1、食品藥品檢驗檢測中心分子生物學平臺建設項目書尊敬的領導：感謝貴單位給我機會向你們介紹分子生物學平臺建設方案，該分子平臺包含PCR電泳成像系統、熒光定量 PCR儀、微滴式數字PCR系統、全自動病原微 生物檢測系統、脈沖場電泳系統，以及酶標儀洗板機、蛋白純化系統、細胞分 選系統等，通過有機結合，技術互補，實現目前行業內最領先最專業的分子檢 測技術，為食品藥品安全提供整體的解決方案。該分子平臺可開展的應用與研究方向包括但不限于 ：1、病原微生物快速檢測、活菌定量檢測、致病菌溯源2、動物源性成分的定性與定量分析3、轉基因成分的定性與定量分析4、中藥材的真偽鑒別5、生物制品的檢測6、藥物安全評價7、檢測

2、新技術的研究及試劑盒的開發等目錄、分子平臺應用實例 31、食源性致病菌快速檢測 32、致病菌活菌定量檢測 73、致病菌溯源 104、動物源性成分檢測 145、肉類及肉類制品中的成分摻假和虛標 196、轉基因成分定性與定量檢測 237、中藥真偽鑒別 328、生物制品檢測 379、藥物安全評價 43、主要儀器介紹 441、PCR電泳成像系統442、CFX96 Touch型熒光定量 PCR系統453、QX200微滴式數字PCR系統464、iQ-Check全自動病原微生物檢測系統 475、脈沖場電泳系統 486、蛋白純化系統 497、細胞分選系統 50三、分子平臺推薦規劃 51四、分子平臺推薦配置 5

3、2、分子平臺應用實例1、食源性致病菌快速檢測背景介紹民以食為天，食品作為人們日常生活中不可或缺的一部分，它的安全關系到人類的生命安全和生存發 展，而食源性致病菌是威脅到當前食品安全的重要因素之一。雖然近年來由食源性致病菌引起食物中毒事 件的報道數量有所減少，但是據美國CDC公布的檢測報告顯示，實驗室檢出食源性菌如沙門氏菌的概率并沒有降低，因此食源性致病菌對公共健康的威脅仍不容小覷 1 。傳統檢測方法雖然是食源性致病菌檢測 的“金標準”，但因其操作繁瑣，需要耗費大量的人力、物力和時間，很難滿足基層日常檢測和執法需 求。特別在我國，一方面食品需求數量巨大，另一方面食品的加工生產卻呈規模小、零散等特

4、點，因此要 保證我國民眾的食品安全，提高抽樣覆蓋率是十分必要的。如果使用傳統的檢測方法，無論從時間上還是 經費上都無法滿足食品抽檢的需求。因此，有必要研發和普及一些檢測速度快、費用低、靈敏度高的快檢 技術來更好地應對和控制食源性疾病的爆發。檢測技術目前，文獻報道的食源性致病菌快檢技術有很多，例如：免疫學檢測技術、代謝學檢測技術、分子生 物學檢測技術、生物傳感器檢測技術等。不同的檢測技術各有特點，但是能滿足檢測速度快、費用低、靈 敏度高、操作簡單等特點，并適用于基層執法和檢測需求的技術主要為免疫學檢測技術和分子生物學檢測 技術。其中，免疫學檢測技術具有較好的特異性、靈敏性，檢測效率高、費用低，對

5、人員要求較低且不需要 大型儀器等特點，因此目前應用得最為廣泛。但是免疫學檢測技術也具有一定的局限性：例如當待測樣品 中含有目標物的競爭性物質時，很可能會出現假陽性的檢測結果；免疫學檢測對反應體系環境要求較高， 錯誤的選用試劑會直接造成檢測失敗等。隨著分子生物學技術的飛速發展，目前已經可以實現在分子水平上對食源性致病菌的鑒定。其中最為便捷、快速和適用廣泛的鑒定技術要數聚合酶鏈式反應技術(polymerase chain reaction ， PCR)。PCR技術起源于20世紀80年代，由美國的 Kary Mullis 發明。PCR技術主要是在體外合適條件下，以DNA或RNA)為模板，以一對人工合

6、成的寡核苷酸為引物在耐熱DNA聚合酶作用下特異性擴增目的DNA片段的技術。整個反應由 20-45 個循環組成，每個循環均包括高溫變性、低溫退火和適溫延伸3 個步驟。近年來，用PCR技術檢測食品中食源性致病菌的方法有很多種，如常規 PCR不對稱PCR免疫PCR套式PCR熒 光實時定量 PCR(qPCR、多重PCR逆轉錄 PCF等。2005年，范宏英等2運用多重 PCR技術成功的將沙 門氏菌、志賀氏菌、腸出血性大腸桿菌0157綠膿桿菌和副溶血弧菌 5種飲用水不得檢出的致病菌同時快速檢出。2010年，程曉燕等3建立的SYBR Green I實時熒光定量PCR檢測對蝦白斑綜合征病毒的方法， 取得了較好

7、的實現效果。目前，基于Taqma n探針的熒光實時定量 PCF檢測技術已經被廣泛應用于食品性致病菌的檢測中，并制訂了相應的檢驗標準。在 2016年新發布的食品安全國家標準 鮮(凍)畜、禽產 品(GB 2707-2016 )等127項食品安全國家標準中，同樣涉及到了 PCR及qPCR的檢測技術。因此， 在前增菌和選擇性增菌后，應用PCR技術可以對樣品中是否含有食源性致病菌進行檢測，這種檢測技術的優勢在于檢測效率高、特異性好以及靈敏度高等。表1基于PCF技術進行食品致病菌檢測的部分行標和國標標準編號標準名稱SN/T1059.7-2010SN/T 1870-2007SN/T 2415-2010GB

8、4789.6-2016GB 4789.12-2016GB 4789.42-2016進出口食品中沙門氏菌檢測方法實時熒光PCR法食品中致病菌檢測方法 實時熒光PCR法進出口乳及乳制品中沙門氏菌快速檢測方法實時熒光PCR法食品安全國家標準食品安全國家標準食品安全國家標準食品微生物學檢驗食品微生物學檢驗食品微生物學檢驗致瀉大腸埃希氏菌檢驗 肉毒梭菌及肉毒毒素檢驗 諾如病毒檢驗伯樂解決方案美國伯樂（Bio-Rad ）公司作為生命科學領域的領先者，一直致力為眾多科學家解決實際科研應用問 題，提供全套解決方案。所推出的iQ-Check全自動病原微生物檢測系統，包括核酸提取及經過認證的定量檢測試劑盒、自動化

9、工作站 （可選）、定量PCR儀器和專業的分析軟件，僅需一步增菌，在8-24小時內獲得結果，為致病菌快速、準確檢測提供了最佳解決方案，其具體特點如下：1）檢測項目：配套18種常見的致病菌檢測，包括：沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7、產志賀毒素大腸桿菌、對O族的大腸桿菌進行確認和鑒定（檢測 7個主要的血清型：O157:H7，O111，O26, O103, O145, O45, O121）、單增李斯特氏菌、李斯特菌屬、彎曲菌、腸炎沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌、阪崎 腸桿菌、軍團菌、嗜肺軍團菌和酒香酵母菌；其中軍團菌、嗜肺軍團菌和酒香酵母可進行定性和定量檢測；對市面上其他廠家各種致病菌檢測試劑盒兼容性好；

10、2）檢測兼容性：多種致病菌和檢測項目可同時同機進行；3）檢測性能：檢測中含內標質控和陽性對照，內部質控指示沒有假陰性反應，有效避免檢測的假陰性，所有檢測項目都為 Taqman探針；4）病原菌DNA提取：專利的提取流程至少提取100ul增菌液，無需離心，一步即可提取 DNA提取時間15分至30分鐘。且可整合最新的 Free DNA去除處理方案，有效去除食品中死菌DNA干擾，尤其適合經過輻照、巴氏消毒處理或以噬菌體作為加工助劑等類型的食品樣本；5）儀器開放性：此檢測儀為開放性操作平臺，廠家配備的檢測試劑盒在2-24小時檢測目標菌；非廠家配備試劑檢測時間可能會有所延長；6）檢測靈敏度：檢測食品僅需一

11、步增菌，檢出限wiCFU/25g；7）檢測通量：94個樣本加上2個對照；8）定量PCR儀特點：6通道檢測，配備觸控屏，可單機操作；9）定量PCR儀溫度控制：具有動態溫度梯度功能，可以同時運行8個不同的溫度；10）定量PCR儀溫控準確度：土 0.2 C；溫度均一性：土 0.4 C；11）定量PCR儀最高升降溫速率：2.5 C /秒；12）認證認可：軟件分析系統及試劑獲得AOAC AFNOR等國內、國際認證，結果自動判讀：直接讀取“有”或“無”的結果；13）擴展使用：除可用于致病菌檢測外，本系統還可應用于核酸定量、基因表達水平分析、基因突變檢測、GM血測及產物特異性分析、流行病學試驗等多種檢測、研

12、究領域；14）數據分析:可以對病原微生物進行定性和定量檢測，并可進行標準曲線的繪制，并有中文軟件及圖 1. Bio-Rad iQ-Check全自動病原微生物檢測系統3 .皿謹取葩DNA建立PCRfl系昇卜增免費升級;15）質控功能：每份測試的試劑內均自帶質控功能，儀器能直接確認每一份測試的試劑質量圖2. iQ-Check手動及自動病原微生物快速檢測流程Refere nee1 Bakthavathsalam P, Rajendran VK, Sara n U, et al. Im muno mag netic nan oparticle basedquantitative PCR for rapid detecti