1、附件2：體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則發(fā)光免疫分析試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則發(fā)光免疫分析試劑是指利用特異的抗原抗體反應(yīng)等生物學(xué)原理，利用發(fā)光信號來進(jìn)行檢測的一類試劑。主要包括化學(xué)發(fā)光（酶促、非酶促），電化學(xué)發(fā)光和時(shí)間分辨熒光等法。該指導(dǎo)原則主要適用于用發(fā)光分析技術(shù)對蛋白質(zhì)等被測物質(zhì)進(jìn)行檢測的第三類試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制。第二類試劑的生產(chǎn)及質(zhì)量控制可參考該指導(dǎo)原則執(zhí)行，國家食品藥品監(jiān)督管理部門將依據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要，適時(shí)組織修訂。一、基本原則（一）研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應(yīng)當(dāng)制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并符合有關(guān)法規(guī)的要求。（二）診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜

2、的生產(chǎn)環(huán)境，獲得醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證；同時(shí)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細(xì)則（試行）的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí)施并保持有效運(yùn)行；生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng)該通過體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）的考核。（三）診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。（四）研制生產(chǎn)過程中所用的材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。（五）生產(chǎn)和質(zhì)量控制總體目標(biāo)應(yīng)保證產(chǎn)品使用安全，質(zhì)量穩(wěn)定，工藝可控，使用有效。二、原材料質(zhì)量控制（一）主要生物原料與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料包括各種活性抗原、重組抗原、單克隆抗體、

3、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。一般按工藝要求對這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量要求。原料供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請。主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括：1外觀肉眼觀察，大部分生物原料為澄清透明的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含有其他顏色的雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。2純度和分子量主要經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃

4、描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜丙烯酸胺凝膠濃度進(jìn)行電泳。一般情況下，每個(gè)電泳道加樣量為5g，同時(shí)用已知分子量的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品作參照，采用合適的電泳電流，電壓和電泳時(shí)間；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位置。3蛋白濃度蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲方法等進(jìn)行檢測。4效價(jià)效價(jià)的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進(jìn)行。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。5功能性實(shí)驗(yàn)功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般

5、考查使用該原料的試劑的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。（二）生物輔料生物輔料指的是在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料、主要包括牛血清、羊血清、牛血清白蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合2000年版的中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)上規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。建議作以下檢驗(yàn)：1. 牛血清或羊血清外觀：為淺黃色呈稍粘稠的液體，無溶血或異物無菌試驗(yàn)：將血清直接放37度培養(yǎng)7天，放在明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁。總蛋白含量：用雙縮脲方法來測定，標(biāo)準(zhǔn)為不小于32mg/ml。球蛋白含量：取待測血清1ml，加入0.85%的NaCl溶液。 加入飽和硫酸銨1ml，

6、置4，2小時(shí)，8000rpm離心10分鐘，棄上清。沉淀溶于0.85%NaCl溶液，至1ml，用Lowry方法測定蛋白含量，不能大于2mg/ml。2. 牛血清白蛋白：外觀：應(yīng)為淺黃色凍干粉末無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，溶解時(shí)間在18-26度時(shí)應(yīng)不大于15分鐘。1%水溶液的值應(yīng)為。總蛋白含量：用雙縮脲方法來測定，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為大于等于95。總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為95%。BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為90%。3. 酪蛋白：酸度應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。4標(biāo)記用酶應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的

7、標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗(yàn)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于。對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行測定，均不得出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應(yīng)商。（三）化學(xué)原材料參照中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)分析純級別檢驗(yàn)。主要的檢測指標(biāo)包括一些基本的一般鹽類檢測、溶液PH值、重金屬檢測、溶解情況的檢測、干燥失重的檢測。熾灼殘?jiān)取?無機(jī)類：主要包括有氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氯鈉等。2有機(jī)類：

8、主要包括有吐溫20、三羥基氨基甲烷等。3. 特殊化學(xué)原料：Eu-DTTA，魯米諾等。Eu-DTTA純度分析與鑒定：要求Eu-DTTA各功能團(tuán)符合分子結(jié)構(gòu)，純度在96%以上。（四）其他原輔料1微孔板條外觀：明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量應(yīng)無劃痕、破損、飛邊、骯臟、表面光滑。板條與微孔反應(yīng)條塑料框架應(yīng)配合合適。材質(zhì)：微孔反應(yīng)板條每孔加200µL增強(qiáng)液，用時(shí)間分辨熒光分析儀檢測其熒光值，平均本底熒光值1500。吸附能力和精密性：用一定濃度的蛋白包被微孔板條，檢測熒光值，計(jì)算其CV值、批內(nèi)差標(biāo)準(zhǔn)CV5,批間差CV10。2其他粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)

9、督管理局頒布的體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則和醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識管理規(guī)定建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。三、試劑盒各組分的生產(chǎn)診斷試劑盒主要組分的生產(chǎn)包括包被反應(yīng)板、標(biāo)記物制備、各種溶液的配置、凍干、分包裝等步驟；并通過產(chǎn)品的半成品檢驗(yàn)和成品檢驗(yàn)兩個(gè)質(zhì)控過程來完成。(一)固相載體的制備（因不同產(chǎn)品使用的包被載體有很大區(qū)別，在此以標(biāo)準(zhǔn)96孔微孔反應(yīng)板為例進(jìn)行描述）1包被板的準(zhǔn)備準(zhǔn)備經(jīng)檢驗(yàn)合格的包被板，記錄批號、數(shù)目、狀態(tài)標(biāo)識。質(zhì)控項(xiàng)目：尺寸，外觀，包裝。2包被液的配制配制包被緩沖液，加入包被的抗體或抗原到工作濃度，混合均勻，即成所需的包被液，工作濃度的包被液應(yīng)在規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目：包被緩

10、沖液配方，pH值，包被物成份。3包被板的包被包被液按工藝要求加入包被板。記錄所包被的包被板數(shù)量。質(zhì)控項(xiàng)目：包被體積，溫度，時(shí)間，過程監(jiān)控。4洗板工作液的配制（按各單位工藝要求，可以不洗板）按配方配制洗板工作液。質(zhì)控項(xiàng)目：洗板工作液配方，pH值。5封閉液的配制按配方配制封閉液。質(zhì)控項(xiàng)目：封閉液配方，pH值。6洗板和封閉包被完成后，抽去孔內(nèi)包被液，用洗板工作液洗板后（按各單位工藝要求，可以不洗板），加入封閉液。質(zhì)控項(xiàng)目：封閉體積，溫度，時(shí)間，過程監(jiān)控。質(zhì)檢項(xiàng)目：封閉前檢驗(yàn)包被均一性。7抽干封閉后的反應(yīng)板，抽干孔內(nèi)液體。質(zhì)控項(xiàng)目：過程監(jiān)控。8干燥反應(yīng)板應(yīng)按工藝的要求進(jìn)行干燥。質(zhì)控項(xiàng)目：溫度，濕度，時(shí)

11、間，過程監(jiān)控等。9密封包裝將干燥后的反應(yīng)板用鋁箔袋密封包裝，內(nèi)放干燥劑（按各單位工藝要求，可以不放）。質(zhì)控項(xiàng)目：密封性能，標(biāo)示及效期等。10反應(yīng)板（半成品）檢驗(yàn)對裝袋密封后的反應(yīng)板進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、板內(nèi)變異、板間變異。(二)滴配過程1酶結(jié)合物的制備（根據(jù)各產(chǎn)品實(shí)際情況，該步驟可不進(jìn)行）采用常規(guī)過碘酸鈉乙二醇法將相關(guān)的抗體（或抗原）標(biāo)記辣根過氧化物酶（或其他酶），酶標(biāo)記后的抗體（或抗原）應(yīng)加入適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)劑保存于低溫。質(zhì)控項(xiàng)目：標(biāo)記方法，過程控制。2酶結(jié)合物的鑒定(1) 功能性實(shí)驗(yàn) 將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋后，用于產(chǎn)品的滴配，其結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。(2) 穩(wěn)定性 將酶結(jié)合物用酶稀釋液

12、稀釋，進(jìn)行2-8，及熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，滴配結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。3酶結(jié)合物稀釋液按酶結(jié)合物稀釋液的配方配制，存放在2-8保存，并于規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目：酶結(jié)合物稀釋液配方，pH值。4酶結(jié)合物工作濃度的滴配取酶結(jié)合物，用酶結(jié)合物稀釋液稀釋到不同的濃度，用已制備好的反應(yīng)板進(jìn)行滴配。測定系列標(biāo)準(zhǔn)品及相應(yīng)的質(zhì)控品，確定使體系達(dá)到最優(yōu)的酶結(jié)合物工作濃度。5酶結(jié)合物工作液配制將所需量酶結(jié)合物和酶結(jié)合物稀釋液按滴配濃度混合均勻。質(zhì)檢項(xiàng)目：分裝前檢驗(yàn)，用配套的反應(yīng)板進(jìn)行檢驗(yàn)，外觀、靈敏度、質(zhì)控品測定值、定量產(chǎn)品應(yīng)作校準(zhǔn)品線性檢測。6酶結(jié)合物工作液的分裝按工藝要求分裝酶結(jié)合物工作液。質(zhì)控項(xiàng)目：分裝前確

13、認(rèn)試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。7酶結(jié)合物工作液（半成品）檢驗(yàn)對分裝后的酶結(jié)合物工作液進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、分裝量、靈敏度、校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線線性、質(zhì)控品測定值。(三) 校準(zhǔn)品、陰陽性對照或質(zhì)控品的制備1稀釋液按稀釋液的配方配制，存放在28或-20保存，并于有效期內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目：稀釋液配方，pH值。2校準(zhǔn)品、陰陽性對照或質(zhì)控品的配制校準(zhǔn)品、陰陽性對照或質(zhì)控品的配制要具有溯源性，可參照國家標(biāo)準(zhǔn)品、WHO標(biāo)準(zhǔn)品或其他級別的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行配制。質(zhì)檢項(xiàng)目：分裝前檢驗(yàn)，準(zhǔn)確性、劑量反應(yīng)曲線線性（定量產(chǎn)品）、質(zhì)控品測定值。3校準(zhǔn)品、陰陽性對照或質(zhì)控品的分裝 按工藝要求分裝校準(zhǔn)品、陰陽性對照或

14、質(zhì)控品。質(zhì)控項(xiàng)目：分裝前確認(rèn)試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量。4校準(zhǔn)品、陰陽性對照或質(zhì)控品（半成品）檢驗(yàn)對分裝后的校準(zhǔn)品、陰陽性對照或質(zhì)控品進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、分裝量、準(zhǔn)確性、劑量反應(yīng)曲線線性（定量產(chǎn)品）、質(zhì)控品測定值。(四) 化學(xué)發(fā)光底物的制備1底物緩沖液按底物緩沖液的配方配制，存放在2-8保存，并于有效期內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目：底物緩沖液配方，pH值。2化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）的配制分別按氧化劑和發(fā)光劑的配方在底物緩沖液中加入相應(yīng)的氧化劑和發(fā)光劑質(zhì)控項(xiàng)目：氧化劑和發(fā)光劑配方。質(zhì)檢項(xiàng)目：分裝前檢驗(yàn)，本底、發(fā)光強(qiáng)度。3化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）的分裝按工藝要求分裝化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）

15、。質(zhì)控項(xiàng)目：分裝前確認(rèn)試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。4化學(xué)發(fā)光底物（半成品）檢驗(yàn)對分裝后的化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、分裝量、本底、靈敏度、發(fā)光強(qiáng)度。（五）銪標(biāo)記物的制備針對不同的標(biāo)記生物原料，確定不同的標(biāo)記制備工藝，包括銪-DTTA與標(biāo)記生物原料的比例，標(biāo)記溫度和標(biāo)記時(shí)間、標(biāo)記得率的計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)等。在實(shí)際操作過程中要求嚴(yán)格按照SOP進(jìn)行操作（六）凍干各種凍干品都需建立各自的凍干工藝，凍干品外觀應(yīng)該呈現(xiàn)疏松的粉末狀固體，具有一定的形狀，復(fù)溶完全、迅速，呈澄清透明液體。（七）分裝、燈檢和貼簽分裝量用減重稱量法進(jìn)行測量，把質(zhì)量換算成體積后進(jìn)行分裝量的控制。燈檢是目測檢查各組分的色澤、

16、分裝量以及是否混濁、有雜質(zhì)等。（八）包裝根據(jù)試劑盒包裝SOP要求及說明書的要求，以流水線操作形式進(jìn)行包裝。包裝時(shí)應(yīng)嚴(yán)格檢查品名、批號、裝量，認(rèn)真核對各物料數(shù)量，并在關(guān)盒前進(jìn)行復(fù)核。四、質(zhì)量控制（一）半成品質(zhì)量控制1半成品抽樣檢驗(yàn)人員按試劑的批號，根據(jù)抽樣申請單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各組分，作號標(biāo)記、待檢。2質(zhì)控品的要求用于半成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括陽性樣品符合率，陰性樣品符合率，靈敏度（最低檢出量），特異性，定量范圍，定量曲線的線性，精密性，穩(wěn)定性等指標(biāo)，如具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的產(chǎn)品應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化的質(zhì)控品進(jìn)行檢驗(yàn)。如無國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），可采用企業(yè)質(zhì)控品，但企業(yè)參考品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不得低于國家藥品監(jiān)督管理部門已批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。3半成品檢驗(yàn)根據(jù)各個(gè)試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行半成品的檢驗(yàn)，檢驗(yàn)檢驗(yàn)指標(biāo)一般包括準(zhǔn)確性、靈敏度、特異性、精密性（批內(nèi)差）、相關(guān)性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。企業(yè)應(yīng)對每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性研究。試劑盒各組分應(yīng)留樣，28定期作穩(wěn)定性考核，同時(shí)作37熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（二）成品質(zhì)量控制1成品抽樣產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)