1、高效液相色譜法測定中華肝靈膠囊中人參皂苷Rg1的含量【摘要】目的：建立HLPC法對中華肝靈膠囊中三七和糖參中人參皂苷Rg1進行含量測定。方法：采用Agilent ExtendC18(5 m，4.6 mm250 mm)柱，乙腈0.05磷酸溶液（19：81）為流動相，流速1.0 mLmin，柱溫40，紫外線檢測波長203 nm。結果：本法線性關系良好，得回歸方程：Y=357.277X+4.665(r=0.9997)，平均加樣回收率為97.90%，RSD為0.87%。結論：本法操作簡便，定量準確，重現性強，為其質量控制提供一定的理論依據。 【關鍵詞】 色譜法 高壓液相 人參 分離和提取 中華肝靈膠囊

2、 中華肝靈膠囊，由柴胡、人參、厚樸、三七等12味中藥組成。原標準中僅有性狀、鑒別的描述，尚無含量測定的內容1，為提高藥品質量標準，保障用藥安全有效,筆者選擇方中名貴藥品三七和人參中人參皂苷Rg1作為含量測定指標，采用高效液相色譜法對其進行了含量測定方法學的研究25，結果定量準確，重現性強，可作為其質量控制方法。 1 實驗材料 Agilent 1100 高效液相色譜儀，人參皂苷Rg1對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供)，乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純。 2 實驗方法與結果 2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent ExtendC18(5 m，4.6 mm250 mm)；流動相為乙腈0.05磷

3、酸溶液(19：81)；流速1.0 mLmin；柱溫40；紫外檢測波長203 nm。理論板數按人參皂苷Rg1峰計算應不低于2500。 2.2 對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，加甲醇制成每毫升中含人參皂苷Rg1 0.5 mg的溶液，即得。 2.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項下的內容物，研細，精密稱取5 g，置索氏提取器中，加氯仿加熱回流3 h，棄去氯仿液，藥渣揮去氯仿，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，精密加入水飽和的正丁醇100 mL，密塞，放置過夜，超聲處理30 min(功率250 W，頻率50 KHz)，濾過，精密量取續濾液50 mL，加氨試液提取2次，每次25 mL，正丁

4、醇層蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。 2.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液5 L和供試品溶液10 L，注入液相色譜儀，測定，即得。 2.5 線性關系考察 精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，分別精密吸取2、6、10、14、18 L注入液相色譜儀，測定，以對照品的進樣量(g)為橫座標，色譜峰面積值為縱座標，得一近通過原點的直線，得回歸方程為：Y357.277X+4.665(r0.9997)，見表1。 表1 標準曲線數據 2.6 陰性對照試驗 為進一步考察實驗設計的合理性，取不含三七、糖參的陰性樣品適量，依擬訂方法測定，

5、結果所得色譜圖中，在與人參皂苷Rg1峰相應的保留時間附近無干擾峰檢出。 2.7 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、4、8、18、24 h按擬定色譜條件測定，RSD為2.68%，說明在24 h內，供試品溶液中人參皂苷Rg1的含量基本穩定。 2.8 精密度試驗 精密吸取本品供試品溶液10 L，注入液相色譜儀，重復進樣5次，測定其峰面積值為：1236.52、1202.14、1256.86、1216.22、1268.41，RSD為2.22%，說明所用儀器具良好的精密性。 2.9 重現性試驗 取同一供試品，依擬定方法獨立測定5次，Rg1(mg/粒)為0.55、0.54、0.54、0.54、0.55

6、，RSD為0.82%，說明本法重現性良好。 2.10 回收率試驗 精密稱取同法測定已知含量的供試品(Rg1含量為1.3891 mg/g)5份，精密加入人參皂苷Rg1(濃度為0.03425 mg/mL)100 mL進行測定，計算Rg1回收率，結果見表2。 表2 人參皂苷Rg1回收率試驗結果 結果顯示，人參皂苷Rg1平均回收率為97.90%，RSD為0.87%，表明Rg1回收率較高，準確度好。 2.11 樣品測定結果 依擬定方法測定樣品3批，含量分別為0.52 mg/粒、0.50 mg/粒、0.52 mg/粒。 3 討論 3.1 色譜柱的選擇 試驗比較了Techsphere ODS(250 mm4

7、.6 mm，5 m)和Agilent ExtendC18(5 m，4.6 mm250 mm)。結果，在流動相一致的情況下人參皂苷Rg1與其它色譜峰在兩個柱上分離效果均較好，但的出峰時間晚(N8366)，的出峰時間較快，故選擇Agilent ExtendC18柱為本法色譜柱。 3.2 提取方法的選擇 取本品，經氯仿脫脂后，水飽和正丁醇提取，蒸干，甲醇定容后進樣。水飽和正丁醇提取，經氨試液洗滌，蒸干，甲醇定容后，進樣。結果法人參皂苷Rg1與其它色譜峰分離較好，故選定為本法的提取方法。【參考文獻】 1中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準M.北京:人民衛生出版社,1964:36.2國家藥典委員會.中華人民共和國藥典M.北京:化學工業出版社,2005:711.3王浴生，鄧文龍，薛春生.中藥藥理與應用