1、實(shí)驗(yàn)方法匯總第一部分 水樣的采集和儲(chǔ)存第一節(jié) 進(jìn)水取樣用燒杯從進(jìn)水箱中取樣， 根據(jù)不同指標(biāo)的測(cè)定頻率確定取樣量的大小， 從中 取約20mL水樣過(guò)0.45um濾膜后存于聚乙烯瓶中，標(biāo)明取樣日期后4C儲(chǔ)存于冰 箱中用于硝氮、亞硝氮的測(cè)定；另取約 10mL水樣過(guò)玻璃纖維膜后用硫酸調(diào) pH 至小于2,存于玻璃試管中，標(biāo)明取樣日期后4C儲(chǔ)存于冰箱中用于TOC勺測(cè)定。 其余水樣用于 COD氨氮、色度、pH、總鐵、蛋白質(zhì)和多糖指標(biāo)的測(cè)定，測(cè)定 BOM當(dāng)天取樣量約300mL第二節(jié) 出水取樣用燒杯從出水口接取一定量水樣，其它同進(jìn)水。第三節(jié) 上清液取樣將適量混合液用定性濾紙過(guò)濾， 取濾液進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定， 具體

2、同進(jìn)水取 樣，將過(guò)濾后余下的污泥倒回反應(yīng)器內(nèi)（整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，除測(cè)定 MLVSS外，其它 指標(biāo)測(cè)定完畢后都要將污泥倒回反應(yīng)器內(nèi)） 。第二部分 理化指標(biāo)的測(cè)定方法第一節(jié) DO 、水溫的測(cè)定采用溶解氧儀進(jìn)行DO和水溫的測(cè)定：將溶氧儀的電極與儀器連接并將電極 浸沒入反應(yīng)器內(nèi)混合液液面以下（每次的測(cè)定位置都固定在同一死角處并保證 溫度感應(yīng)部分也沒入水面以下） ，打開溶解氧儀，調(diào)至顯示 mg/L 單位的狀態(tài)下， 待讀數(shù)穩(wěn)定后記錄下DO和水溫。測(cè)試完畢后關(guān)掉溶氧儀，拔下電極依次用清水 和蒸餾水清洗后，用濾紙小心擦干電極后將溶氧儀放回固定位置處。第二節(jié)pH的測(cè)定1. 儀器：pH計(jì)10mL小燒杯2試劑用于校準(zhǔn)儀器

3、的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液，按pH標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制中規(guī)定的數(shù)量稱取 試劑，溶于25 0C水中，在容量瓶?jī)?nèi)定容至1000ml、水的電導(dǎo)率應(yīng)低于2Q/cm, 臨用前煮沸數(shù)分鐘，趕走二氧化碳，冷卻。取50ml冷卻的蒸餾水，加1滴飽和氯化鉀溶液，測(cè)量pH值，如pH在67之間即可用于配制各種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液。pH標(biāo)準(zhǔn)液的配制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)pH (25 oC） 每1000ml水溶液中所含試劑的質(zhì)量（25 cC)基本標(biāo)準(zhǔn)酒石酸氫鉀（25 oC飽和）3.5576.4gKHGHG6 檸檬酸二氫鉀3.77611.41gKH2C6H5O鄰苯二甲酸氫鉀4.00810.12gKHC8H4Q磷酸二氫鉀+磷酸氫二鈉6.8653.388gKH2PO+3

4、.533gNa2HPO2, 3)磷酸二氫鉀+磷酸氫二鈉7.413(2, 3)1.179gKH2PO +4.302gNa2HPO )四硼酸鈉9.1803.80gNa2BG?l0H2d3)碳酸氫鈉+碳酸鈉10.0122.92gNaHCO+2.64gNa2CO輔助標(biāo)準(zhǔn)二水合四草酸鉀1.67912.61gKH3C4Cb?H2CS4)氫氧化鈣（25（C飽和）12.4541.5gCa(OH) 2 注：近似溶解度在100130cC烘干2h （3）用新煮過(guò)并冷卻的無(wú)二氧化碳水（4）烘干溫度不可超過(guò)60oCo3. 步驟3.1打開pH計(jì)，預(yù)熱30分鐘，將標(biāo)準(zhǔn)緩沖液和待測(cè)水樣分別倒入小燒杯內(nèi)， 將儀器溫度補(bǔ)償旋鈕調(diào)

5、至待測(cè)水樣溫度處，選用與水樣pH值相差不超過(guò)2個(gè)pH單位的標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)儀器。從第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液中取出電極，徹底沖洗， 并用濾紙吸干。再浸入第二個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液中，其pH值約與第一個(gè)相差3個(gè)pH單位，如測(cè)定值與第二個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液 pH值之差大于0.1pH單位時(shí)，就要檢查 儀器、電極或標(biāo)準(zhǔn)溶液是否有問題。當(dāng)三者均無(wú)異常時(shí)方可測(cè)定水樣。3.2 水樣的測(cè)定：先用蒸餾水仔細(xì)沖洗電極，再用待測(cè)樣清洗，然后將電極浸入水樣中，小心攪拌或搖動(dòng)，待讀數(shù)穩(wěn)定后記錄pH值。使用完畢后關(guān)掉儀器。第三節(jié) 色度的測(cè)定稀釋倍數(shù)法1. 儀器：50mL具塞比色管2. 步驟：2.1 取約100mL澄清水樣于燒杯中，以白色瓷板為背景，觀察并描述

6、其顏色 種類。2.2比色管底部襯一白瓷板，取澄清的水樣 1mL至比色管中，加水至標(biāo)線，此 時(shí)的稀釋倍數(shù)為 50倍，以蒸餾水做對(duì)照， 由上至下觀察其顏色， 若為無(wú)色， 則減小稀釋倍數(shù)；若仍有顏色則繼續(xù)稀釋，直至剛好看不出顏色，記錄此 時(shí)的稀釋倍數(shù)。第四節(jié)COD的測(cè)定一重鉻酸鉀法1. 儀器：具密封塞的消解管 恒溫定時(shí)加熱裝置 分光光度計(jì)2. 試劑硫酸汞1mol/L重鉻酸鉀溶液：準(zhǔn)確稱取120 °C烘干2小時(shí)的重鉻酸鉀24.515g，用 少量水溶解后，移入500mL容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻。硫酸-硫酸銀溶液：稱取5g硫酸銀溶于500mL硫酸中。鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5000mg/

7、L）:將鄰苯二甲酸氫鉀（基準(zhǔn)級(jí)或優(yōu) 級(jí)純）在105°C下干燥至恒重后，稱取2.1274g鄰苯二甲酸氫 鉀溶于250mL水中，將此溶液轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，加水至 標(biāo)線，搖勻，4°C保存。鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)系列使用液：量程分別為 100mg/L、200mg/L、400mg/L、 600mg/L、800mg/L、1000mg/L。分別取 5mL 10mL 20mL 30mL 40mL 50mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液加入到相應(yīng)的 250mL容量瓶中，加 水至標(biāo)線，搖勻，4°C保存。3. 步驟 3.1 打開恒溫加熱器升溫至預(yù)設(shè)的 150oC.3.2 水樣的測(cè)定：向消解管中依次加

8、入 0.04g 硫酸汞、 0.75mL1mol/L 的重鉻酸 鉀溶液、2.25mL硫酸-硫酸銀溶液和2mL待測(cè)樣品（若濃度超過(guò)1000mg/L 需稀釋后取樣），密封混勻后放入加熱槽中計(jì)時(shí)加熱 2h后，取出消解管冷卻 至室溫，用10mmt匕色皿在波長(zhǎng)600nm處以蒸餾水為參比測(cè)定吸光度。測(cè)定 的CODS由相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線查得。用水代替水樣按上述步驟消解后測(cè)定吸光 度。3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：標(biāo)準(zhǔn)使用溶液 CODB對(duì)應(yīng)其測(cè)定的吸光度值減去空白實(shí) 驗(yàn)測(cè)定的吸光度值的差值，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。量程為 0-1000mg/L.第五節(jié) 氨氮的測(cè)定水楊酸比色法1. 儀器：分光光度計(jì)10mL比色管2. 試劑顯色液：稱

9、取 25g水楊酸，加入約 50mL水，再加入16mL10mol/L的NaOH容 液攪拌至完全溶解。另取 25g 酒石酸鉀鈉溶于水中，與上述溶液合并稀釋至 500mL存放于棕色瓶中，可至少穩(wěn)定一個(gè)月，若水楊酸未完全溶解，可再加 入數(shù)毫升NaOHi完全溶解為止。NaClO溶液：取 0.35mLNaCIO 0.72375mL10mol/L 的 NaOH 定容至 10mL，存 放于棕色滴瓶中，此溶液有效期為一周。亞硝基鐵氰化鈉溶液：稱取 0.1g 亞硝基鐵氰化鈉于 10ml 比色管中，加水稀 釋至標(biāo)線，此溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。氨標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取3.819g經(jīng)100C干燥過(guò)的優(yōu)級(jí)純氯化氨溶于水中，移入1000

10、mL容量瓶中，稀釋至標(biāo)線。此溶液每毫升含 1.0mg氨氮。氨標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：吸取10.00mL氨標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液移入100mL容量瓶中，加水 至標(biāo)線，此溶液每毫升含0.1mg氨氮。氨標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：吸取10.00mL氨標(biāo)準(zhǔn)中間溶液移入1000mL容量瓶中，加水 至標(biāo)線，此溶液每毫升含 1ug 氨氮。3. 測(cè)定步驟3.1水樣的測(cè)定：取適量經(jīng)預(yù)處理后的水樣1m（使氨氮含量不超過(guò)8ug）至10mL 比色管中，加水至約 8mL加入1mL顯色液、2滴亞硝基鐵氰化鈉，混勻， 再滴加2滴NaCI0溶液，稀釋至標(biāo)線，充分混勻，放置一小時(shí)后，在波長(zhǎng)697nm 處，用10mm比色皿，以水為參比測(cè)定吸光度。空白樣用蒸餾水按

11、同樣步驟做，扣去空白吸光度后代入計(jì)算。3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別吸取 0、 1.0 、 2.0 、 4.0 、 6.0 、 8.0mL 氨標(biāo)準(zhǔn)使用液 于10mL比色管中，按與水樣測(cè)定相同步驟測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。第六節(jié) 亞硝酸鹽氮和硝酸鹽氮的測(cè)定離子色譜法1. 儀器 離子色譜儀（具有分離柱、抑制柱或抑制膜、抑制器） 。 檢測(cè)器，記錄儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。進(jìn)樣器。淋洗液及再生液貯罐2. 試劑實(shí)驗(yàn)用水均為電導(dǎo)率小于 0.5 yS/cm的二次去離子水，并經(jīng) 0.45 口的微孔濾 膜過(guò)濾。所用試劑均為優(yōu)級(jí)純?cè)噭?淋洗貯備液：分別稱取25.44g碳酸鈉和26.04g碳酸氫鈉（均已在105 C烘干

12、2h,干燥器中冷卻），溶解于水，移入1000ml容量瓶中，用水稀釋到標(biāo) 線，搖勻。貯存于聚乙烯瓶中，在冰箱中保存。碳酸鈉濃度（NaCO）為0.24mol/L ;碳酸氫鈉（NaHCO 為 0.31mol/L。 淋洗使用液：取 20.00ml 淋洗儲(chǔ)備液置于 2000ml 容量瓶中，用水稀釋到標(biāo)線，搖勻。此溶液碳酸鈉濃度為（NaCO）為0.0024mol/L ;碳酸氫鈉（NaHCO 為 0.0031mol/L 。 氟離子標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱2.2100g氟化鈉（在105° C烘干2h，干燥器中冷卻）溶于水，移入 1000 毫升容量瓶中，加入 10.00ml 淋洗貯備液，用水稀釋至 標(biāo)線，貯于聚

13、乙烯瓶中，置于冰箱。此溶液每毫升含1.00mg氟離子。 氯離子標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取1.6484g氯化鈉（在105° C烘干2h，干燥器中冷卻）溶于水，移入 1000 毫升容量瓶中，加入 10.00 淋洗貯備液，用水稀釋 至標(biāo)線，貯于聚乙烯瓶中，置于冰箱。此溶液每毫升含1.00mg氯離子。 溴離子標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取1.2879g溴化鈉（在105° C烘干2h，干燥器中冷卻）溶于水，移入 1000 毫升容量瓶中，加入 10.00 淋洗貯備液，用水稀釋 至標(biāo)線，貯于聚乙烯瓶中，置于冰箱。此溶液每毫升含1.00mg溴離子。 亞硝酸根離子標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取 1.4998g 亞硝酸鈉（干燥器中

14、干燥 24h ）溶 于水，移入 1000 毫升容量瓶中，加入 10.00ml 淋洗貯備液，用水稀釋至標(biāo) 線，貯于聚乙烯瓶中，置于冰箱。此溶液每毫升含 1.00mg 溴離子。 磷酸根離子標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取1.495g磷酸氫二鈉（干燥器中干燥24h）溶于水，移入1000毫升容量瓶中，加入10.00ml淋洗貯備液，用水稀釋至標(biāo)線， 貯于聚乙烯瓶中，置于冰箱。此溶液每毫升含1.00mg磷酸根。 硝酸離子標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取1.3703g硝酸鈉（干燥器中干燥24h）溶于水，移入 1000毫升容量瓶中，加入 10.00ml 淋洗貯備液，用水稀釋至標(biāo)線，貯 于聚乙烯瓶中，置于冰箱。此溶液每毫升含1.00mg硝酸根

15、。 硫酸根離子標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取 1.8142g硫酸鉀（在105° C烘干2h，干燥器中冷卻）溶于水，移入 1000毫升容量瓶中，加入 10.00ml 淋洗貯備液，用 水稀釋至標(biāo)線，貯于聚乙烯瓶中，置于冰箱。此溶液每毫升含 1.00mg硫酸 根。 混合標(biāo)準(zhǔn)使用液：可根據(jù)被測(cè)樣品的濃度范圍配制混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。如：吸取 F 3.00ml，Cl - 4.00ml，Br- 10.00ml，NO 10.00ml，NO- 30.00ml，PQ3- 50.00ml，SQ2- 50.00ml于1000ml容量瓶中，加入 10.00ml淋洗貯備液，-3-2-用水稀釋至標(biāo)線。F-、Cl-、Br-、NQ、N

16、Q-、PO4-、SQ-濃度分別為3mg/L, 4mg/L， 10mg/L， 10mg/L， 30mg/L， 50mg/L， 50mg/L。再生液：取硫酸 1.39ml 于 2000ml 容量瓶中（瓶中有少量水） ，用水稀釋到標(biāo) 線3. 步驟儀器操作按儀器的使用說(shuō)明書進(jìn)行。 樣品保存及預(yù)處理樣品采集后均經(jīng)0.45呵微孔濾膜過(guò)濾，保存于聚乙烯瓶，置于冰箱中，使 用前將樣品和淋洗貯備液按（ 991）體積混合，以除去負(fù)峰干擾。 校準(zhǔn)曲線分別取2.00、5.00、10.00、50.00ml混合標(biāo)準(zhǔn)液于100ml容量瓶中，再分 別加 1.00ml 淋洗貯備液，用水稀釋到標(biāo)線，搖勻。用測(cè)定樣品相同的條件 下

17、測(cè)定，繪制校準(zhǔn)曲線。 樣品測(cè)定色譜條件：淋洗使用液流速為 2.5ml/min，進(jìn)樣量為100 pl，電導(dǎo)檢測(cè)器靈 敏度根據(jù)儀器情況選擇。定性分析：根據(jù)各離子的出峰保留時(shí)間確定離子種類。 定量分析：測(cè)定未知樣的峰高，從校準(zhǔn)曲線查得其濃度。4. 注意事項(xiàng) 用淋洗液配置標(biāo)準(zhǔn)溶液和稀釋樣品， 可除去水的負(fù)峰干擾， 使定量更加準(zhǔn)確。 樣品經(jīng)25mm0.45mm濾膜過(guò)濾，用以去除樣品中顆粒物，以防沾污色譜柱。 淋洗液經(jīng)150mm0.45mm微孔濾膜過(guò)濾，用5000ml濾瓶承接，這樣過(guò)濾速度快，時(shí)間短。 整個(gè)系統(tǒng)不能有氣泡，否則會(huì)影響分離效果。 其他型號(hào)的離子色譜儀可參照本方法自行選擇色譜條件。試液中離子濃

18、度更低或更高，可選擇電導(dǎo)檢測(cè)器的不同靈敏度檔。 作校準(zhǔn)曲線和測(cè)定樣品應(yīng)在同一靈敏度下進(jìn)行。 因試劑、器皿或者樣品的預(yù)處理可引入污染干擾測(cè)定，因此要特別注意防止污染。第七節(jié)BOD測(cè)定方法一一 WTW BO測(cè)定儀1. 儀器：WTW BOD測(cè)定儀 恒溫培養(yǎng)箱2. 試劑磷酸鹽緩沖液：將 0.85gKH2PO4 2.175gK2HPQ 3.34gNa2 HPO. 7H2O和 0.19g NH4Cl 稀釋至 100mL。硫酸鎂溶液：2.25g MgSO. 7H2O稀釋至100mL氯化鈣溶液：3.64g CaCW 2H2O稀釋至100mL硫酸亞鐵溶液：0.025gFeSQ. 7HO稀釋至100mL接種稀釋水

19、：每升蒸餾水中加入 10mL生活污水，上述四種鹽溶液各1mL作為 接種稀釋水NTH硝化抑制劑NaOH藥丸3. 測(cè)定步驟3.1對(duì)于工業(yè)廢水，根據(jù)下表確定合適的稀釋倍數(shù)（對(duì)于未知樣品，BOD按測(cè)得的COD的0.8倍估算）。3.2將一定量的稀釋后的樣品裝入BOD測(cè)試瓶中，加入攪拌轉(zhuǎn)子，滴加相應(yīng)體 積的硝化抑制劑NTH用鑷子向橡膠套中加入 2粒NaOH藥丸（注意防止 進(jìn)水）。3.3將感測(cè)頭旋緊在測(cè)量瓶上，按下 S+M鍵清零，連同攪拌底座一起放入恒溫 培養(yǎng)箱內(nèi)在20 °C下恒溫培養(yǎng)五天，儀器每天自動(dòng)記錄讀數(shù)。3.4五天后，取出測(cè)試瓶，按下 M顯示當(dāng)前讀數(shù)，S顯示每天存儲(chǔ)的讀數(shù)。 根據(jù)下表確定測(cè)

20、試結(jié)果。預(yù)期BOD5稀釋倍數(shù)水樣體積稀釋后體積測(cè)試時(shí)取樣體儀器測(cè)試結(jié)果(mg/L)（倍）(ml)(mL)積（mL）系數(shù)(mg/L)0-802250500432+8.64 滴NTH11 X 2X M80-4002125250250+5 滴 NTH52 X 5X M400-1000550250250+5 滴 NTH55 X 5X M1000-20001025250250+5 滴 NTH510X5XM第八節(jié)總鐵的測(cè)定一鄰菲啰啉分光光度法1. 儀器：分光光度計(jì)150mL錐形瓶50mL比色管2. 試劑（1+3）鹽酸10%鹽酸羥胺溶液緩沖溶液：40g乙酸銨加50mL冰乙酸用水稀釋至100mL0.5%鄰菲啰

21、啉溶液：加數(shù)滴鹽酸幫助溶解飽和乙酸鈉鐵標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取 0.7020g硫酸亞鐵銨溶于（1+1）硫酸50mL中并轉(zhuǎn)移 至1000mL容量瓶中，加水至標(biāo)線，搖勻，此溶液每毫升含100ug鐵。鐵標(biāo)準(zhǔn)使用液：移取25.00mL鐵標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于100mL容量瓶中，加水至標(biāo)線， 搖勻，此溶液每毫升含25.0ug鐵。3. 測(cè)定步驟3.1水樣的測(cè)定：取樣后立即將樣品用鹽酸酸化至pH<1,分析時(shí)取50mL混勻水 樣（濃度不超過(guò)5mg/L,否則要稀釋），加（1+3）鹽酸、鹽酸羥胺各ImL, 加熱煮沸至15mL左右，若仍有沉淀應(yīng)過(guò)濾除去，冷卻至室溫，定量轉(zhuǎn)至50mL 具塞比色管中，加剛果紅試紙，滴加飽和乙酸

22、鈉至試紙剛好變紅，加入 5mL 緩沖液、0.5%鄰菲啰啉2mL加水至標(biāo)線，搖勻，顯色 15分鐘后，用10mm 比色皿在510nm處測(cè)定吸光度，若水樣有底色，可用不加鄰菲啰啉的試液做 參比，對(duì)底色進(jìn)行校正。3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別移取 0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.0mL鐵標(biāo) 準(zhǔn)使用液于150mL錐形瓶中，加水至50mL按與水樣相同步驟處理后測(cè)定吸 光度并繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。第三部分 常規(guī)生物學(xué)指標(biāo)的測(cè)定第一節(jié)異養(yǎng)菌計(jì)數(shù)一MPN法1. 培養(yǎng)基 的配制葡萄糖 5g, 蛋白胨 5g 磷酸氫二鉀 5g 蒸餾水 1000ml，pH7.2-7.4 。2. 將配制好的培養(yǎng)基分裝于試

23、管中，每個(gè)試管裝9mL,121°C蒸汽下滅菌20min， 備用。3. 取用超聲波打碎絮體的污泥懸濁液 1mL（或電磁攪拌30min）,用配好的培養(yǎng)基逐級(jí)稀釋到 10-1、 10-2、 10-3、 10-4、 10-5、 10-6、 10-7、 10-8、 10-9、 10-10，并用空白對(duì)照培養(yǎng)管（向上面裝有培養(yǎng)基的試管接種1mL無(wú)菌水）。同時(shí)各再做兩個(gè)平行樣。4. 37 C下恒溫培養(yǎng)兩天后，取出觀察顏色是否變渾濁，若變渾濁則表明異養(yǎng)菌的存在。5. 根據(jù)結(jié)果查表確定數(shù)量指標(biāo)，換算成每毫升污泥樣所含的最大可能異養(yǎng)菌數(shù)。第二節(jié) 亞硝化菌計(jì)數(shù)1. 培養(yǎng)基 的配制將硫酸銨2g，磷酸二氫鉀1g

24、,硫酸鎂0.5g，氯化鈉2g，硫酸亞鐵0.4g溶于1000mL蒸餾水中，按0.5%比例加入碳酸鈣或碳酸鎂，調(diào)節(jié) pH至722. 將配制好的培養(yǎng)基分裝于試管中，每個(gè)試管裝9mL,121°C蒸汽下滅菌20min, 備用。3. 取用超聲波打碎絮體的污泥懸濁液 1mL（或電磁攪拌30min）,用配好的培養(yǎng)基逐級(jí)稀釋到 1 0-1、 1 0-2 、 1 0-3、 1 0-4 、 1 0-5、 1 0-6、 1 0-7 、 1 0-8、 1 0-9、 1 0-10 ，并 用空白對(duì)照培養(yǎng)管（向上面裝有培養(yǎng)基的試管接種1mL無(wú)菌水）。同時(shí)各再做兩個(gè)平行樣。4. 在28C恒溫生物培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 30天后

25、，在白色比色板的凹窩內(nèi)滴加 3滴鋅- 碘-淀粉液，加入適量的20%硫酸，加培養(yǎng)液2滴，如有NO-存在，立即出現(xiàn) 藍(lán)色，這說(shuō)明亞硝化菌的存在。5. 根據(jù)上面的結(jié)果查表確定數(shù)量指標(biāo)，換算成每毫升污泥樣所含的最大可能菌數(shù)。第三節(jié) 硝化菌計(jì)數(shù)1. 培養(yǎng)基 的配制將無(wú)水碳酸鈉1.0g，亞硝酸鈉1.0g，七水合硫酸鎂0.5g，氯化鈉0.5g，七 水和硫酸亞鐵0.4g，磷酸氫二鉀0.5g溶于1000mL蒸餾水中配成溶液，調(diào) 節(jié)pH至7.2。2. 將上述培養(yǎng)基分裝于試管中，每個(gè)試管裝9mL,12lC蒸汽下滅菌20mi n,備 用。3. 取用超聲波打碎絮體的污泥懸濁液 1mL（或電磁攪拌30min）,用配好的培

26、養(yǎng)基逐級(jí)稀釋到 10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10，并 用空白對(duì)照培養(yǎng)管（向上面裝有培養(yǎng)基的試管接種1mL無(wú)菌水）。同時(shí)各再做兩個(gè)平行樣。4. 在28C恒溫生物培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)30天后，根據(jù)亞硝酸鹽的消失，硝酸鹽的形 成，可驗(yàn)證細(xì)菌硝化作用過(guò)程第二階段的存在。亞硝酸鹽的消失可用格里斯（Griess ）試劑測(cè)定：將甲、乙液各2滴滴于白瓷盤的凹窩內(nèi)，再加待測(cè)培 養(yǎng)液 1 滴，如果亞硝酸鹽被氧化完畢， 則顏色不變， 證明了硝化細(xì)菌的存在。 也可將新鮮無(wú)接種的培養(yǎng)液作對(duì)照，這時(shí)未接種培養(yǎng)液反應(yīng)為紅色，即有亞硝酸鹽的存在。硝酸鹽的鑒定：在白瓷

27、盤的凹窩中加20%濃硫酸和二苯胺試劑各 2 滴，如果出現(xiàn)藍(lán)色則說(shuō)明亞硝酸鹽培養(yǎng)基在硝化細(xì)菌的作用下已被氧 化成硝酸鹽，另外用未接種培養(yǎng)基作對(duì)照。5. 根據(jù)上面結(jié)果查表確定數(shù)量指標(biāo)，換算成每毫升污泥樣所含最大可能菌數(shù)。 附：試劑配制：1. 鋅-碘-淀粉試劑的配法：將25g氯化鋅溶于25毫升蒸餾水中，1g淀粉 溶于少量水，兩液混合煮沸至淀粉溶解后，加入 0.5g 碘化鋅，蒸餾水 加至 250 毫升即成（制成的溶液應(yīng)是無(wú)色的） ，保存于棕色瓶中待用。2. 奈氏試劑的配制：奈氏試劑也稱氨試劑，為碘化汞與碘化鉀復(fù)鹽（Hg.2KI ）的堿性溶液，配法如下：a. 甲液：碘化鉀10g、蒸餾水100毫升、碘化汞

28、20g。b. 乙液：氫氧化鉀20g、蒸餾水100毫升。分別按上列配方制備甲、乙兩液，待冷后，將兩液混合保存于暗色瓶 中備用，為加速溶解，碘化汞可預(yù)先放在研缽中加幾滴碘化鉀研碎。3. 格里斯試劑的配制：a.甲液：對(duì)氨基苯磺酸（磺胺酸）0.8g，5N醋酸（1份醋酸加2.5份 水）100mL配制時(shí)不能加熱溶解；b.乙液：a -萘胺0.5g , 5N醋酸100ml.,加熱溶解。 同時(shí)把甲、乙兩液等量混合，但混合液不能較長(zhǎng)時(shí)間保存。4. 二苯胺試劑配法：二苯胺 1.0g 溶于 20 毫升蒸餾水中，然后徐徐加入 濃硫酸 100 毫升即成，保存在棕色瓶中。第四節(jié) 胞外聚合物（EPS的提取和測(cè)定1胞外聚合物的

29、EDT/提取法將濃度為2%勺EDTA溶液10ml加入10ml污泥樣品中，在4C下放置3h,然后在4°C下，14000rpm下離心20min,棄掉沉積物。通過(guò)測(cè)定蛋白質(zhì)和糖類的含量來(lái)表示 EPS的含量。其中，糖類采用蒽酮試劑 法，蛋白質(zhì)采用考馬斯亮藍(lán)比色法。2糖類蒽酮比色法2.1實(shí)驗(yàn)原理強(qiáng)酸可使糖類脫水生成糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛與蒽酮試劑脫水縮合形成糠醛的衍生物呈藍(lán)綠色，該物質(zhì)在620nm處有最大吸收。在10-100ug范圍內(nèi)其顏色的深淺與可溶性糖含量成正比。該方法靈敏度高，糖含量在30ug左右即可測(cè)定。2.2試劑100ug/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液高純度濃硫酸蒽酮試劑0.1g蒽酮溶于1

30、00ml濃硫酸中，當(dāng)日配制使用。23實(shí)驗(yàn)步驟葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取七支大試管，按照下表數(shù)據(jù)配制一系列不同濃度的葡萄糖溶液管號(hào)1234567葡萄糖標(biāo)液（ml）00.10.20.30.40.60.8蒸餾水（ml）10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量（ug）0102030406080在每支試管中立即加入蒽酮試劑 4ml，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水中，管口加蓋玻璃塞以防蒸發(fā)。自水浴重新煮沸起準(zhǔn)確計(jì)時(shí)10min取出，用流水冷卻，室溫放置 10min，在620nm處比色，以標(biāo)準(zhǔn)葡萄 糖含量作縱坐標(biāo)，以吸光值作橫坐標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品的測(cè)定方法同標(biāo)準(zhǔn)曲線做法。3蛋白質(zhì)一一考馬

31、斯亮藍(lán)比色法3.1實(shí)驗(yàn)原理考馬斯亮藍(lán)法是根據(jù)蛋白質(zhì)和染料相結(jié)合的原理設(shè)計(jì)的蛋白質(zhì)測(cè)定方法。該 方法優(yōu)于雙縮脲法和Folin-酚法，是目前廣泛應(yīng)用的方法。考馬斯亮藍(lán)和蛋 白質(zhì)通過(guò)范德瓦爾鍵結(jié)合，在一定的蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)和染料結(jié)合 符合比爾定律。此染料在酸性溶液中與蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸特別是精氨酸 和芳香族氨基酸殘基相結(jié)合，與蛋白質(zhì)結(jié)合后顏色由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色，最大 吸收波長(zhǎng)由465nm變?yōu)?95nm通過(guò)測(cè)定595nm處吸收可知與其結(jié)合的蛋白 質(zhì)的含量。該方法靈敏度高，重現(xiàn)性好。3.2試劑321考馬斯亮藍(lán) G-250試劑：100mg考馬斯亮藍(lán) G-250溶于50mL95乙醇中，加入100mL85磷酸，用蒸餾水稀釋至1L,濾紙過(guò)濾。3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：將丫 -球蛋白或結(jié)晶牛