1、實驗二的底物專一性實驗目的 了解酶的專一性掌握檢查酶專一性的原理和方法學會排除干擾因素，設計酶學實驗實驗內容本實驗以唾液淀粉酶（內含淀粉酶 及少量麥芽糖酶）、蔗糖酶對淀粉及蔗 糖的催化作用，觀察淀粉酶、蔗糖酶的 底物專一性。實驗原理酶的專一性酶的專一性是指一種酶只能對一種底物或一類底 物起催化作用，對其他底物無催化作用。酶的專一性 程度分為=鍵專一性=只要求作用于一定類型的鍵，對鍵兩端基 團無嚴格要求。如酯酶、核酶基團專一性：對鍵兩端或一端的基團要求嚴格，如ar B-葡萄糖昔酶，轉移酶絕對專一性：只作用于一種底物，如某些核酸工具酶 立體異構專一性：旋光異構專一性和幾何異構專一性淀粉直鏈淀粉：由

2、200-300個*葡萄糖以*1, 4糖昔鍵相連成_直鏈支鏈淀粉:有*1, 4糖昔鍵和*1, 6糖昔鍵, 在直鏈淀粉的基礎上形成分支直鏈淀粉直鏈淀粉的相對分子質量比支鏈淀粉小，直鏈淀粉 的分子是由許多a -D-葡萄糖經過a -1, 4-昔鍵反復連接 而成的線狀聚合物。0-直鏈淀粉的形狀并不是伸展狀態的直鏈，而是有規律的卷曲成螺旋狀，每一螺旋圈約有6個葡萄糖結構單位。7直鏈淀粉遇碘液顯藍色，加熱煮沸時顏色消失，冷卻后又重新顯色。這個反應很靈敏，常用來檢驗淀粉或碘的存在。支鏈淀粉m_r_E3_i iM v ej wj«m-L#w y 廣 r、/所不同。支鏈淀粉中D-葡萄糖之間以a-1, 4

3、昔鍵連接成主鏈，每 隔20-25個葡萄糖單位便分枝出1個支鏈，支鏈上還有分枝.而支 鏈的連接點即分枝處為a-l. 6糖昔鍵。支鏈淀粉(a)和糖原(b)的分支狀鏈示意圖支鏈淀粉,平均每2530個單位產生1個分支。 糖原,平均每812個單位產生1個分支。蔗糖ch2ohoHch2ohH 0H由Q-葡萄糖和B-果糖以a-1, 2糖昔鍵相連而成 的雙糖Benedict 反應 Bened i ct試劑是堿性硫酸銅溶液，具有一定的氧化能力， 能與還原性糖的半縮醛輕基發生氧化還原反應，生成氧 化亞銅（CU20）磚紅色沉淀。 淀粉和蔗糖都不能反應，而它們的水解產物葡萄糖能夠 發生Benedict反應，所以，用顏

4、色反應來觀察淀粉酶、 蔗糖酶對淀粉及蔗糖的水解作用。0IIRC-HHO-R1OHR-CH-OR'p-D 和糖q-D 葡每糖半縮醛輕基在右邊，即與氧環同側-D-葡萄糖; 半縮醛輕基在左邊，即與氧環異側卩-D-葡萄糖。淀粉酶溶液：唾液2mL倒入10mL量筒中（不包括 泡沫），用蒸f留水稀釋到5mL,靜置10分鐘后，去 掉上層泡沫和下層的沉淀。（自制）0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCI）（取前搖勻）2%蔗糖溶液Bened i ct 試劑注：6是唾液淀粉酶的激活劑。其它的陰離子，如Br、 NO3和I對該酶也有激活作用，但較微弱。而Cu2+對唾液淀粉酶具有抑制作用。蔗糖酶溶液：干酵母1g置研缽

5、中，加半勺石英沙 及蒸憎水少許（約4mL）,用力研磨10分鐘，轉移 到50mL離心管中，另用25mL蒸憎水洗滌研缽，并 將洗滌液一起轉移到離心管中，搖勻，靜置5分鐘, 離心（離心前對稱放置的兩只離心管要等重配平， 精確到0. 01g）,小心取出上清液（含蔗糖酶）備 用。（自制）Benedict 試劑在600mL蒸憎水中溶解173g檸檬酸鈉和100g無水碳酸鈉，冷卻后稀釋到850mLo在WOmL熱蒸tg水中溶解17.4g無水硫酸銅。冷卻后稀釋到150mLo把硫酸銅溶液緩緩倒入檸檬酸鈉一碳酸鈉溶液中，邊加邊攪拌，如產生沉淀。要 過濾，班氏試劑配制后能長期使用。如存放較久 而產生沉淀時，可取上層清液使用'不必重配。實驗步驟檢查試劑J試管1試管2試管30. 5%淀粉溶液/mL32%蔗糖溶液/mL3蒸憎水/mL3Bened i ct 試劑/mL222搖勻，沸水煮2分鐘觀察記錄結果原因實驗步驟淀粉酶的專一性實驗步驟蔗糖酶的專一性試管7試管8一試管9蔗糖酶溶液/ mL1110.5%淀粉溶液/mL32%蔗糖溶刀J/mL3蒸tg水/ mL3搖勻，37°C保溫15分鐘Benedict 試劑 / mL