1、現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生2011年第27卷第12期綜述與講座色譜指紋圖譜在中藥注射劑中的應(yīng)用進(jìn)展董禮，許蕾，周永強(qiáng)，李宗文(迪沙藥業(yè)集團(tuán)藥物研究院，山東威海264205)【摘要】自國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2000年頒布中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)以來(lái)，中藥注射劑指紋圖譜的研究日益受到人們的重視。本文重點(diǎn)對(duì)指紋圖譜的分類和中藥注射劑色譜指紋圖譜技術(shù)進(jìn)展進(jìn)行了綜述，并對(duì)色譜指紋圖譜在中藥注射劑中的應(yīng)用進(jìn)行了展望。【關(guān)鍵詞】指紋圖譜；中藥注射劑；高效液相文章編號(hào)：1009-5519（2011）12-1830-03中圖分類號(hào)：R28文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：AApplicationofchromatographicfin

2、gerprintintraditionalchinesemedicineinjectionsDONGLi，XULei，ZHOUYong-qiang*，LIZong-wen(MedicineResearchInstitute，DishaPharmaceuticalGroup，Weihai，Shandong264205，China)【Abstract】SincetheTechnicalRequirementsofFingerprintResearchonTraditionalChineseMedicineInjection(TCMI)(interim)wasissuedbyStateDrugAdm

3、inistrationin2000，thestudyonfingerprintspectrumofonTCMIisbeingattachedmoreimportance.TheclassificationoffingerprintspectrumandthetechnicalprogressofchromatographicfingerprintinTCMIarereviewedindetail，anditsapplicationsareprospected.【Keywords】Fingerprint；TraditionalChinesemedicineinjection；HPLC中藥注射劑具

4、有高效、速效等優(yōu)點(diǎn)，頗具開(kāi)拓國(guó)際市場(chǎng)的潛在優(yōu)勢(shì)。但中藥注射劑療效和質(zhì)量不穩(wěn)定，已成為制約其走向國(guó)際市場(chǎng)的主要原因。中藥指紋圖譜作為中藥這一復(fù)雜樣品體系質(zhì)控的技術(shù)手段，已贏得廣泛認(rèn)可。自國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2000年頒布中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)（UV）、紅外光譜（IR）、質(zhì)譜（MS）、核磁共振(NMR)和X-射線衍射法等光譜方法，也包括液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS)、氣質(zhì)聯(lián)用（GC-MS）等先進(jìn)的光色譜聯(lián)用技術(shù)和超臨界流體（SFC）、高速逆流色譜(HSCCC)等新興的分析技術(shù)。要求中推薦色譜指紋圖譜作為首選方法，其中HPLC、GC和TLC已成為公認(rèn)的3種常規(guī)分析手段。(要求)以來(lái)，中藥

5、指紋圖譜的研究已成為我國(guó)中藥研究和產(chǎn)業(yè)界的熱點(diǎn)。本文重點(diǎn)圍繞色譜指紋圖譜在中藥注射劑中的應(yīng)用做如下概述。22.1中藥注射劑色譜指紋圖譜技術(shù)進(jìn)展指紋圖譜測(cè)試研究：目前對(duì)中藥注射劑色譜指紋圖譜測(cè)1中藥指紋圖譜分類中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處理后，試的研究主要圍繞樣品的處理方法和檢測(cè)方法的優(yōu)化，合理參照峰的選擇、指紋峰的指認(rèn)與歸屬等13。采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖或光譜圖。自頒布要求以來(lái)，國(guó)內(nèi)對(duì)中藥注射劑指紋圖譜進(jìn)行了廣泛深入的研究。涉及的方法種類繁多，包括薄層色譜(TLC)、高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)等色譜方法以及紫外光譜通訊作者:周永強(qiáng)，

6、E-mail：zhou.yongqiangFanXH等4采用LC-MS指紋圖譜對(duì)參麥注射液的質(zhì)量進(jìn)行研究，結(jié)果表明，該法可有效解決當(dāng)前在檢測(cè)參麥注射液中對(duì)人參皂甙含量限制的問(wèn)題，并可區(qū)分參麥注射液指紋圖譜和人參根的指紋圖譜。ShiKY等5通過(guò)主成分分析，采用HPLC-DAD對(duì)不同廠家生產(chǎn)的清開(kāi)靈注射液進(jìn)行質(zhì)量控制。與一維指紋圖譜相比，二維指紋圖譜可提供光譜數(shù)據(jù)，能更有效的控制有較大幫助，培養(yǎng)了護(hù)生在臨床護(hù)理過(guò)程中的實(shí)際溝通能力。參考文獻(xiàn)：1234567唐沈李瑩，張靜平，余小波.從護(hù)士工作應(yīng)激中的人際關(guān)系處理談護(hù)士情商的培養(yǎng)J.現(xiàn)代護(hù)理，2005，11(3):225.寧.護(hù)理專業(yè)教學(xué)改革研究報(bào)告

7、M.北京：高等教育出版社，2005，8(4)：8.891011121314方玉嬋，陳華麗.參與式教學(xué)法提高臨床護(hù)生溝通能力的探討J.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，2004，4(7)：90.陳松蘭，修蕓，張衛(wèi)紅，等.護(hù)生職業(yè)態(tài)度形成的相關(guān)因素分析及教育干預(yù)J.中國(guó)護(hù)理管理，2004，4(4)：29.余鳳英.培養(yǎng)護(hù)理本科生溝通能力的實(shí)踐與體會(huì)J.護(hù)理管理雜志，2006，3(3)：29.史瑞芬，唐于金王弋，曾芬.護(hù)士人際溝通能力的培養(yǎng)J.護(hù)理學(xué)雜婷.對(duì)護(hù)理本科生臨床護(hù)患溝通實(shí)踐教學(xué)的志，2003，18(4)：301.潔，陳松蘭，李研究J.護(hù)理研究，2008，22(3)：642.珊.護(hù)患溝通中存在的問(wèn)題及解決策略J.實(shí)用

8、臨床醫(yī)藥雜墨，李秋，趙曉東.通過(guò)醫(yī)患溝通促進(jìn)臨床實(shí)習(xí)J.中國(guó)高收稿日期：2011-01-21志，2005，9(4)：59.等醫(yī)學(xué)教育，2007，4：1.2000：28.云.加強(qiáng)醫(yī)患溝通化解醫(yī)患認(rèn)識(shí)沖突J.中國(guó)醫(yī)學(xué)倫理學(xué)，2004，3：19.尼春萍，劉喜文，化前珍，等.護(hù)理實(shí)踐教學(xué)模式的優(yōu)化與思考J.護(hù)理研究，2009，23(2)：455.黨小麗，李俠.護(hù)理臨床教學(xué)中加強(qiáng)護(hù)生護(hù)患溝通能力培養(yǎng)的探討J.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)論壇，2008，12：737.Tuohy，D.Studentnurse.olderpersoncommunicationJ.NurseEducToday，2003，23(1)：19.李國(guó)建.

9、關(guān)于醫(yī)護(hù)生醫(yī)患溝通能力的培養(yǎng)J.中國(guó)醫(yī)學(xué)倫理學(xué)，現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生2011年第27卷第12期表1方法特點(diǎn)分析速度快、操作簡(jiǎn)便、可配合色譜掃描或數(shù)碼處理5、7、8、9、10、11、12、13和14號(hào)色譜峰與半數(shù)清除濃度(LC50)呈正相關(guān)，其中1、9、10、12、13和14號(hào)峰對(duì)自由基清除作用起主導(dǎo)作用，2、4和6號(hào)色譜峰與半數(shù)清除濃度(LC50)呈負(fù)相關(guān)。各種色譜方法比較一覽備注效能低、靈敏度低、重現(xiàn)性差、適合日常分析檢驗(yàn)和現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)TLC2.4指紋圖譜數(shù)據(jù)分析方法研究：中藥指紋圖譜相當(dāng)復(fù)雜，研GC高選擇、高靈敏、用量少、分樣品需一定的熱敏性和揮發(fā)性、多與質(zhì)譜析速度快聯(lián)用、分離能力優(yōu)于HPLC究者通過(guò)

10、應(yīng)用先進(jìn)的數(shù)學(xué)方法和合理的相似度評(píng)價(jià)方法評(píng)判指紋圖譜，實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥質(zhì)量準(zhǔn)確合理的控制。目前多采用將特征峰分割成信息源按多維向量的分析方法，常用的計(jì)算方法有相似度分析法13、多元統(tǒng)計(jì)分析法14、總量統(tǒng)計(jì)分析法15、模糊信息分析法16和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)法17等。安金兵等18將色譜峰面積值轉(zhuǎn)換成擬分布函數(shù)的形式，再利用柯?tīng)柲缏宸驒z驗(yàn)實(shí)現(xiàn)不同類別樣品的色譜指紋圖譜之間的相似形分析，解決了中藥色譜指紋圖譜中色譜峰面積值存在較大變異的問(wèn)題。孫國(guó)祥等19采用RP-HPLC建立了射干抗病毒注射液各單味藥材、中間體和制劑的對(duì)照指紋圖譜，利用“中藥色譜指紋圖譜超信息特征數(shù)字化評(píng)價(jià)系統(tǒng)3.0”軟件計(jì)算HPLC分離效能高

11、、分析速度快、對(duì)強(qiáng)極性級(jí)分分離效果不好、色譜柱易受靈敏度高、選擇性高污染、鑒別能力高于TLC，應(yīng)用范圍較廣進(jìn)樣不方便、重現(xiàn)性差、HPCE與HPLC均為液相分離技術(shù)，很大程度二者互為補(bǔ)充，但HPCE柱效高于HPLCHPCE靈敏度高、柱效高、分析速度快、進(jìn)樣量少、溶劑消耗少、抗污染能力強(qiáng)GC-MS兼有GC和MS的優(yōu)點(diǎn)，可實(shí)對(duì)樣品的熱穩(wěn)定性有一定要求，樣品的預(yù)現(xiàn)對(duì)樣品的在線分析處理十分重要，有時(shí)要經(jīng)過(guò)衍生化才能檢測(cè)分析技術(shù)的快速度發(fā)展、應(yīng)用和完善為其提供了技術(shù)保證，多維多息將成為研究的熱點(diǎn)HPLC-MS預(yù)處理簡(jiǎn)單，特別適于復(fù)雜樣品的分析樣品質(zhì)量，可作為中藥質(zhì)量控制的方法。中藥注射劑，尤其是復(fù)方注射劑

12、是一復(fù)雜體系，要達(dá)到全過(guò)程的質(zhì)量控制，必須考慮采用分離和分析、鑒定相結(jié)合的方法，從目前檢索到的文獻(xiàn)看，HPLC由于分離效能高、分析速度快，已成為指紋圖譜的首選方法。將色譜法良好的分離能力和波譜法特有的結(jié)構(gòu)分析能力相結(jié)合，已經(jīng)成為非常有效的分離鑒定手段。目前，色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在中藥注射劑中的應(yīng)用越來(lái)越受到人們的重視4，6，7。11個(gè)對(duì)照指紋圖譜的25個(gè)相對(duì)統(tǒng)一化特征參數(shù)及其統(tǒng)一化指紋圖譜。結(jié)果25個(gè)相對(duì)統(tǒng)一化特征參數(shù)能夠準(zhǔn)確、真實(shí)、直觀地揭示射干抗病毒注射液HPLC對(duì)照指紋圖譜好壞及其統(tǒng)一化特征。2.5指紋圖譜信息化和知識(shí)化研究：與指紋圖譜實(shí)驗(yàn)技術(shù)研究相比，指紋圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)的研究相對(duì)薄弱，尚沒(méi)有

13、考慮對(duì)藥效學(xué)資料進(jìn)行收集，對(duì)網(wǎng)絡(luò)化共享數(shù)據(jù)庫(kù)方面尚缺乏系統(tǒng)性研究，資料的采集一般只是使用本單位或者是有一定合作關(guān)系單位的實(shí)驗(yàn)資料1。陳碩等20利用MATLAB開(kāi)放式可擴(kuò)充體系結(jié)構(gòu)，開(kāi)發(fā)了魚(yú)腥草注射液指紋圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)系統(tǒng)，該系統(tǒng)具有數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)化和動(dòng)態(tài)更新、標(biāo)準(zhǔn)指紋譜的動(dòng)態(tài)生成、相似度檢驗(yàn)、化學(xué)模式分析、特征物質(zhì)峰查找等功能，通過(guò)該數(shù)據(jù)庫(kù)系統(tǒng)的應(yīng)用，可有效跟蹤產(chǎn)品質(zhì)量，可廣泛應(yīng)用于魚(yú)腥草注射液的質(zhì)量控制。張曉帆等21對(duì)中藥指紋圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)及數(shù)據(jù)倉(cāng)庫(kù)建立聯(lián)機(jī)分析和數(shù)據(jù)挖掘模型，利用該模型對(duì)10批次苦碟子注射液指紋圖譜的37個(gè)多維多息特征參數(shù)進(jìn)行分析和數(shù)據(jù)挖掘，在此基礎(chǔ)上對(duì)中藥指紋圖譜進(jìn)行分析，從而為中藥

14、指紋圖譜綜合評(píng)價(jià)及制定中藥色譜指紋圖譜提供理論參考和實(shí)踐探索。2.2指紋圖譜質(zhì)量控制研究：國(guó)內(nèi)對(duì)中藥注射劑指紋圖譜質(zhì)控研究主要涉及注射劑真?zhèn)舞b定，質(zhì)量評(píng)價(jià)及對(duì)原料與半成品、成品批間質(zhì)量的穩(wěn)定性和一致性考察以及追蹤制劑的工藝過(guò)程和某些化學(xué)成分的變化等1，5，6。蘇薇薇等8利用HPLC指紋圖譜技術(shù)監(jiān)控田基黃注射液的生產(chǎn)過(guò)程，找出若干敏感步驟，對(duì)田基黃注射液的生產(chǎn)以及提高產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性具有很大的指導(dǎo)意義。中南大學(xué)中藥現(xiàn)代化研究中心9采用GC-MS指紋圖譜鑒定評(píng)價(jià)了34家藥廠340個(gè)批次的魚(yú)腥草注射液，結(jié)果同一廠家的魚(yú)腥草注射液指紋圖譜非常相似，而不同廠家的指紋圖譜明顯不同，用光譜相關(guān)色譜(SCC)

15、在不同廠家及批次的魚(yú)腥草注射液中鑒定出15種共有成分，把其作為快速鑒定及評(píng)價(jià)不同廠家和批次魚(yú)腥草注射液的特征共有峰。中藥化學(xué)成分的多樣性和復(fù)雜性是發(fā)揮其療效的物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)也是質(zhì)量評(píng)價(jià)的重點(diǎn)與難點(diǎn)。在現(xiàn)階段中藥有效成分不完全明確的情況下，建立全面的反映所含化學(xué)成分的指紋圖譜，將更有效的體現(xiàn)中藥的質(zhì)量，這也是目前中藥注射劑指紋圖譜的研究重點(diǎn)。3展望當(dāng)前對(duì)中藥注射劑色譜指紋圖譜的研究主要還是集中在用各分析方法建立注射劑的指紋圖譜以及對(duì)相應(yīng)信息進(jìn)行數(shù)字化處理，評(píng)價(jià)和控制制劑質(zhì)量的研究上。現(xiàn)今的指紋圖譜研究尚有一些需要解決的問(wèn)題。我們認(rèn)為今后一段時(shí)間對(duì)指紋圖譜的研究可能需要注意以下幾個(gè)方面。2.3譜藥

16、效關(guān)系研究：目前指紋圖譜基本反映的都是化學(xué)信3.1色譜指紋圖譜分析方法的多樣性。建立中藥注射劑指紋息，不是藥效信息，存在指紋圖譜與藥效脫節(jié)的現(xiàn)象，這也是指紋圖譜最有爭(zhēng)議的地方。實(shí)際上，指紋圖譜的變化必然引起藥理作用的變化。目前研究人員加強(qiáng)了指紋圖譜與藥效相關(guān)性研究，以期達(dá)到控制指紋圖譜就能保證藥物療效的目的7，10。圖譜，應(yīng)考慮其可操作性。色譜指紋圖譜的分析方法各有其優(yōu)缺點(diǎn)(Tab.1)。選擇何種方法應(yīng)視研究對(duì)象的理化性質(zhì)、實(shí)際需要和可操作性而定。毫無(wú)疑問(wèn)中藥注射劑色譜指紋圖譜首推HPLC，HPCE由于高分離效率、高速度、低消耗、無(wú)污染，正成為建立中藥注射劑指紋圖譜的又一重要的技術(shù)22，SFC

17、和HSC-ChangYX等11通過(guò)HPLC-DAD-PLD法對(duì)丹參注射液的藥效指紋圖譜進(jìn)行研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藥效指紋圖譜可對(duì)丹參注射液的單體抗氧化活性和總抗氧化活性成分進(jìn)行定量分析，并可闡明中藥可能的作用機(jī)制。山東大學(xué)藥學(xué)院12用HPLC法構(gòu)建黃芪注射液指紋圖譜，并分別研究各注射液清除DPPH自由基作用，結(jié)果表明，黃芪注射液指紋圖譜的14個(gè)共有峰中1、3、CC等新興的色譜技術(shù)有可能在注射劑指紋圖譜中得到應(yīng)用，隨著指紋圖譜研究的深入，為了獲得樣品的全息，多維多息譜的發(fā)展將成為研究的熱點(diǎn)。3.2譜效關(guān)系研究：目前，指紋圖譜基本上反映的都是化學(xué)信息，而不是藥效信息。指紋圖譜的變化必然引起藥理作用的變

18、化，只有將標(biāo)示物質(zhì)群特征峰的中藥指紋圖譜與藥效結(jié)果對(duì)應(yīng)起來(lái)，將中藥指紋圖譜中化學(xué)成分的變化與中藥藥效結(jié)果聯(lián)系起來(lái)，建立起有實(shí)際意義的中藥“譜效”關(guān)系，才能建立中藥產(chǎn)品與其療效基本一致的反映產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)。109現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生2011年第27卷第12期LuHM，LiangYZ，ChenS.IdentificationandqualityassessmentofHouttuyniacordatainjectionusingGCMSfingerprint:astandard-izationapproachJ.JEthnopharmacol，2006，105：436.JinLZ，CuiM，HeY，e

19、tal.Chemicalfingerprintandmetabolicfin-gerprintanalysisofDanshen111213injectionbyHPLCUVandHPLCMSmethodsJ.JPharmBiomedAnal，2005，36：1029.3.3指紋圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)的建立：中藥指紋圖譜的發(fā)展趨勢(shì)是建立體現(xiàn)譜效關(guān)系的指紋圖譜，實(shí)現(xiàn)指紋圖譜的信息化和知識(shí)化，使中藥安全、有效和可控。目前對(duì)多種中藥注射劑色譜指紋圖譜方法學(xué)研究已經(jīng)成熟，也積累了一定的圖譜數(shù)據(jù)，今后應(yīng)該在指紋圖譜數(shù)據(jù)積累的基礎(chǔ)上建立信息數(shù)據(jù)庫(kù)，使中藥質(zhì)量管理更加科學(xué)化。參考文獻(xiàn)：123孫國(guó)祥，雒翠霞，任培培，等.

20、中藥指紋圖譜學(xué)體系的構(gòu)建J.中南藥學(xué)，2007，5(1)：69.林華，吳釘紅.高麗參注射液SPE-HPLC指紋圖譜初步研究J.中藥材，2006，29(8)：846.孫國(guó)祥，宋楊，張靜嫻.指紋定量法評(píng)估射干抗病毒注射液指紋歸屬度和藥效物質(zhì)工藝收率J.中南藥學(xué)，2009，7(6)：446.ChangYX，YanDM，ChenLL，etal.Potencyfingerprintofherbalproducts，2009，57：586.張磊，聶磊，王唯紅.黃芪注射液色譜指紋圖譜與抗氧化作用的相關(guān)性分析J.中藥材，2009，32(11)：1757.Dansheninjectionfortheirqual

21、ityevaluationJ.ChemPharmBull，施能勝，石濤.基于HPLC指紋圖譜的消癌平注射液的穩(wěn)定性J.江蘇醫(yī)藥，2010，36(15)：1814.141516171819202122楊美燕，高春生，沈葆真，等.芬多酚靜脈注射液高效液相指紋圖譜相關(guān)性研究J.中國(guó)新藥雜志，2010，19(15)：1376.聶志嬌，賀福元，羅杰英，等.大黃特征成分蔟譜量學(xué)的初步研究J.中藥材，2009，32(4)：530.常乙玲，吳啟南，梁僑麗，等.中藥三棱HPLC指紋圖譜的研究J.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，6(2)：135.徐見(jiàn)容，吳云霏，肖玉秀.人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)用于連錢草中總黃酮和三帖酸類成分的

22、含量預(yù)測(cè)J.分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2007，23(3)：263.安金兵，許玉瓊，賀東奇，等.基于擬分布函數(shù)的中藥色譜指紋圖譜的相似性分析J.北京大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，3(1):11.孫國(guó)祥，宋陳楊，胡玥珊，等.射干抗病毒注射液統(tǒng)一化HPLC指紋圖譜的評(píng)估J.中成藥，2008，30(12)：1717.碩，曾仲大，梁逸曾，等.魚(yú)腥草注射液指紋圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)系統(tǒng)杰，等.基于SQLserver2005的數(shù)據(jù)挖掘技的實(shí)現(xiàn)與應(yīng)用J.計(jì)算機(jī)與應(yīng)用化學(xué)，2006，23(9)：835.張曉帆，董鴻曄，金苗文娟，楊術(shù)在中藥指紋圖譜數(shù)據(jù)分析中的應(yīng)用J.中南藥學(xué)，2008，6(4)：466.蕾，吳大蓉，等.益母草注射液的毛細(xì)管電泳

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24、njectionbyhigh-performanceliquidchromatographywithdiodearraydetectionJ.JChromatogr，2005，1990：90.6任永申，張萍，杜曉曦，等.基于HPLC指紋圖譜的茵梔黃注射液質(zhì)量一致性和穩(wěn)定性研究J.中國(guó)中藥雜志，2005，30(9)：662.7LuHM，LiangYZ，WuXJ，etal.Tentativefingerprint-efficacystudyofHouttuyniacordatainjectioninqualitycontroloftraditionalChi-nesemedicineJ.ChemPharmBull，2006，54：725.8蘇薇薇，楊立偉，王永剛.利用指紋圖譜技術(shù)監(jiān)控田基黃注射液的生產(chǎn)過(guò)程J.中藥材，2004，27(9)：672.急性心肌梗死標(biāo)志物應(yīng)用分析及新進(jìn)展胡益飛，章武戰(zhàn)（金華市中芬友好文榮醫(yī)院，浙江金華3