1、精密度評(píng)估指導(dǎo)原則1 概述精密度是考察體外診斷試劑對(duì)同一樣本重復(fù)測(cè)定時(shí)能否得到相同實(shí)驗(yàn)結(jié)果的能力的指標(biāo)。精密度評(píng)價(jià)是質(zhì)量控制的重要內(nèi)容。同時(shí)，精密度評(píng)估資料也是是評(píng)價(jià)擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，是產(chǎn)品注冊(cè)所需的重要申報(bào)資料之一。本指導(dǎo)原則基于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法（試行）的有關(guān)要求、參考體外診斷試劑分析性能評(píng)估系列指導(dǎo)原則（征求意見稿）、EP05A2-定量檢測(cè)方法的精密度評(píng)估和臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)，并依據(jù)我公司具體情況，對(duì)定量檢測(cè)方法中精密度的評(píng)估和數(shù)據(jù)處理方法進(jìn)行了要求。其目的是為我公司研發(fā)人員和相關(guān)技術(shù)人員進(jìn)行定量檢測(cè)方法中精密度的評(píng)估提供原則性指導(dǎo)。同時(shí)也為用

2、戶驗(yàn)證某種方法和設(shè)備的精密度提供實(shí)驗(yàn)方案指導(dǎo)。這個(gè)過程對(duì)于某些無法獲得足夠的檢測(cè)材料的方法可能并不適用。2 基本概念精密度是指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度，即在規(guī)定條件下，獨(dú)立測(cè)試結(jié)果表現(xiàn)的一致程度。一般用標(biāo)準(zhǔn)偏差(Standard Deviation，SD)或變異系數(shù)（Coefficient of Variation，CV）表示。給定檢測(cè)程序的“精密度”可以根據(jù)特定的精密度條件進(jìn)行分類。“重復(fù)性”的檢測(cè)條件基本不變，常被稱為“批內(nèi)精密度”。“重現(xiàn)性”與條件改變有關(guān)，如：不同的時(shí)間、實(shí)驗(yàn)室、操作者和檢測(cè)系統(tǒng)（不同校準(zhǔn)品和試劑批號(hào)）下的精密度。2.1

3、 批內(nèi)精密度指在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一（組）操作員在同一儀器上，使用同一方法和同批號(hào)試劑，在一個(gè)批次實(shí)驗(yàn)中對(duì)同一測(cè)試樣品（常用校準(zhǔn)品）重復(fù)測(cè)定10次或以上測(cè)量結(jié)果的精密度。表現(xiàn)為“重復(fù)性”，也被稱為“序列內(nèi)精密度”和“分析內(nèi)精密度”2.2 批間精密度指在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一（組）操作員在同一儀器上，使用同一方法和同一批號(hào)試劑，在一段時(shí)間內(nèi)（一般不超過一天）對(duì)同一測(cè)試樣品（常用校準(zhǔn)品）分別做10個(gè)或以上試驗(yàn)批次的測(cè)量結(jié)果的精密度。也被稱為“分析間精密度”2.3 天間精密度指在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一（組）操作員在同一儀器上，使用同一方法和同一批號(hào)試劑，對(duì)同一測(cè)試樣品（常用校準(zhǔn)品）每天做1次測(cè)量，累積測(cè)10天

4、或以上測(cè)量結(jié)果的精密度。其表現(xiàn)為“重現(xiàn)性”，與時(shí)間條件改變有關(guān)，2.4 不同批號(hào)試劑盒間精密度指在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一（組）操作員在同一儀器上，使用同一方法和10批或以上批號(hào)試劑，在一個(gè)批次實(shí)驗(yàn)中對(duì)同一測(cè)試樣品（常用校準(zhǔn)品）分別測(cè)量1次測(cè)量結(jié)果的精密度。2.5 總精密度將穩(wěn)定的常用校準(zhǔn)品每天做2次實(shí)驗(yàn)，間隔時(shí)間不少于2小時(shí)，每次對(duì)樣品做雙份檢測(cè)，共做20個(gè)工作日實(shí)驗(yàn)。將運(yùn)行內(nèi)、運(yùn)行間和天間的精密度以方差形式相加，可得到樣品均值下具有的總標(biāo)準(zhǔn)差，由它可客觀地反映真正的總精密度。3 精密度評(píng)估的基本原則3.1 操作者必須熟悉方法和/或儀器工作原理，了解并掌握儀器的操作步驟和各項(xiàng)注意事項(xiàng)，能在評(píng)估階段

5、維持儀器的可靠和穩(wěn)定。3.2 用于評(píng)估試驗(yàn)的樣品一般常采用臨床實(shí)驗(yàn)室收集的穩(wěn)定和冷凍貯存的血清(漿)庫；當(dāng)實(shí)驗(yàn)室收集的樣品不穩(wěn)定或不易得到時(shí)，也可考慮使用穩(wěn)定的、以蛋白質(zhì)為基質(zhì)的商品物質(zhì)，如校準(zhǔn)品或質(zhì)控品。3.3 評(píng)估精密度時(shí)，應(yīng)至少評(píng)估二個(gè)濃度水平樣本的精密度。當(dāng)二個(gè)濃度的精密度有顯著差異時(shí)，建議增加為三個(gè)濃度。所選樣本濃度應(yīng)在測(cè)量范圍內(nèi)有醫(yī)學(xué)意義，即至少有一個(gè)濃度在醫(yī)學(xué)決定水平(medical decision levels)左右。不要為了得到較小的精密度，都選用較高值的樣品，甚至超出測(cè)量范圍。也不應(yīng)選用靠近最低檢出限的樣品，此時(shí)所得的精密度往往偏大。相當(dāng)多的檢驗(yàn)項(xiàng)目低值常無實(shí)際臨床意義，

6、但有少數(shù)檢驗(yàn)項(xiàng)目，其低值也有臨床價(jià)值，此時(shí)就需要評(píng)估有判斷價(jià)值的低值精密度，適用時(shí)，可進(jìn)行功能靈敏度的評(píng)估。如沒有醫(yī)學(xué)決定水平，可在參考區(qū)間上限左右選一個(gè)濃度。此外，再根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的性質(zhì)在線性區(qū)間內(nèi)選擇另一個(gè)值。如與廠商或文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的精密度進(jìn)行比較，所選濃度應(yīng)與被比較精密度的濃度相接近。否則，有可能得出不恰當(dāng)?shù)慕Y(jié)論。4 精密度評(píng)估的方法和數(shù)據(jù)處理4.1 批內(nèi)精密度的評(píng)估4.1.1 評(píng)估方法：使用同一批號(hào)的試劑和校準(zhǔn)物,每次使用六點(diǎn)定標(biāo)。在一個(gè)工作日三次實(shí)驗(yàn)中對(duì)樣本進(jìn)行重復(fù)測(cè)定，每次進(jìn)行10次重復(fù)測(cè)定，進(jìn)行三次實(shí)驗(yàn)，以兩次或以上結(jié)果無顯著差異，做進(jìn)一步分析，求三次實(shí)驗(yàn)CV均值。4.1.2 質(zhì)量控制

7、：檢測(cè)時(shí)應(yīng)同時(shí)至少測(cè)一個(gè)質(zhì)控品。當(dāng)質(zhì)控品結(jié)果超出規(guī)定的失控限，不論實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否滿意都應(yīng)棄去不用，重新進(jìn)行試驗(yàn)，要保存所有的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)和失控處理記錄。 4.1.3數(shù)據(jù)收集：在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中是否有由于偶然差錯(cuò)引起的離群值(outliers)，可用下述離群值的標(biāo)準(zhǔn)；以已收集的10個(gè)或以上數(shù)據(jù)計(jì)算出總均值和標(biāo)準(zhǔn)差，任何結(jié)果和總均值的差值超過4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差時(shí)，可認(rèn)為本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可疑，并進(jìn)行至少2次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。以兩次或以上結(jié)果一致的數(shù)據(jù)作為有效數(shù)據(jù)。在進(jìn)行這種批內(nèi)精密度評(píng)估實(shí)驗(yàn)時(shí)，一次只能有一個(gè)離群值，當(dāng)離群值超過1個(gè)時(shí)，應(yīng)懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時(shí)，應(yīng)不用此次試驗(yàn)數(shù)據(jù)。檢查問題和解

8、決問題后重新開始新的評(píng)估實(shí)驗(yàn)。4.1.4數(shù)據(jù)的記錄：將所收集到的數(shù)據(jù)記錄在表1：表1 批內(nèi)精密度實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)記錄序號(hào)第一次第二次第三次質(zhì)控品1質(zhì)控品2質(zhì)控品1質(zhì)控品2質(zhì)控品1質(zhì)控品212.910均值4.1.5 單次分析內(nèi)精密度估計(jì)值的計(jì)算求出均值：計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算變異系數(shù) n為一次實(shí)驗(yàn)的重復(fù)測(cè)定次數(shù)，這里n=104.2 評(píng)估分析間精密度4.2.1評(píng)估方法：使用同一批號(hào)的試劑和校準(zhǔn)物,每次使用六點(diǎn)定標(biāo)。在一個(gè)工作日內(nèi)分別做10個(gè)實(shí)驗(yàn)批次的測(cè)量，每次測(cè)量重復(fù)三次。4.2.2 質(zhì)量控制：檢測(cè)時(shí)應(yīng)同時(shí)至少測(cè)一個(gè)質(zhì)控品。當(dāng)質(zhì)控品結(jié)果超出規(guī)定的失控限，不論實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否滿意都應(yīng)棄去不用，重新進(jìn)行試驗(yàn)，要保存所

9、有的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)和失控處理記錄。 4.2.3 數(shù)據(jù)收集：在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中是否有由于偶然差錯(cuò)引起的離群值(outliers)，可用下述離群值的標(biāo)準(zhǔn)；從已收集的10個(gè)或以上數(shù)據(jù)計(jì)算出總均值和標(biāo)準(zhǔn)差，任何結(jié)果和總均值的差值超過4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差時(shí)，可認(rèn)為本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可疑，并進(jìn)行至少2次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。以兩次或以上結(jié)果一致的數(shù)據(jù)作為有效數(shù)據(jù)。在進(jìn)行這種批間精密度評(píng)估實(shí)驗(yàn)時(shí)，一次只能有一個(gè)離群值，當(dāng)離群值超過1個(gè)時(shí)，應(yīng)懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時(shí)，應(yīng)不用此次試驗(yàn)數(shù)據(jù)。檢查問題和解決問題后重新開始新的評(píng)估實(shí)驗(yàn)。4.2.4數(shù)據(jù)的記錄：將所收集到的數(shù)據(jù)記錄在表2：表2分析間精密度實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)記錄實(shí)驗(yàn)

10、批次質(zhì)控品1質(zhì)控品2結(jié)果1結(jié)果2結(jié)果3結(jié)果1結(jié)果2結(jié)果312.910均值4.2.5批次間精密度估計(jì)值的計(jì)算求出總體均值：，一次實(shí)驗(yàn)的均值計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算變異系數(shù)n為實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的批次，k為每次實(shí)驗(yàn)的重復(fù)次數(shù)，這里n=10，k=3。4.3 評(píng)估天間精密度4.3.1 評(píng)估方法：使用同一批號(hào)的試劑和校準(zhǔn)物,每次使用六點(diǎn)定標(biāo)。在一個(gè)工作日早、中、晚各進(jìn)行一次實(shí)驗(yàn)，每次實(shí)驗(yàn)中對(duì)樣本各測(cè)定1次，累計(jì)10個(gè)工作日結(jié)果還是每天進(jìn)行一次實(shí)驗(yàn)，每次實(shí)驗(yàn)對(duì)樣本重復(fù)測(cè)定3次，累計(jì)10天？。以兩次或以上結(jié)果無顯著差異，做進(jìn)一步分析，求三次實(shí)驗(yàn)CV均值。4.3.2 質(zhì)量控制：檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)同時(shí)每批至少測(cè)一個(gè)質(zhì)控品。當(dāng)質(zhì)控品結(jié)果超出規(guī)

11、定的失控限，不論實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否滿意都應(yīng)棄去不用，重新進(jìn)行試驗(yàn)，要保存所有的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)和失控處理記錄。4.3.3 數(shù)據(jù)收集：在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯(cuò)引起的離群值(outliers)，可用下述離群值的標(biāo)準(zhǔn)；從已收集的10個(gè)或以上數(shù)據(jù)計(jì)算出總均值和標(biāo)準(zhǔn)差，任何結(jié)果和總均值的差值超過4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差時(shí)，可認(rèn)為本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可疑，并進(jìn)行至少2次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。以兩次或以上結(jié)果一致的數(shù)據(jù)作為有效數(shù)據(jù)。在進(jìn)行天間精密度評(píng)估實(shí)驗(yàn)時(shí)，一次一批次只能有一個(gè)離群值，當(dāng)離群值超過1個(gè)時(shí)，應(yīng)懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時(shí)，應(yīng)不用此次試驗(yàn)數(shù)據(jù)。檢查問題和解決問題后重新開始新的評(píng)估實(shí)驗(yàn)。4.3.4 數(shù)據(jù)的記

12、錄：將所收集到的數(shù)據(jù)記錄在表3：表3 批間精密度實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)記錄日期第一次實(shí)驗(yàn)第二次實(shí)驗(yàn)第三次實(shí)驗(yàn)質(zhì)控品1質(zhì)控品2質(zhì)控品1質(zhì)控品2質(zhì)控品1質(zhì)控品212.910均值4.3.5天間精密度估計(jì)值的計(jì)算求出均值：計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算變異系數(shù) n為累計(jì)實(shí)驗(yàn)的天數(shù)，這里n=10，4.4 評(píng)估不同批號(hào)試劑盒間精密度4.4.1 評(píng)估方法：使用同一種類、10個(gè)批號(hào)試劑，一種校準(zhǔn)物,每次使用六點(diǎn)定標(biāo)。在一個(gè)工作日一次實(shí)驗(yàn)中用不同批號(hào)試劑對(duì)樣本進(jìn)行10次測(cè)定，進(jìn)行三次實(shí)驗(yàn)，以兩次或以上結(jié)果無顯著差異，做進(jìn)一步分析，求三次實(shí)驗(yàn)CV均值。4.4.2 質(zhì)量控制：檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)同時(shí)每批至少測(cè)一個(gè)質(zhì)控品。當(dāng)質(zhì)控品結(jié)果超出規(guī)定的失控限，不

13、論實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否滿意都應(yīng)棄去不用，重新進(jìn)行試驗(yàn)，要保存所有的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)和失控處理記錄。 4.4.3數(shù)據(jù)收集：在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯(cuò)引起的離群值(outliers)，可用下述離群值的標(biāo)準(zhǔn)；從已收集的10個(gè)或以上數(shù)據(jù)計(jì)算出總均值和標(biāo)準(zhǔn)差，任何結(jié)果和總均值的差值超過4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差時(shí)，可認(rèn)為本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可疑，并進(jìn)行至少2次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。以兩次或以上結(jié)果一致的數(shù)據(jù)作為有效數(shù)據(jù)。在進(jìn)行不同批號(hào)試劑盒間精密度評(píng)估實(shí)驗(yàn)時(shí)，一次一批次只能有一個(gè)離群值，當(dāng)離群值超過1個(gè)時(shí)，應(yīng)懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時(shí)，應(yīng)不用此次試驗(yàn)數(shù)據(jù)。檢查問題和解決問題后重新開始新的評(píng)估實(shí)驗(yàn)。4.4.4數(shù)據(jù)的記錄：

14、將所收集到的數(shù)據(jù)記錄在表4表4不同批號(hào)試劑間精密度實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)記錄批號(hào)第一次實(shí)驗(yàn)第二次實(shí)驗(yàn)第三次實(shí)驗(yàn)質(zhì)控品1質(zhì)控品2質(zhì)控品1質(zhì)控品2質(zhì)控品1質(zhì)控品212.910均值4.4.5不同批號(hào)試劑盒間精密度估計(jì)值的計(jì)算求出均值：計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算變異系數(shù)4.5 評(píng)估總精密度4.5.1 評(píng)估方法：每天做2個(gè)批次的測(cè)試，每批測(cè)試時(shí)，對(duì)同一樣品作雙份測(cè)量，共做20天。評(píng)估結(jié)束時(shí)共有40對(duì)，即80個(gè)測(cè)試結(jié)果。從40批次測(cè)量中雙份結(jié)果的差值求出運(yùn)行內(nèi)精密度。從所有80個(gè)數(shù)據(jù)計(jì)算出批間精密度。將穩(wěn)定的常用質(zhì)控品每天做2次實(shí)驗(yàn)，間隔時(shí)間不少于2小時(shí)，每次對(duì)樣品做雙份檢測(cè)，共做20個(gè)工作日實(shí)驗(yàn)。將運(yùn)行內(nèi)、天間、運(yùn)行間的精密

15、度以方差形式相加，可得到樣品均值下具有的總標(biāo)準(zhǔn)差，由它可客觀地反映真正的總精密度。在實(shí)施此項(xiàng)評(píng)估工作時(shí)，必須由同一個(gè)或一組操作者在同一臺(tái)儀器上進(jìn)行，應(yīng)該使用相同的校準(zhǔn)品、相同種類和批號(hào)的試劑。所用時(shí)間不得少于20個(gè)工作日，這樣所測(cè)到的精密度能更好地反映出該臨床實(shí)驗(yàn)室定量測(cè)量方法在一段時(shí)間內(nèi)的理想或最適的穩(wěn)定性。 在每一批次測(cè)量中，必須同時(shí)測(cè)量質(zhì)控品，以保證結(jié)果是可靠的，數(shù)據(jù)能夠采用。4.5.2數(shù)據(jù)的收集要收集到足夠有效數(shù)據(jù)(至少為80個(gè)數(shù)據(jù))。除補(bǔ)充由于質(zhì)控失控而增加的測(cè)試外，應(yīng)在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯(cuò)引起的離群值(outlier)，可用下述剔除值的標(biāo)準(zhǔn)；從實(shí)施段已收集的4

16、0對(duì)均值的數(shù)據(jù)計(jì)算出總均值和標(biāo)準(zhǔn)差，出現(xiàn)下列任何一種情況都可認(rèn)為是離群值：（1）任何一對(duì)均值和總均值的差超過4倍標(biāo)準(zhǔn)差（2）任何一對(duì)中二個(gè)結(jié)果的絕對(duì)差值超過4倍標(biāo)準(zhǔn)差離群值不用于精密度的計(jì)算。在剔除后應(yīng)再增加檢驗(yàn)次數(shù)，以保證至少有40批次，80個(gè)數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算。注：任何一次實(shí)驗(yàn)的剔除值不能超過總測(cè)量數(shù)的2.5%。當(dāng)超過時(shí)，應(yīng)懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時(shí)應(yīng)不用此次試驗(yàn)數(shù)據(jù)，重新開始新的試驗(yàn)。4.5.3數(shù)據(jù)的記錄：將所收集到的數(shù)據(jù)記錄在表5。表5 精密度實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)記錄序號(hào)日期第一次實(shí)驗(yàn)第二次實(shí)驗(yàn)結(jié)果1結(jié)果2均值結(jié)果1結(jié)果2均值1219204.5.4運(yùn)行內(nèi)精密度（repeatbility estimimation）的標(biāo)準(zhǔn)差評(píng)估按表5要求對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)一步計(jì)算，將結(jié)果填入表6表6精密度實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)計(jì)算日第一次實(shí)驗(yàn)第二次實(shí)驗(yàn)（結(jié)果1-結(jié)果2）2（結(jié)果1-結(jié)果2）2121920合計(jì)(3)(4)利用表6中的結(jié)果依據(jù)下列公式計(jì)算批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差sr：I = 檢測(cè)運(yùn)行的總天數(shù)（通常為20）j = 每天檢測(cè)運(yùn)行的次數(shù)（1或2）xij1 = 第i天，第j次檢測(cè)，第1個(gè)測(cè)定的結(jié)果xij2 = 第i天，第j次檢測(cè)，第2個(gè)測(cè)定的結(jié)果4.5.5運(yùn)行間和天間標(biāo)準(zhǔn)差的計(jì)算，將上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄在表7中。表7：次間和天間精密度實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)記錄第一次第二次結(jié)果1結(jié)果2結(jié)果1結(jié)果