1、    邊緣系創傷反應性髓鞘堿性蛋白 表達與超微結構觀察?        摘要目的：探討創傷反應性中樞神經系統(CNS)間接受損的可能機制。方法：借助犬雙后肢低、高速投射物致傷模型，觀察了邊緣系下丘腦、海馬及顳頂區腦組織髓鞘堿性蛋白(MBP)表達及超微結構改變。結果：傷后8 h低速組下丘腦MBPmRNA表達增強(P0.01)；高速組下丘腦、海馬MBP含量明顯增高(P0.01)，MBPmRNA表達增強(P0.01)；超微結構改變以高速組下丘腦、海馬為著，多集中于神經元

2、、神經纖維及毛細血管內皮細胞變化。結論：邊緣系下丘腦、海馬選擇性易損，可能為創傷反應性CNS異常的重要病理生理基礎。主題詞大腦邊緣系統；創傷和損傷；致腦炎堿性蛋白質類；超微結構 The expression of trauma reactive myelin basic protein and observation of ultrastructure in limbic systemWANG Qing-Song,JIA Li,OU-Yang Yao，CHEN Man-EDepartment of Neurology,Chengdu General Hospital,Chengdu(61008

3、3)Abstract AIM:To explore the probable mechanism of trauma reactive effects on the central nervous system(CNS).METHODS:On the basis of stress model with different velocity steel bullet injury to hind thighs of dogs,the expression of myelin basic protein(MBP) in limbic system,temporoparietal gray and

4、 white matters,and the early changes of their ultrastructure were observed.RESULTS：The expression of MBP-mRNA in hypothalamus in low speed group was significantly enhanced(P0.05),MBP levels markedly increased(P0.01) and the expression of MBP-mRNA was enhanced remarkably (P0.01) in hypothalamus and h

5、ippocampus in high speed group 8 hours after trauma; and the early pathomorphism changes displayed some alterations in neurons, nerve fibers and capillary endothelium cells of limbic system in high grouop. CONCLUSION:Hypothalamus and hippocampus were vulnerably damaged in spite of no direct injury t

6、o head,and these may play a consistent pathophysiological role in the development of trauma reactive central nervous system disturbance.MeSHLimbic system;Wounds and injuries;Encephalitogenic basic proteins; Ultrastructure不少患者創傷雖未直接傷及大腦，卻出現了一定程度的反應性神經、精神異常。部分傷員至創傷后期出現包括中樞神經系統(central nervous system,C

7、NS)在內的多臟器功能衰竭1，2。認為可能與CNS間接受損有關3，4。鑒于目前探討創傷反應性CNS異常的病理生理研究甚少，本實驗借助犬雙后肢低、高速投射物致傷模型，對邊緣系下丘腦、海馬及顳頂區灰、白質髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表達與釋放進行定量分析，結合其早期超微結構觀察，為創傷后神經、精神異常等CNS反應提供實驗依據。材料與方法一、實驗動物及模型復制：成年健康家犬22只，雌雄不拘，體重10.514.0 kg。傷前隨機分為對照組(6只)低速組和高速組(各8只)。用戊巴比妥鈉(30 mg/kg,iv)麻醉。1.03 g鋼珠(?5.56mm)室內靶道致傷，低

8、、高速組撞擊速度分別為625 m/s、1368 m/s。瞄準點在犬雙后肢大腿肌肉發達處，盡量避免傷及股骨、大血管及神經干。傷后局部加壓包扎止血。對照組除不致傷外，其余處理與致傷組相同。二、觀察指標：對照、低速、高速3組動物分別隨機取4、6、6只于傷后8 h活殺，取下丘腦、海馬、顳頂區灰質、白質等處腦組織，分裝，液氮保存。其余6只于傷后8 h以3%戊二醛頸內動脈灌注(壓力控制于14.516.0 kPa)，取下丘腦、海馬，一分HE染色；另一分包埋后超薄切片，雙鉛染色，JEM100SX透射電鏡觀察。用MBP酶聯免疫吸附試劑盒(華西醫科大學提供)測定腦組織勻漿MBP含量。以地高辛配基隨機引物法標記MB

9、PcRNA探針(600 bp)，采用一步快速熱酚抽提法提取腦組織總RNA，按經典方法進行斑點雜交；用像分析系統測定各點平均光密度，求其積分光密度值，以反映各點MBPmRNA相對含量。三、統計處理：所有數據均以±s表示。應用SPRM軟件(第三軍醫大學)進行雙因素方差分析。結果(一)一般情況：高速組在投射物撞擊速度、撞擊能量、組織吸收能量等方面明顯高于低速組(P0.01)。低速組傷后1h內、高速組傷后6h內直腸溫均顯著低于傷前及對照組(P0.01)；傷后8 h動態觀察心率、呼吸、血壓、CSF壓力等變化均不明顯(P0.05)。(二)腦組織MPB變化：低速組下丘腦MBP明顯高于對照組(P0.

10、05)；高速組下丘腦、海馬MBP顯著高于其它兩組(P0.01)(表1)。(三)腦組織MBPmRNA斑點雜交：斑點雜交膜經像分析表明低速組下丘腦MBPmRNA表達顯著高于對照組(P0.05)，高速組下丘腦、海馬明顯高于其它兩組(P0.01)(表2)。表1下丘腦、海馬、顳頂區腦組織區MBP含量Tab 1Contents of MBP in hypothalamus,hippocampus and temporoparietal grey and white matters(g/g brain tissues,±s)GroupnHypothalamus HippocampusGrey ma

11、tter White matterControl41.05±0.350.85±0.210.40±0.095.19±1.25Low speed64.00±0.83*1.29±0.380.51±0.145.58±1.40High speed630.18±7.56*4.25±0.92*0.65±0.177.01±1.63? *P0.05， ?*P0.01， vs control group; P0.01， vslow speed group 表2MBPmRNA斑點雜交信號積分光密度

12、值Tab 2Integral optical density of MBP-mRNA dot blot hybridization signal(±s)GroupnHypothalamus HippocampusGrey matter White matterControl40.51±0.140.42±0.120.24±0.084.91±1.34Low speed63.40±1.22*1.16±0.420.52±0.115.28±1.52High speed67.58±2.45*4.23

13、7;1.42*0.91±0.176.48±2.13 ? *P0.05， ?*P0.01， vs control group； P0.01， vs low speed group(四)CNS超微結構改變：病變主要以邊緣系下丘腦、海馬為主，高速組神經元可見核仁碎裂，呈塊狀邊聚，核膜皺縮、呈鋸齒狀突起，胞質內細胞器減少，內質網、線粒體空泡變性，間質水腫(1)；毛細血管內皮細胞腫脹，突入管腔內，腔內紅細胞瘀積，神經纖維髓鞘變性，呈蔥皮樣改變(2)。低速組神經元結構改變不明顯，僅見輕度間質水腫與髓鞘變性，線粒體腫脹較輕。顳頂區灰、白質未見明顯病變。 Fig 1Nucleolar ma

14、rgination in high speed group TEM×3 0001高速組核仁碎裂邊聚Fig 2swelling of capillary endothelium cell,and myelinic degeneration as lamellar structure in high speed group TEM×3 0002高速組毛細血管內皮細胞腫脹，髓鞘變性呈蔥皮樣結構討論鑒于創傷反應性神經、精神異常的原因尚未確定5，本研究采用1.03 g鋼珠標準致傷模型，創傷效應較穩定；選用高低兩種致傷速度，產生兩種不同強度的應激模型；以此探討創傷反應性CNS異常的病理

15、生理基礎。MBP是組成CNS髓鞘的主要蛋白質之一，約占其蛋白質總量的30%6。MBP含量測定，是標志CNS有無實質性損害較特異的監測指標，其含量高低在一定程度上反映損傷的范圍及程度7，8。我們以往的研究發現，肢體嚴重致傷后CSF、血清MBP釋放增多，提示雖未直接傷及大腦，但CNS可能有不同程度、不同范圍的應激性損傷9。本實驗結果顯示，傷后下丘腦、海馬MBP不同程度增高，尤以下丘腦明顯，提示上述腦區可能間接受損； 斑點雜交結果顯示該處腦組織MBPmRNA表達增強，提示由于局部肢體嚴重致傷，導致邊緣系下丘腦、海馬神經組織受損，致MBP釋放增多，促使MBPmRNA代償性表達增強，以修復損傷組織；且隨

16、所施損傷強度不同，MBPmRNA表達水平亦不同，提示所致的CNS的反應不同。CNS早期超微結構改變進一步揭示，肢體嚴重致傷，邊緣系下丘腦、海馬確有不同程度、不同范圍受損，而顳頂區腦組織則未見明顯病變，提示此二腦區可能為創傷反應性CNS易損區。下丘腦、海馬為邊緣系統的重要組成部分。下丘腦控制著機體的多種重要機能活動，是內臟活動、內分泌與情緒行為之間維持平衡的中樞；海馬為古皮質，與近期記憶、情緒反應、某些內臟活動有關；此二腦區受損，可能引起邊緣系統功能失衡，導致一系列神經-內分泌功能紊亂及某些內臟、情緒活動障礙。本實驗結果提示，邊緣系下丘腦、海馬選擇性易損，可能為創傷反應性CNS異常的重要病理生理

17、基礎。*“九五”軍隊醫藥衛生科研基金(No.96Q021)資助作者單位：王慶松歐陽堯成都軍區總醫院神經內科(成都 610083)嘉莉成都軍區總醫院骨科陳曼娥第三軍區大學大坪醫院神經內科參考文獻1Grossman M.Received support and psychological adjustment in critically-injuried patients and their family.J Neurosci Nurs,1995,27(1):11.2Savic J,Lazarov A,Malicevic Z,et al.Relationship between early neu

18、roendocrine response and severity of war injury according to the red cross classification.Vojnosanit Pregi,1995,52(2)：107.3Suneson A,Hansson HA,Seeman T.Pressure wave injuries to the nervous system caused by high-energy missile extremity impact:part .Distant effects on the central nervous system-a light and electron microscopic study on pigs.J Trauma,1990,30:295.4Hadfield JM,Yates DW,Kirkman E