1、高效液相色譜分析高效液相色譜分析基本要點：基本要點：1 1、了解高效液相色譜法的優點及適用范圍；、了解高效液相色譜法的優點及適用范圍；2 2、了解高效液相色譜儀的主要部件及高效液相色、了解高效液相色譜儀的主要部件及高效液相色譜法基本流程；譜法基本流程；3 3、理解常用檢測器的原理、適用的分析對象及適、理解常用檢測器的原理、適用的分析對象及適用范圍；用范圍；4 4、理解各種分離方式的原理及選擇原則。、理解各種分離方式的原理及選擇原則。第一節第一節 概述概述 以高壓液體為流動相的液相色譜分析法稱高效液相色譜以高壓液體為流動相的液相色譜分析法稱高效液相色譜法（法（HPLC）。）。 液相色譜法開始階段

2、是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相，稱為經典液相色譜法，此方法壓下用液位差輸送流動相，稱為經典液相色譜法，此方法柱效低、時間長（常有幾個小時）。柱效低、時間長（常有幾個小時）。HPLCHPLC是在經典液相是在經典液相色譜法的基礎上，于色譜法的基礎上，于6060年代后期引入了氣相色譜理論而年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。它與經典液相色譜法的區別是填料顆粒迅速發展起來的。它與經典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又

3、稱高壓液相色譜法。又因分析速度快壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜法。又因分析速度快而稱為高效液相色譜法。而稱為高效液相色譜法。二、二、HPLC的特點和優點的特點和優點1、HPLC特點：特點：（1）高壓）高壓-壓力可達壓力可達150300Kg/cm2。色譜柱。色譜柱每米降壓為每米降壓為75Kg/cm2以上。以上。（2）高速）高速-流速為流速為0.110.0ml/min。（3）高效）高效-可達可達5000塔板每米。在一根柱中同時塔板每米。在一根柱中同時分離成份可達分離成份可達100種。種。（4）高靈敏度）高靈敏度-紫外檢測器靈敏度可達紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時消耗樣品少。同時消耗樣品少

4、。2、HPLC與經典液相色譜相比有以下優點：與經典液相色譜相比有以下優點：（1 1）速度快）速度快- -通常分析一個樣品在通常分析一個樣品在151530min30min，有些樣，有些樣品甚至在品甚至在5min5min內即可完成。內即可完成。 （2 2）分辨率高）分辨率高- -可選擇固定相和流動相以達到最佳分離可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果。效果。 （3 3）靈敏度高）靈敏度高- -紫外檢測器可達紫外檢測器可達0.01ng0.01ng，熒光和電化學，熒光和電化學檢測器可達檢測器可達0.1pg0.1pg。 （4 4）柱子可反復使用）柱子可反復使用- -用一根色譜柱可分離不同的化合用一根色譜

5、柱可分離不同的化合物。物。 （5 5）樣品量少，容易回收）樣品量少，容易回收- -樣品經過色譜柱后不被破壞，樣品經過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備?？梢允占瘑我唤M分或做制備。三、三、HPLC與與GC比較比較 HPLC的保留值等色譜分析有關術語以及分配系數、分的保留值等色譜分析有關術語以及分配系數、分配比、塔板高度、分離度、選擇性以及所用基本理論（塔配比、塔板高度、分離度、選擇性以及所用基本理論（塔板理論與速率理論）與板理論與速率理論）與GC一致。但一致。但HPLCHPLC由于自身的一些由于自身的一些特點，與特點，與GCGC比還是有一定差別，主要有以下幾方面：比還是有一定差別，主要有

6、以下幾方面：1 1、應用范圍不同、應用范圍不同 GC：適于能氣化、熱穩定性好、且沸點較低的樣品；但適于能氣化、熱穩定性好、且沸點較低的樣品；但對高沸點、揮發性差、熱穩定性差、離子型及高聚物的樣對高沸點、揮發性差、熱穩定性差、離子型及高聚物的樣品，尤其對大多數生化樣品不可檢測占有機物的品，尤其對大多數生化樣品不可檢測占有機物的20%20%。 HPLC：適于溶解后能制成溶液的樣品（包括有機介質溶適于溶解后能制成溶液的樣品（包括有機介質溶液），不受樣品揮發性和熱穩定性的限制，對分子量大、液），不受樣品揮發性和熱穩定性的限制，對分子量大、難氣化、熱穩定性差的生化樣品及高分子和離子型樣品均難氣化、熱穩定

7、性差的生化樣品及高分子和離子型樣品均可檢測，用途廣泛，占有機物的可檢測，用途廣泛，占有機物的80%80%。 GC：流動相為惰性，氣體組分與流動相無親合作用力，流動相為惰性，氣體組分與流動相無親合作用力，只與固定相有相互作用。只與固定相有相互作用。2 2、流動相不同、流動相不同HPLC：流動相為液體，流動相與組分間有親合作用力，流動相為液體，流動相與組分間有親合作用力，能提高柱的選擇性、改善分離度，對分離起正向作用。且能提高柱的選擇性、改善分離度，對分離起正向作用。且流動相種類較多，選擇余地廣，改變流動相極性和流動相種類較多，選擇余地廣，改變流動相極性和pHpH值也值也對分離起到調控作用，當選用

8、不同比例的兩種或兩種以上對分離起到調控作用，當選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相也可以增大分離選項擇性。液體作為流動相也可以增大分離選項擇性。3 3、操作條件不同、操作條件不同 GC：加溫操作。加溫操作。 HPLC：室溫；高壓（液體粘度大，峰展寬?。?。室溫；高壓（液體粘度大，峰展寬?。?。四四HPLC主要類型主要類型 通常將液相色譜法按分離機理分成吸附色譜法、分配通常將液相色譜法按分離機理分成吸附色譜法、分配色譜法、離子色譜法和凝膠色譜法四大類。其實，有些色譜法、離子色譜法和凝膠色譜法四大類。其實，有些液相色譜方法并不能簡單地歸于這四類。液相色譜方法并不能簡單地歸于這四類。類類型型主要分

9、離機理主要分離機理主要分析對象或應用領域主要分析對象或應用領域吸附色譜吸附色譜吸附能，氫鍵吸附能，氫鍵異構體分離、族分離，制備異構體分離、族分離，制備分配色譜分配色譜疏水分配作用疏水分配作用各種有機化合物的分離、分析與制備各種有機化合物的分離、分析與制備凝膠色譜凝膠色譜溶質分子大小溶質分子大小高分子分離，分子量及其分布的測定高分子分離，分子量及其分布的測定離子交換色譜離子交換色譜庫侖力庫侖力無機離子、有機離子分析無機離子、有機離子分析手性色譜手性色譜立體效應立體效應手性異構體分離，藥物純化手性異構體分離，藥物純化親和色譜親和色譜生化特異親和力生化特異親和力蛋白、酶、抗體分離，生物和醫藥分析蛋白

10、、酶、抗體分離，生物和醫藥分析第二節第二節 影響色譜峰擴展及色譜分離的因素影響色譜峰擴展及色譜分離的因素一、影響色譜峰形擴展的各種因素一、影響色譜峰形擴展的各種因素與與GC不同，不同，HPLC有其特點，因而其速率理論的表述方有其特點，因而其速率理論的表述方式也有區別：式也有區別：ELSMMSMHHHHHH渦流擴散渦流擴散傳質阻力傳質阻力固定相固定相流動流動流動流動相相滯留流動滯留流動相相分子擴散分子擴散GC:HOLC:CuuBAH1 1、渦流擴散項、渦流擴散項HEHE=A=2dp式中式中,為填充不均勻因子，當固定相為為填充不均勻因子，當固定相為4050m時時,值為值為12；dp為填充固定相的平

11、均粒徑，顆粒小時，可降低為填充固定相的平均粒徑，顆粒小時，可降低A。2 2、分子擴散項、分子擴散項HL2MLrDBHuu式中，式中，r為柱中填料間的彎曲因子為柱中填料間的彎曲因子(r0.6)；DM為溶質在液體為溶質在液體流動相中的擴散系數流動相中的擴散系數(DM10-5cm2/s)；u為液體流動相在填充為液體流動相在填充柱中的平均線速柱中的平均線速(cms)。 由于由于DM數值很小，因此數值很小，因此HL項對總板高的貢獻也很小，在項對總板高的貢獻也很小，在大多數情況下可假設大多數情況下可假設HL00。3 3、傳質阻力項、傳質阻力項C u可分為固定相傳質阻力項可分為固定相傳質阻力項Hs和流動相傳

12、質阻力項。和流動相傳質阻力項。 （1 1） 固定相傳質阻力項固定相傳質阻力項Hs對液液色譜可表示為：對液液色譜可表示為：22(1)fSLdkHqukD式中：式中：q為常數為常數q =2/3=2/3（對均勻液膜，對大孔固定相（對均勻液膜，對大孔固定相 q =1/2=1/2，對球形非多孔固定相，對球形非多孔固定相q =1/30=1/30）；）；k為容量因子；為容量因子；df為固定液液膜厚度；為固定液液膜厚度；DL為溶質在固定液中的擴散系數，為溶質在固定液中的擴散系數，cm2/s；u為液體流動相在柱中的平均線速，為液體流動相在柱中的平均線速，cm/s。對液固色譜可表示為：對液固色譜可表示為：2222

13、1(1)SadkkHtutukk式中：式中：ta為樣品分子在液體流動相中的平均停留時間；為樣品分子在液體流動相中的平均停留時間；td為樣品分子被吸附在固定相表面的平均停留時間；為樣品分子被吸附在固定相表面的平均停留時間；k、u同前。同前。(2)(2)流動相傳質阻力項流動相傳質阻力項 又分為移動流動相的傳質阻力項又分為移動流動相的傳質阻力項HMM和滯留流動相的傳和滯留流動相的傳質阻力項質阻力項HSM移動流動相的傳質阻力對板高的貢獻可表示為：移動流動相的傳質阻力對板高的貢獻可表示為：2pMMMdHuD 式中，式中，為色譜柱的填充因子，對短的、內徑粗的柱子為色譜柱的填充因子，對短的、內徑粗的柱子數值

14、較小；數值較??；dp為固定相的平均粒徑；為固定相的平均粒徑；DM為溶質在液體流為溶質在液體流動相中的擴散系數動相中的擴散系數( (DM10-5cm2/s) )u同前。同前。滯留流動相的傳質阻力對板高的貢獻可表示為：滯留流動相的傳質阻力對板高的貢獻可表示為：2220(1)30(1)(1)pSMMdkHukrD式中，式中，為孔洞中滯留流動相在總流動相中占有的百分數；為孔洞中滯留流動相在總流動相中占有的百分數；r0 0為顆粒內部孔洞的彎曲因子；為顆粒內部孔洞的彎曲因子；k、dp、DM、u同前。同前。二、范第姆特方程的表達二、范第姆特方程的表達222222022(1)(1)30(1)(1)fpMpIM

15、pMddrDkHdquuukDDdkukrD 在高效液相色譜中，對液液分配色譜，范第姆特方程的在高效液相色譜中，對液液分配色譜，范第姆特方程的完整表達形式為：完整表達形式為：簡化表達式為：簡化表達式為：BHACuu三、方程的討論三、方程的討論HPLC與與GC的的H-u曲線比較：曲線比較： 1、在、在HPLC中，由于使用固定相中，由于使用固定相與流動相與與流動相與GC不同，不同，H-u曲線的曲線的最低點遠低于最低點遠低于GC。 2 2、HPLC中，流動相粘度遠遠中，流動相粘度遠遠 4 4、由低的、由低的uopt值可看出值可看出H-u曲線具有平穩的斜率，表明采曲線具有平穩的斜率，表明采用高的液體流

16、動相流速時，色譜柱效無明顯的損失，這也用高的液體流動相流速時，色譜柱效無明顯的損失，這也是是HPLC的快速分離的基礎。的快速分離的基礎。 3 3、由低的、由低的Hmin值可看出，值可看出，HPLC色譜柱要比色譜柱要比GC填充柱有填充柱有更高的柱效。更高的柱效。高于氣相色譜，縱向擴散對峰型的影響很小。高于氣相色譜，縱向擴散對峰型的影響很小。B/uuDrdkkuDduDdkkqdHCuAHMpMpIfp0222222)1)(1 (30)1 ()1 (2 從速率方程式可以看出，要獲得高效能的色譜從速率方程式可以看出，要獲得高效能的色譜分析，一般可采用以下措施：分析，一般可采用以下措施：進樣時間要短。

17、進樣時間要短。填料粒度要小。填料粒度要小。改善傳質過程。改善傳質過程。過高的吸附作用力可導致嚴重的峰過高的吸附作用力可導致嚴重的峰展寬和拖尾，甚至不可逆吸附。展寬和拖尾，甚至不可逆吸附。適當的流速。適當的流速。以以H對對u作作圖，則有一最佳線速度圖，則有一最佳線速度uopt，在此線速度時，在此線速度時，H最小。一般最小。一般在液相色譜中，在液相色譜中，uopt很?。ù蠛苄。ù蠹s約0.030.1mm/s），在這樣），在這樣的線速度下分析樣品需要很長的線速度下分析樣品需要很長時間，一般來說都選在時間，一般來說都選在1mm/s的條件下操作。的條件下操作。較小的檢測器死體積。較小的檢測器死體積。第三節

18、第三節 高效液相色譜儀高效液相色譜儀 典型的高效液相色譜儀是由典型的高效液相色譜儀是由高壓輸液系統高壓輸液系統、進樣系統進樣系統、分離系統分離系統、檢測系統檢測系統和和色譜數據處理系統色譜數據處理系統（色譜工作站）（色譜工作站）五個基本部分和相關輔助部件構成。五個基本部分和相關輔助部件構成。一、一、 高壓輸液泵及梯度洗脫裝置高壓輸液泵及梯度洗脫裝置1 1、高壓輸液泵、高壓輸液泵 高壓輸液泵是液相色譜儀的關鍵部件，其作用是將流動相高壓輸液泵是液相色譜儀的關鍵部件，其作用是將流動相以穩定的流速或壓力輸送到色譜系統。輸液泵的穩定性直以穩定的流速或壓力輸送到色譜系統。輸液泵的穩定性直接關系到分析結果的

19、重復性和準確性。接關系到分析結果的重復性和準確性。 基本要求：基本要求：流量穩定，其流量穩定，其RSD應應0.5%，這對定性定，這對定性定量的準確性至關重要；流量準確可調，量的準確性至關重要；流量準確可調，0.110ml/min，輸出壓力高，一般應能達到輸出壓力高，一般應能達到150300kg/cm2；液流穩；液流穩定，無脈動；定，無脈動；死體積小，要求小于死體積小，要求小于0.5ml。密封性能好，。密封性能好，耐腐蝕。耐腐蝕。 泵的使用及注意事項：泵的使用及注意事項： 防止任何固體微粒進入泵體，因為塵埃或其它任何防止任何固體微粒進入泵體，因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和

20、單向閥，因此應雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先過濾除去流動相中的任何固體微粒，泵的入口都應連預先過濾除去流動相中的任何固體微粒，泵的入口都應連接砂濾棒。接砂濾棒。流動相不應含有任何腐蝕性物質，含有緩沖液的流流動相不應含有任何腐蝕性物質，含有緩沖液的流動相不應保留在泵內，尤其是在停泵過夜或更長時間的情動相不應保留在泵內，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下。如果將含緩沖液的流動相留在泵內，由于蒸發或泄況下。如果將含緩沖液的流動相留在泵內，由于蒸發或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細晶體，漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細晶體，這些晶體將和上述固體微粒

21、一樣損壞密封環和柱塞等。這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環和柱塞等。因此，用后必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于因此，用后必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑（如對于反相鍵合硅膠色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑（如對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇固定相，可以是甲醇或甲醇- -水）。水）。 2 2、梯度洗脫裝置、梯度洗脫裝置 梯度洗脫類似梯度洗脫類似GCGC的程序升溫。是使流動相中含有兩種的程序升溫。是使流動相中含有兩種或兩種以上不同極性的溶劑，在洗脫過程中連續或間斷改或兩種以上不同極性的溶劑，在洗脫過程中連續或間斷改變流動相的組成，以調節它的極

22、性，使每個流出的組分都變流動相的組成，以調節它的極性，使每個流出的組分都有合適的容量因子，并使樣品中的所有組分可在最短的分有合適的容量因子，并使樣品中的所有組分可在最短的分析時間內，以適用的分離度獲得圓滿的選擇性分離。析時間內，以適用的分離度獲得圓滿的選擇性分離。 泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完，否則泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完，否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環，最終產生漏空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環，最終產生漏液。液。 輸液泵的工作壓力決不要超過規定的最高壓力，否輸液泵的工作壓力決不要超過規定的最高壓力，否則會使高壓密封環變形，產生漏液。則會使高壓密封環變形

23、，產生漏液。 流動相應該先脫氣，以免在泵內產生氣泡，影響流流動相應該先脫氣，以免在泵內產生氣泡，影響流量的穩定性，如果有大量氣泡，量的穩定性，如果有大量氣泡，泵就無法正常工作。泵就無法正常工作。內梯度：內梯度：利用兩臺高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按利用兩臺高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定比例送入梯度混合室，混合后進入色譜柱。一定比例送入梯度混合室，混合后進入色譜柱。外梯度：外梯度：一臺高壓泵，通過比例調節閥，將兩種或多種不一臺高壓泵，通過比例調節閥，將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。 在進行梯度洗脫時，由于多種溶劑混合，

24、而且組成不斷在進行梯度洗脫時，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視： 要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。有些溶劑在一定比例內混溶，超出范圍度洗脫的流動相。有些溶劑在一定比例內混溶，超出范圍后就不互溶，使用時更要引起注意。當有機溶劑和緩沖液后就不互溶，使用時更要引起注意。當有機溶劑和緩沖液混合時，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別混合時，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。小心。 梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的梯度洗脫

25、所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現性。進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫，以辨認重現性。進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫，以辨認溶劑雜質峰，因為弱溶劑中的雜質富集在色譜柱頭后會被溶劑雜質峰，因為弱溶劑中的雜質富集在色譜柱頭后會被強溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防強溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時產生氣泡。止混合時產生氣泡。 混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時常出現壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小，當二者以常出現壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小，當二者以相近比例混合時粘度增大很多，此時的

26、柱壓大約是甲醇或相近比例混合時粘度增大很多，此時的柱壓大約是甲醇或水為流動相時的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓水為流動相時的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的最大壓力。力超過輸液泵或色譜柱能承受的最大壓力。 每次梯度洗脫之后必須對色譜柱進行再生處理，使每次梯度洗脫之后必須對色譜柱進行再生處理，使其恢復到初始狀態。需讓其恢復到初始狀態。需讓10301030倍柱容積的初始流動相流倍柱容積的初始流動相流經色譜柱，使固定相與初始流動相達到完全平衡。經色譜柱，使固定相與初始流動相達到完全平衡。二、進樣裝置二、進樣裝置 通常使用耐高壓的六通閥進樣裝置。通常使用耐高壓的六

27、通閥進樣裝置。 六通閥的進樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種：六通閥的進樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種： 用部分裝液法用部分裝液法 進樣量應不大于定量環體積的進樣量應不大于定量環體積的50%50%（最多（最多7575），并要），并要求每次進樣體積準確、相同。此法進樣的準確度和重復性求每次進樣體積準確、相同。此法進樣的準確度和重復性決定于注射器取樣的熟練程度，而且易產生由進樣引起的決定于注射器取樣的熟練程度，而且易產生由進樣引起的峰展寬。峰展寬。 用完全裝液法用完全裝液法 進樣量應不小于定量環體積的進樣量應不小于定量環體積的5 51010倍（最少倍（最少3 3倍），倍），這樣才能完全置換定量

28、環內的流動相，消除管壁效應，確這樣才能完全置換定量環內的流動相，消除管壁效應，確保進樣的準確度及重復性。保進樣的準確度及重復性。六通閥使用注意事項：六通閥使用注意事項： 樣品溶液進樣前必須用樣品溶液進樣前必須用0.45nm0.45nm濾膜過濾，以減少微濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。粒對進樣閥的磨損。 轉動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則轉動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；流動相受阻，使泵內壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞再轉到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。 為防止緩沖鹽和樣品殘

29、留在進樣閥中，每次分析結束為防止緩沖鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結束后應沖洗進樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的后應沖洗進樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。溶劑沖洗，再用水沖洗。三、色譜柱三、色譜柱 色譜柱是實現分離的核心部件，要求柱效高、柱容量大色譜柱是實現分離的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能穩定。柱性能與柱結構、填料特性、填充質量和使和性能穩定。柱性能與柱結構、填料特性、填充質量和使用條件有關。用條件有關。柱效以理論塔板數計，大約可達柱效以理論塔板數計，大約可達516萬萬/m。對于一般。對于一般的分析只需的分析只需5000塔板數的柱效；對于同系物

30、分析，只要塔板數的柱效；對于同系物分析，只要500即可；對于較難分離物質對則可采用高達即可；對于較難分離物質對則可采用高達2萬的柱子，萬的柱子，因此一般因此一般1030cm左右的柱長就能滿足復雜混合物分析左右的柱長就能滿足復雜混合物分析的需要。的需要。柱子內徑一般為柱子內徑一般為16mm。常用的標準柱型是內徑為。常用的標準柱型是內徑為4.6或或3.9mm，長度為，長度為1530cm的直形不銹鋼柱。填料的直形不銹鋼柱。填料顆粒度顆粒度510m。發展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。發展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降色譜柱的正確使用和維護十分重

31、要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。要注意下列問題，以維護色譜柱。 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，進樣時閥的轉動不能過緩。調節流速時應該緩慢進行，進樣時閥的轉動不能過緩。 應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色

32、譜中，不應應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變為全部是水，反之亦然。直接從有機溶劑改變為全部是水，反之亦然。 一般說來色譜柱不能反沖，只有生產者指明該柱可一般說來色譜柱不能反沖，只有生產者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。迅速降低柱效。 選擇使用適宜的流動相（尤其是選擇使用適宜的流動相（尤其是pHpH），以避免固定相），以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預

33、合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠先被硅膠“飽和飽和”，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。 避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內，避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。以而且應該經常更換。 經常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質。經常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時，對流路系統中

34、流動相的置換應以相混溶的在進行清洗時，對流路系統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的2020倍左倍左右，即常規分析需要右，即常規分析需要505075ml75ml。四、檢測器四、檢測器作用：用來連續監測經色譜柱分離后的流出物的作用：用來連續監測經色譜柱分離后的流出物的組成和含量變化的裝置。組成和含量變化的裝置。目前最常用的檢測器主要目前最常用的檢測器主要有：紫外紫外-可見檢測器可見檢測器熒光檢測器熒光檢測器示差折光檢測器示差折光檢測器電化學檢測器電化學檢測器質譜檢測器質譜檢測器1 1、紫外吸收檢測器、紫外吸收檢測器 紫外吸

35、收檢測器是目前紫外吸收檢測器是目前HPLC中應用最廣泛的檢測器。它中應用最廣泛的檢測器。它靈敏度高，線性范圍寬，對流速和溫度變化不敏感，可用靈敏度高，線性范圍寬，對流速和溫度變化不敏感，可用于梯度洗脫，它要求被檢測樣品組分有紫外吸收，使用的于梯度洗脫，它要求被檢測樣品組分有紫外吸收，使用的洗脫液無紫外吸收或紫外吸收波長與被測組分紫外吸收波洗脫液無紫外吸收或紫外吸收波長與被測組分紫外吸收波長不同，在被測組分紫外吸收波長處沒有吸收。長不同，在被測組分紫外吸收波長處沒有吸收。光源光源檢測室檢測室光柵光柵二極管陣二極管陣列檢測器列檢測器2 2、熒光檢測器、熒光檢測器 是一種高靈敏度、有選擇是一種高靈敏

36、度、有選擇性的檢測器，可檢測能產生性的檢測器，可檢測能產生熒光的化合物。某些不發熒熒光的化合物。某些不發熒光的物質可通過化學衍生化光的物質可通過化學衍生化生成熒光衍生物，再進行熒生成熒光衍生物，再進行熒光檢測。其最小檢測濃度可光檢測。其最小檢測濃度可達達0.10.1ngml，適用于痕量，適用于痕量分析；一般情況下熒光檢測分析；一般情況下熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約器的靈敏度比紫外檢測器約高高2 2個數量級，但其線性范個數量級，但其線性范圍不如紫外檢測器寬圍不如紫外檢測器寬。熒光檢測器結構示意圖光源光源檢測器檢測器濾光片濾光片檢測室檢測室3.3.示差折光檢測器示差折光檢測器 是基于連續測定樣

37、品流路是基于連續測定樣品流路和參比流路之間折射率的變和參比流路之間折射率的變化來測定樣品含量的。光從化來測定樣品含量的。光從一種介質進入另一種介質時，一種介質進入另一種介質時，由于兩種物質的折射率不同由于兩種物質的折射率不同就會產生折射。只要樣品組就會產生折射。只要樣品組分與流動相的折光指數不同，分與流動相的折光指數不同，就可被檢測，二者相差愈大，就可被檢測，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范靈敏度愈高，在一定濃度范圍內檢測器的輸出與溶質濃圍內檢測器的輸出與溶質濃度成正比。度成正比。 對所有溶質都有響應，某些不能用選擇性檢測器檢測的組對所有溶質都有響應，某些不能用選擇性檢測器檢測的組分，如

38、高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等，可用示差檢測分，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等，可用示差檢測器檢測。器檢測。 電化學檢測器主要有安培、極譜、庫侖、電位、電導等電化學檢測器主要有安培、極譜、庫侖、電位、電導等檢測器，屬選擇性檢測器，可檢測具有電活性的化合物。檢測器，屬選擇性檢測器，可檢測具有電活性的化合物。目前它已在各種無機和有機陰陽離子、生物組織和體液的目前它已在各種無機和有機陰陽離子、生物組織和體液的代謝物、食品添加劑、環境污染物、生化制品、農藥及醫代謝物、食品添加劑、環境污染物、生化制品、農藥及醫藥等的測定中獲得了廣泛的應用。其中，電導檢測器在離藥等的測定中獲得了廣泛的應用。其中，電導檢

39、測器在離子色譜中應用最多。子色譜中應用最多。電導儀電導儀電極電極電電極極電導檢測器電導檢測器4 4、電化學檢測器、電化學檢測器5 5、與檢測器有關的故障及其排除、與檢測器有關的故障及其排除 （1 1）流動池內有氣泡）流動池內有氣泡 如果有氣泡連續不斷地通過流動池，將使噪音增大，如如果有氣泡連續不斷地通過流動池，將使噪音增大，如果氣泡較大，則會在基線上出現許多線狀果氣泡較大，則會在基線上出現許多線狀 峰峰 ，這是由于，這是由于系統內有氣泡，需要對流動相進行充分的除氣，檢查整個系統內有氣泡，需要對流動相進行充分的除氣，檢查整個色譜系統是否漏氣，再加大流量驅除系統內的氣泡。如果色譜系統是否漏氣，再加

40、大流量驅除系統內的氣泡。如果氣泡停留在流動池內，也可能使噪音增大，可采用突然增氣泡停留在流動池內，也可能使噪音增大，可采用突然增大流量的辦法除去氣泡（最好不連接色譜柱）；或者啟動大流量的辦法除去氣泡（最好不連接色譜柱）；或者啟動輸液泵的同時，用手指緊壓流動池出口，使池內增壓，然輸液泵的同時，用手指緊壓流動池出口，使池內增壓，然后放開。可反復操作數次，但要注意不使壓力增加太多，后放開?？煞磸筒僮鲾荡危⒁獠皇箟毫υ黾犹?，以免流動池破裂。以免流動池破裂。 （2 2）流動池被污染）流動池被污染 無論參比池或樣品池被污染，都可能產生噪音或基線無論參比池或樣品池被污染，都可能產生噪音或基線漂移?？?/p>

41、以使用適當溶劑清洗檢測池，要注意溶劑的互溶漂移?？梢允褂眠m當溶劑清洗檢測池，要注意溶劑的互溶性；如果污染嚴重，就需要依次采用性；如果污染嚴重，就需要依次采用1mol/L1mol/L硝酸、水和硝酸、水和新鮮溶劑沖洗，或者取出池體進行清洗、更換窗口。新鮮溶劑沖洗，或者取出池體進行清洗、更換窗口。 （3 3）光源燈出現故障）光源燈出現故障 紫外或熒光檢測器的光源燈使用到極限或者不能正常紫外或熒光檢測器的光源燈使用到極限或者不能正常工作時，可能產生嚴重噪音，基線漂移，出現平頭峰等異工作時，可能產生嚴重噪音，基線漂移，出現平頭峰等異常峰，甚至使基線不有回零。這時需要更換光源燈。常峰，甚至使基線不有回零。

42、這時需要更換光源燈。 （4 4）倒峰）倒峰 倒峰的出現可能是檢測器的極性接反了，改正后即可變倒峰的出現可能是檢測器的極性接反了，改正后即可變成正峰。用示差折光檢測器時，如果組分的折光指數低于成正峰。用示差折光檢測器時，如果組分的折光指數低于流動相的折光指數，也會出現倒峰，這就需要選擇合適的流動相的折光指數，也會出現倒峰，這就需要選擇合適的流動相。如果流動相中含有紫外吸收的雜質，使用紫外檢流動相。如果流動相中含有紫外吸收的雜質，使用紫外檢測器時，無吸收的組分就會產生倒峰，因此必須用高純度測器時，無吸收的組分就會產生倒峰，因此必須用高純度的溶劑作流動相。在死時間附近的尖銳峰往往是由于進樣的溶劑作流

43、動相。在死時間附近的尖銳峰往往是由于進樣時的壓力變化，或者由于樣品溶劑與流動相不同所引起時的壓力變化，或者由于樣品溶劑與流動相不同所引起的。的。 第三節第三節液相色譜分離原理液相色譜分離原理 高效液相色譜法按分離機制的不同分為液固吸附色譜法、高效液相色譜法按分離機制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法、離子液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排阻色譜法。對色譜法及分子排阻色譜法。 1 1、液固色譜法、液固色譜法 使用固體吸附劑，被分離組分在色譜柱上分離原理是根使用固體吸附劑，被分離組分在色譜柱上分離原理是根據固定相對組分吸附力大小不

44、同而分離。分離過程是一個據固定相對組分吸附力大小不同而分離。分離過程是一個吸附解吸附的平衡過程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，吸附解吸附的平衡過程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度粒度5 50 0m。 適用于分離分子量適用于分離分子量20020010001000的組分，大多數用于非離的組分，大多數用于非離子型化合物，離子型化合物易產生拖尾。常用于分離同分子型化合物，離子型化合物易產生拖尾。常用于分離同分異構體。異構體。2 2液液色譜法液液色譜法 使用將特定的液態物質涂于擔體表面，或化學鍵合于擔使用將特定的液態物質涂于擔體表面，或化學鍵合于擔體表面而形成的固定相，體表面而形成的固定相，分離原理是根

45、據被分離的組分在分離原理是根據被分離的組分在流動相和固定相中溶解度不同而分離。流動相和固定相中溶解度不同而分離。分離過程是一個分分離過程是一個分配平衡過程。配平衡過程。 涂布式固定相應具有良好的惰性；流動相必須預先用固涂布式固定相應具有良好的惰性；流動相必須預先用固定相飽和，以減少固定相從擔體表面流失；溫度的變化和定相飽和，以減少固定相從擔體表面流失；溫度的變化和不同批號流動相的區別常引起柱子的變化；另外在流動相不同批號流動相的區別常引起柱子的變化；另外在流動相中存在的固定相也使樣品的分離和收集復雜化。由于涂布中存在的固定相也使樣品的分離和收集復雜化。由于涂布式固定相很難避免固定液流失，現在已

46、很少采用?，F在多式固定相很難避免固定液流失，現在已很少采用?，F在多采用的是化學鍵合固定相，如采用的是化學鍵合固定相，如C18C18、C8C8、氨基柱、氰基柱、氨基柱、氰基柱和苯基柱。和苯基柱。 液液色譜法按固定相和流動相的極性不同可分為正相色液液色譜法按固定相和流動相的極性不同可分為正相色譜法譜法(NPC)(NPC)和反相色譜法和反相色譜法(RPC)(RPC)。正相色譜法：正相色譜法： 采用極性固定相采用極性固定相( (如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相) )；流動；流動相為相對非極性的疏水性溶劑相為相對非極性的疏水性溶劑( (烷烴類如正已烷、環已烷烴類如正已烷、環已烷）

47、，常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調節組分的保留時間。節組分的保留時間。常用于分離中等極性和極性較強的化常用于分離中等極性和極性較強的化合物合物( (如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。 反相色譜法：反相色譜法： 一般用非極性固定相（如一般用非極性固定相（如C C1818、C C8 8）；流動相為水或緩）；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時間。水互溶的有機溶劑以調節保留時間。適用于分離非極性和

48、適用于分離非極性和極性較弱的化合物。極性較弱的化合物。RPCRPC在現代液相色譜中應用最為廣泛，在現代液相色譜中應用最為廣泛，據統計，它占整個據統計，它占整個HPLCHPLC應用的應用的80%80%左右。左右。 隨著柱填料的快速發展，反相色譜法的應用范圍逐漸擴隨著柱填料的快速發展，反相色譜法的應用范圍逐漸擴大，現已應用于某些無機樣品或易解離樣品的分析。為控大，現已應用于某些無機樣品或易解離樣品的分析。為控制樣品在分析過程的解離，常用緩沖液控制流動相的制樣品在分析過程的解離，常用緩沖液控制流動相的pHpH值。值。正相色譜法與反相色譜法比較正相色譜法與反相色譜法比較 正相色譜法正相色譜法 反相色譜

49、法反相色譜法 固定相極性固定相極性高中高中中低中低 流動相極性流動相極性低中低中中高中高 組分洗脫次序組分洗脫次序極性小先洗出極性小先洗出極性大先洗出極性大先洗出 從上面可看出，當極性為中等時正相色譜法與反相色譜從上面可看出，當極性為中等時正相色譜法與反相色譜法沒有明顯的界線（如氨基鍵合固定相）。法沒有明顯的界線（如氨基鍵合固定相）。3 3、離子交換色譜法、離子交換色譜法 固定相是離子交換樹脂，常用苯乙烯與二乙烯交聯形固定相是離子交換樹脂，常用苯乙烯與二乙烯交聯形成的聚合物骨架，在表面未端芳環上接上羧基、磺酸基成的聚合物骨架，在表面未端芳環上接上羧基、磺酸基（稱陽離子交換樹脂）或季氨基（陰離子

50、交換樹脂）。被（稱陽離子交換樹脂）或季氨基（陰離子交換樹脂）。被分離組分在色譜柱上分離原理分離組分在色譜柱上分離原理是樹脂上可電離離子與流動是樹脂上可電離離子與流動相中具有相同電荷的離子及被測組分的離子進行可逆交換，相中具有相同電荷的離子及被測組分的離子進行可逆交換，根據各離子與離子交換基團具有不同的電荷吸引力而分根據各離子與離子交換基團具有不同的電荷吸引力而分離。離。 緩沖液常用作離子交換色譜的流動相。被分離組分在離緩沖液常用作離子交換色譜的流動相。被分離組分在離子交換柱中的保留時間除跟組分離子與樹脂上的離子交換子交換柱中的保留時間除跟組分離子與樹脂上的離子交換基團作用強弱有關外，它還受流動

51、相的基團作用強弱有關外，它還受流動相的pHpH值和離子強度值和離子強度影響。影響。pHpH值可改變化合物的解離程度，進而影響其與固值可改變化合物的解離程度，進而影響其與固定相的作用。流動相的鹽濃度大，則離子強度高，不利于定相的作用。流動相的鹽濃度大，則離子強度高，不利于樣品的解離，導致樣品較快流出。樣品的解離，導致樣品較快流出。 離子交換色譜法主要用于分析有機酸、氨基酸、多肽及離子交換色譜法主要用于分析有機酸、氨基酸、多肽及核酸。核酸。4 4、離子對色譜法、離子對色譜法 是液液色譜法的分支。它是根據被測組分離子與離子對是液液色譜法的分支。它是根據被測組分離子與離子對試劑離子形成中性的離子對化合

52、物后，在非極性固定相中試劑離子形成中性的離子對化合物后，在非極性固定相中溶解度增大，從而使其分離效果改善。主要用于分析離子溶解度增大，從而使其分離效果改善。主要用于分析離子強度大的酸堿物質。強度大的酸堿物質。 分析堿性物質常用的離子對試劑為烷基磺酸鹽，如戊分析堿性物質常用的離子對試劑為烷基磺酸鹽，如戊烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉等。另外高氯酸、三氟乙酸也可與烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉等。另外高氯酸、三氟乙酸也可與多種堿性樣品形成很強的離子對。多種堿性樣品形成很強的離子對。 分析酸性物質常用四丁基季銨鹽，如四丁基溴化銨、分析酸性物質常用四丁基季銨鹽，如四丁基溴化銨、四丁基銨磷酸鹽。四丁基銨磷酸鹽。 離子對色譜

53、法常用離子對色譜法常用C C1818，流動相為甲醇，流動相為甲醇- -水或乙腈水或乙腈- -水，水水，水中加入中加入3 310mmol/L10mmol/L的離子對試劑，在一定的的離子對試劑，在一定的pHpH值范值范圍內進行分離。被測組分保留時間與離子對性質、濃度、圍內進行分離。被測組分保留時間與離子對性質、濃度、流動相組成及其流動相組成及其pHpH值、離子強度有關值、離子強度有關。5 5、排阻色譜法、排阻色譜法 固定相是有一定孔徑的多孔性填料，流動相是可以溶解固定相是有一定孔徑的多孔性填料，流動相是可以溶解樣品的溶劑。小分子量的化合物可以進入孔中，滯留時間樣品的溶劑。小分子量的化合物可以進入孔

54、中，滯留時間長；大分子量的化合物不能進入孔中，直接隨流動相流出。長；大分子量的化合物不能進入孔中，直接隨流動相流出。它利用分子篩對分子量大小不同的各組分排阻能力的差異它利用分子篩對分子量大小不同的各組分排阻能力的差異而完成分離。常用于分離高分子化合物，如組織提取物、而完成分離。常用于分離高分子化合物，如組織提取物、多肽、蛋白質、核酸等。多肽、蛋白質、核酸等。第四節第四節 HPLCHPLC固定相固定相 上節講了高效液相色譜法的主要類型及其分離原理，本上節講了高效液相色譜法的主要類型及其分離原理，本節介紹一下各種類型液相色譜所用的固定相。節介紹一下各種類型液相色譜所用的固定相。一、液一、液液色譜法

55、及離子對色譜法固定相液色譜法及離子對色譜法固定相 與與GLCGLC類似，類似，LLCLLC的固定相也是在擔體上涂漬一層固定的固定相也是在擔體上涂漬一層固定液構成，或使用化學鍵合相。液構成，或使用化學鍵合相。1 1、擔體、擔體 所用的擔體可分為如下幾類：所用的擔體可分為如下幾類： (1)(1)全多孔型擔體：全多孔型擔體： HPLC早期使用的擔體與早期使用的擔體與GC類似，是顆粒均勻的多孔類似，是顆粒均勻的多孔球體，如有氧化鋁、氧化硅、硅藻土等制成的球體，如有氧化鋁、氧化硅、硅藻土等制成的100100m全全多孔型擔體。多孔型擔體。其缺點是其缺點是： 填料的不規則性和較寬的粒度范圍會導致填充不易均勻

56、，填料的不規則性和較寬的粒度范圍會導致填充不易均勻，柱效低；填料孔徑分布不一，并存在柱效低；填料孔徑分布不一，并存在“裂隙裂隙”在填料深在填料深孔中形成滯留液體（液坑），溶質分子在深孔中擴散和孔中形成滯留液體（液坑），溶質分子在深孔中擴散和傳質慢，使色譜峰變寬，柱效下降。傳質慢，使色譜峰變寬，柱效下降。 HPLCHPLC在在2020世紀世紀7070年代初開始使用年代初開始使用10m10m全多孔全多孔型擔體，它是由型擔體，它是由nmnm級的硅膠微粒堆積而成級的硅膠微粒堆積而成為為5m5m或稍或稍大的全多孔小球。大的全多孔小球。其優點是：其優點是： 顆粒小而均勻，傳質快顆粒小而均勻，傳質快（距離短

57、），柱效高。（距離短），柱效高。(2)(2)表層多孔型擔體（薄殼型微珠擔體）：表層多孔型擔體（薄殼型微珠擔體）： 它是直徑為它是直徑為303040m40m的實心核的實心核( (玻璃微珠玻璃微珠 ) )，表層上，表層上附有一層厚度約為附有一層厚度約為1 1 2m2m多孔表面多孔表面( (多孔硅膠多孔硅膠 ) )。其優點是：其優點是： 孔穴淺（固定相僅為表面的一薄層），傳質速度快，易孔穴淺（固定相僅為表面的一薄層），傳質速度快，易于填充均勻，柱效高。于填充均勻，柱效高。其缺點是：其缺點是： 柱子容量低、需要配用高靈敏檢測器。柱子容量低、需要配用高靈敏檢測器。 這種擔體目前應這種擔體目前應用較為普遍

58、。用較為普遍。 2 2、固定液、固定液 液液液色譜流動相和固定相都是液體，因此要求兩相要液色譜流動相和固定相都是液體，因此要求兩相要互不相溶。在液互不相溶。在液- -液色譜中常用的固定也只有極性不同的液色譜中常用的固定也只有極性不同的幾種，如幾種，如 ，-氧二丙腈、聚已二醇氧二丙腈、聚已二醇-400-400和角鯊烷等。和角鯊烷等。3 3、化學鍵合固定相、化學鍵合固定相 將固定液機械的涂在擔體表面上構成的這種固定相，在將固定液機械的涂在擔體表面上構成的這種固定相，在實際使用時存在不少缺點，實際使用時存在不少缺點，2020世紀世紀6060年末發展起來了一年末發展起來了一種新型的固定相種新型的固定相

59、-化學鍵合固定相。化學鍵合固定相。 即用化學反應的方法通過化學鍵把有機分子結合到擔體即用化學反應的方法通過化學鍵把有機分子結合到擔體表面。根據在硅膠表面表面。根據在硅膠表面( (具有具有SiSiOHOH基團基團) )的化學反應的化學反應不同，鍵合固定相可分為：硅氧碳鍵型不同，鍵合固定相可分為：硅氧碳鍵型(Si(SiOOC)C)；硅氧硅碳鍵型硅氧硅碳鍵型(Si(SiOOSiSiC)C)硅碳鍵型（硅碳鍵型（SiSiC C）和硅氮鍵型（和硅氮鍵型（SiSiN N）四種類型。）四種類型?；瘜W鍵合固定相具有如下一些特點：化學鍵合固定相具有如下一些特點：表面沒有液坑，比一般液體固定相傳質快得多；表面沒有液

60、坑，比一般液體固定相傳質快得多；無固定液流失，增加了色譜柱的穩定性和壽命；無固定液流失，增加了色譜柱的穩定性和壽命； 可以鍵合不同官能團，能靈活地改變選擇性，應用于多可以鍵合不同官能團，能靈活地改變選擇性，應用于多種色譜類型及樣品的分析；種色譜類型及樣品的分析；有利于梯度洗提，也有利于配用靈敏的檢測器和餾分的有利于梯度洗提，也有利于配用靈敏的檢測器和餾分的收集。收集。二、液固吸附色譜法固定相二、液固吸附色譜法固定相采用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺等，仍可采用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺等，仍可分為全多孔性和薄殼型兩種，其特點如前所述。分為全多孔性和薄殼型兩種，其特點如前所述