖液洗脫分離收集人干擾素a-2b部分，用SDS-PAGE檢查。再經DE-52柱進行純化層析柱2cm*50cm、上柱之后，分別采用含有0.05mol/L、0.10mol/L、0.15mol/L的NaCl的20mmol/L磷酸緩沖液(PH=7.0)洗滌。收集含有收集人干擾素a-2b部分。分裝-凍干-成品鑒定-成品包裝。(4)質量控制標準和具體要求(1)半成品檢定-13項指標1、干擾素效價測定；2、蛋白質含量