1、天然藥物活性成天然藥物活性成分研究分研究 1活性成分：活性成分：是指植物、動物、微生物以及礦物等各種天然藥物體內(nèi)存在的對人體生理活性有影響的物質(zhì)。如：植物中的黃酮、皂苷、生物堿等，動物體內(nèi)的多肽、激素等。2第一節(jié)第一節(jié) 天然藥物的研究開發(fā)程序天然藥物的研究開發(fā)程序開發(fā)新藥包括開發(fā)新藥包括5 5種形式：種形式：1.1.經(jīng)過文獻資料或民間用藥的調(diào)研并通過現(xiàn)代經(jīng)過文獻資料或民間用藥的調(diào)研并通過現(xiàn)代藥理學的篩選研究，發(fā)現(xiàn)某種天然藥物具有藥理學的篩選研究，發(fā)現(xiàn)某種天然藥物具有藥用價值，然后將其開發(fā)成新藥。藥用價值，然后將其開發(fā)成新藥。32.已知某種成分或某類成分具有藥用價值或已成為新藥，根據(jù)動植物的親緣

2、關(guān)系，尋找含有這種或這類成分的動植物，將其開發(fā)成新藥。43.在不明確有效成分的基礎(chǔ)上，將臨床療效明確的經(jīng)典方、經(jīng)驗方或經(jīng)藥效學研究具有開發(fā)價值的復方中藥開發(fā)成新藥，或?qū)F(xiàn)有的新藥改變劑型。54.在基本搞清了有效成分和有效部位的基礎(chǔ)上，將有效部位開發(fā)成新藥，采用這種方法開發(fā)的新藥具有藥品的均一性較易控制、臨床療效穩(wěn)定、質(zhì)量得到保證等優(yōu)點。65.通過天然藥物中的有效成分或生物活性成分的研究，從中發(fā)現(xiàn)有藥用價值的活性單體或潛在藥用價值的活性單體，這些單體往往具有一定的生物活性，但因其活性不夠顯著或毒副作用大，無法將其開發(fā)成新藥，但他們具有潛在的藥用價值，稱為先導化合物。通過先導化合物的研究進而發(fā)現(xiàn)有

3、藥用價值的化合物。7第二節(jié) 天然藥物中活性成分的研究方法一、調(diào)查研究1.臨床調(diào)查2.藥材調(diào)查3.文獻查閱8中藥創(chuàng)新藥物的發(fā)現(xiàn)與研發(fā)中藥創(chuàng)新藥物的發(fā)現(xiàn)與研發(fā) 中藥作為我國的傳統(tǒng)醫(yī)藥，不僅為我國人民的健康事業(yè)做出了巨大貢獻，而且也是我國醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的三大支柱之一，在經(jīng)濟發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用。自從我國加入WTO以后，長期依賴于仿制的化學藥物的發(fā)展受到了很大的沖擊，而具有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的中藥迎來了新的發(fā)展機遇，特別是近年來西方國家包括美國、加拿大、歐盟、澳大利亞等對傳統(tǒng)藥物和植物藥的普遍重視和注冊政策的調(diào)整，給中藥進入國際市場提供了一個良好的契機。 9 因此，中藥將成為我國醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)新的增長點，中藥新藥

4、研發(fā)也將成為我國創(chuàng)新藥物研發(fā)的重要方向。自1985年實施藥品管理法以來，中藥新藥的研發(fā)一直是新藥研發(fā)中最活躍的領(lǐng)域，至今已有近3 000個中藥新藥獲準上市。在這些品種中，以中藥復方為主，占近60；改變劑型約占35；有效成分、有效部位新藥不到5。分析目前中藥新藥研發(fā)的現(xiàn)狀，主要存在著以下問題：10(1)低水平和高水平重復現(xiàn)象嚴重，缺少具有獨立知識產(chǎn)權(quán)的高水平中藥新藥：目前我國藥品法定標準包括中華人民共和國藥典、中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準、國家食品藥品監(jiān)督管理局對地方標準和保健藥品整頓后發(fā)布的國家中成藥標準匯編以及國家藥品標準等收載的中成藥品種達一萬多種，幾乎覆蓋了各種疾病用藥。而目前申報的中藥

5、復方新藥即中藥、天然藥物注冊分類的第六類新藥，幾乎都在原來處方的基礎(chǔ)上進行加減，其療效、制劑和質(zhì)量控制水平都沒有明顯的提高，被業(yè)內(nèi)人士稱為低水平重復。 11v所謂高水平重復，即新藥的研發(fā)水平很高，如有效成分新藥或有效部位新藥，但每個新藥的申報單位有很多家，如丹參總酚酸及其制劑、紅花總黃色素及其制劑、羥基紅花黃色素A及其制劑等，每個新藥都有多家申報，有些甚至有十多家申報；人參中主要有效成為皂苷類，人參皂苷Rg3是第一個開發(fā)成為一類新藥的皂苷，其他單位開發(fā)了Rh、Re 等皂苷，目前還有一些其他皂苷正在開發(fā)中。 12 諸如此類例子很多，造成這種現(xiàn)象的主要原因是缺乏創(chuàng)新，研究單位都從文獻上找新藥的選題

6、，發(fā)現(xiàn)文獻報道某個中藥的成分能夠純化到有效部位或有效成分，而且有一定的藥效，很多機構(gòu)都同時立項進行研發(fā)，造成大量資源的浪費，結(jié)果都沒有知識產(chǎn)權(quán)保護，這是目前嚴重缺乏真正創(chuàng)新的、具有獨立知識產(chǎn)權(quán)的高水平中藥新藥的重要原因。(2)療效差、劑型落后、質(zhì)量難以有效控制：目前申報的大部分新藥，由于沒有經(jīng)過篩選過程，其療效很差，或者與上市的中成藥沒有明顯的差別。大部分新藥研發(fā)單位不重視藥物的療效，只重視新藥證書和生產(chǎn)文號，所以進入新藥研發(fā)的品種，不管療效如何，最終都取得新藥證書和生產(chǎn)文號。 13v這固然與我國目前藥品銷售不重視療效，只重視手段有關(guān)，但低水平重復也是造成這種現(xiàn)象的重要原因。目前中藥的制劑水平

7、從劑型到制劑研發(fā)水平均非常落后，既使是一些先進的劑型，其研發(fā)水平也很落后。目前中藥制劑學的研究基本上只停留在能夠做成某種劑型的水平，很少研究其溶出度、體內(nèi)的藥代動力學。但近年來的研究表明，大部分中藥的成分特別是傳統(tǒng)認為生物利用度較好的水溶性成分，如大部分苷類成分，其生物利用度非常低，既使在復方中也一樣。因此，進行中藥新藥的制劑學研究包括主要成分溶出度、藥代動力學研究，對于提高中成藥的療效非常重要。目前中藥新藥的申報，對其質(zhì)量標準基本上要求有1味藥物成分的含量測定和13藥味的定性鑒別，所以新藥研發(fā)基本上都是按照這個原則進行，這對于中藥復方制劑特別是處方較大的復方制劑是遠遠不夠的，其他沒有定性鑒別

8、的藥味，可加可不v加，造成市場上出現(xiàn)劣質(zhì)藥品的局面。因此，目前大部分中藥復方制劑的質(zhì)量標準難以有效地控制藥品的質(zhì)量。14(3)仿制藥充斥市場：專利到期后藥品的仿制是世界各國都允許的，是降低藥品價格的主要途徑，我國放開藥品仿制，本身無可非議，但在管理和實施上存在著很大的問題，促使藥品生產(chǎn)企業(yè)不重視創(chuàng)新，只重視眼前利益，導致仿制藥品充斥市場，嚴重影響了創(chuàng)新藥物的發(fā)展。15(4)大部分新藥品種未產(chǎn)業(yè)化，少數(shù)產(chǎn)業(yè)化，極少數(shù)形成“重磅炸彈”：我國1985年以來上市的近3 000個中藥新藥大部分未產(chǎn)業(yè)化，僅少數(shù)產(chǎn)業(yè)化，極少數(shù)形成產(chǎn)值過億的所謂中國的“重磅炸彈”，如丹參滴丸、地奧心血康、步長腦心通、通心絡(luò)膠

9、囊等。主要原因為：其一，研發(fā)的新藥品種大部分為低水平重復，沒有特色，缺乏市場競爭力；16 其二，企業(yè)研發(fā)或轉(zhuǎn)讓新藥缺乏市場調(diào)研，很多新藥取得文號后，就擱置在檔案室里。藥品作為預防、治療和診斷疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)，直接關(guān)系到人民的身體健康，追求更好、追求完美是藥品發(fā)展的必然趨勢。國際大型制藥集團每年投入巨額資金進行新藥研發(fā)，每個新藥的上市都給企業(yè)帶來巨額的利潤，藥品知識產(chǎn)權(quán)是各國知識產(chǎn)權(quán)談判的重要內(nèi)容之一，這些都說明創(chuàng)新藥物對醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要性。因此，創(chuàng)新藥物的研發(fā)今后也必將成為我國藥品研發(fā)的主要方向。17v12 中藥創(chuàng)新藥物的定義v創(chuàng)新藥物在國際上一般是指新的化學實體或者生物制品中新的物質(zhì)。中藥是

10、我國的特色，對于中藥創(chuàng)新藥物的定義至今沒有定論，但國家科技部、發(fā)改委在創(chuàng)新藥物項目評審中基本上有一個概念，主要是指有效成分新藥和有效部位新藥，SFDA藥品審評中心在新藥審評中也有一個創(chuàng)新藥物概念，也是指一類新藥和五類新藥。因此，我們認為中藥創(chuàng)新藥物是指首次上市的從中藥和天然藥物中提取的有效物質(zhì)，包括有效成分和有效部位及其組成的復方制劑。按照現(xiàn)行藥品注冊管理辦法，即首次在我國上市的中藥、天然藥物中提取的有效成分及其制劑(一類新藥)、首次在我國上市的中藥、天然藥物中提取的有效部位及其制劑(五類新藥)。18v2 中藥創(chuàng)新藥物的發(fā)現(xiàn)v“安全、有效、穩(wěn)定、可控”是藥品的四大要素。藥品的研發(fā)首先必須針對某

11、種疾病，從大量的化學物質(zhì)、中藥、天然藥物中篩選出具備上述四大要素的物質(zhì)，才能進人新藥研發(fā)。中藥盡管有兩千多年的臨床使用歷史，但臨床上基本都是以復方配伍使用，各種中藥的療效包括復方的療效如何，沒有確切的數(shù)據(jù)，作為藥品進行開發(fā)，仍需要進行大量的篩選。因此，新藥的發(fā)現(xiàn)是中藥創(chuàng)新藥物研發(fā)的必需過程。而我國目前中藥新藥的研發(fā)極少經(jīng)過發(fā)現(xiàn)過程，這也是我國缺少療效獨特的中藥創(chuàng)新藥物的重要原因。19v21 新藥發(fā)現(xiàn)的過程v根據(jù)國內(nèi)外新藥發(fā)現(xiàn)過程結(jié)合我國中藥新藥研發(fā)的特點，總結(jié)新藥發(fā)現(xiàn)過程見圖1。其發(fā)現(xiàn)過程詳細介紹如下：v211 樣品的選擇與制備新藥的發(fā)現(xiàn)從樣品的收集開始。為了提高目標的命中率，可根據(jù)文獻古籍調(diào)

12、研，從民族、民間藥物、臨床名方、老藥和國外天然藥物中選擇篩選樣品，收集樣品，進行基原鑒定，也可選擇天然產(chǎn)物進行大規(guī)模篩選。樣品收集后進行提取，或采用溶劑粗分成幾個部位，得到粗提物。20212 活性篩選根據(jù)擬開發(fā)藥物的適應(yīng)癥，采用體外或體內(nèi)的方法對提取物進行活性篩選，如果提取物有明顯的活性，即進入下一程序；如果提取物沒有明顯的活性，先貯存在樣品庫中，供其他活性篩選。213 活性跟蹤的化合物分離、結(jié)構(gòu)鑒定以及有效部位、有效成分、活性先導化合物的發(fā)現(xiàn)采用溶劑方法或色譜方法對粗提物進行進一步分離，最好能夠按化合物類型進行分離，有利于有效部位新藥的發(fā)現(xiàn)； 21 對分離后的各個部分進行進一步的活性篩選，發(fā)

13、現(xiàn)活性部位；采用色譜方法對活性部位進行化合物的分離和結(jié)構(gòu)鑒定；對分離的化合物進行活性篩選。在此篩選過程中，有時會發(fā)現(xiàn)某一部位活性很強，但進一步分離成單體化合物后活性沒有提高，甚至降低的現(xiàn)象，這可能是由于中藥的各成分之間存在著協(xié)同作用導致的。這時可以把相應(yīng)的活性部位研發(fā)成為新藥，即有效部位新藥。如果發(fā)現(xiàn)某一單體化合物活性很強，具有臨床應(yīng)用前景，就可以把單體化合物研發(fā)成為新藥，即有效成分新藥。但在活性成分研究中，大部分情況是分離的化合物具有一定活性，但活性不太強，或毒性很大，沒有臨床使用價值，這類化合物被稱為活性先導化合物，可進人結(jié)構(gòu)改造程序。對于沒有活性的化合物，將其貯存在樣品庫中，供其他活性篩

14、選。22v214 先導化合物的結(jié)構(gòu)改造、構(gòu)效關(guān)系研究與新化學藥物的發(fā)現(xiàn) 如前所述，天然產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)的大部分化合物沒有直接臨床應(yīng)用價值，但為創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)中先導化合物的主要來源。對于活性篩選發(fā)現(xiàn)的活性先導化合物，必須進行結(jié)構(gòu)改造和構(gòu)效關(guān)系研究。通過系統(tǒng)的構(gòu)效關(guān)系分析，進一步設(shè)計并優(yōu)化活性化合物，再通過活性篩選，直至發(fā)現(xiàn)具有臨床應(yīng)用價值的化合物，從而進人新藥研發(fā)階段，最后成為化學藥的一類新藥。 23 目前國際上多數(shù)創(chuàng)新藥物都是通過這一途徑發(fā)現(xiàn)的，從國際上申請的專利也可以看出，一般一個活性化合物，其合成的衍生物都在數(shù)十個，甚至上百個。而在我國，天然產(chǎn)物研究與合成是基本脫節(jié)的，從事天然產(chǎn)物研究的人員大多不

15、懂合成，從事合成的人員對結(jié)構(gòu)改造也不感興趣，這也是我國極少發(fā)現(xiàn)新的化學實體藥物的主要原因之一。另外，近年來的大量研究表明，中藥或天然藥物的成分在體內(nèi)極易產(chǎn)生代謝，從其代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)活性成分，也是創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)的一個重要途徑。2422 中藥創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)的新方法、新技術(shù)中藥創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)的新方法、新技術(shù)包括“基于細胞、靶酶、親和色譜、分子烙印技術(shù)、生物芯片等的高通量篩選技術(shù)”、“多維液相色譜一高通量篩選一LCMSNMR聯(lián)用技術(shù)”、“LCMSDSHLPCHTS聯(lián)合技術(shù)”等。25v23 中藥創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)的新領(lǐng)域、新途徑大部分傳統(tǒng)中藥是我們的祖先在尋找食物的過程中發(fā)現(xiàn)的，因此有“醫(yī)食同源”或“藥食同源”之說

16、。從中國藥典收載的常用中藥可以看出，大部分中藥為草本植物，少數(shù)為灌木，極少數(shù)為喬木。近百年的中藥活性成分研究，從這些草本植物中發(fā)現(xiàn)了不少具有臨床應(yīng)用價值的化合物，如麻黃堿、小檗堿、青蒿素等，為現(xiàn)代藥物的發(fā)展做出了巨大貢獻。但大量研究表明，這些草本植物所含化學成分結(jié)構(gòu)簡單，基本上都屬于天然藥物化學或中藥化學等教科書上介紹的結(jié)構(gòu)類型，發(fā)現(xiàn)新的結(jié)構(gòu)類型、新的活性化合物的難度越來越大。尋找發(fā)現(xiàn)創(chuàng)新藥物的新領(lǐng)域、新途徑是天然藥物學家們面臨的新課題。根據(jù)近二十年來中藥、天然藥物的研究進展，以下方面將是今后創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)的新途徑和新領(lǐng)域。26231喬木類植物 高大喬木在傳統(tǒng)中藥中很少使用，較常用的僅黃柏、杜仲

17、、厚樸、肉桂等lO多種中藥，因此其活性成分研究以前開展得很少。近二十年的研究表明，高大喬木中除了含有一些常見結(jié)構(gòu)類型的植物化學成分外，尚含有一些結(jié)構(gòu)類型較新穎、生理活性較強的成分，發(fā)現(xiàn)活性成分的機率較高，如紫杉醇、三尖杉酯堿、喜樹堿、番荔枝內(nèi)酯等都來源于高大的喬木。我國有著豐富的喬木資源，特別是熱帶、亞熱帶地區(qū)的喬木種類非常豐富，這些喬木大部分未進行過活性成分的研究，為新藥發(fā)現(xiàn)提供了一個很大的空間。27232海洋生物 海洋面積約占地球表面積的7l，海洋生物資源非常豐富，但由于受樣品采集、提取、分離和結(jié)構(gòu)鑒定等技術(shù)的限制，對海洋生物進行有組織的研究和開發(fā)開展得較晚。六十年代以來，隨著科學技術(shù)的發(fā)

18、展，新的分離技術(shù)和分析儀器的采用，使海洋生物的研究成為可能。近二十年來的研究表明，海洋生物中所含化學成分結(jié)構(gòu)新穎、復雜，常具有很強的生物活性，具有很好的新藥開發(fā)前景。28233 低等生物和植物共生菌低等生物同樣存在著樣品采集和分類鑒定的困難，因此對其活性成分研究也很少。但大部分低等生物具有很強的生物活性，特別是一些真菌類，很小的劑量就能夠產(chǎn)生很強的生理作用。對低等生物進行研究，發(fā)現(xiàn)活性成分的機率很高。同時，低等生物還具有易于通過發(fā)酵生產(chǎn)的優(yōu)勢，產(chǎn)業(yè)化前景看好。因此，低等生物的活性成分研究也是新藥發(fā)現(xiàn)的一個新領(lǐng)域。當務(wù)之急是要加強分類學家與藥物學家的配合，解決樣品的收集與分類鑒定問題。植物共生菌

19、的研究是近十年來才開始的新研究領(lǐng)域，盡管時間很短，但已發(fā)現(xiàn)了大量新化合物骨架和新的活性化合物。植物共生菌種類很多，而且易于發(fā)酵和調(diào)控，也是創(chuàng)新藥物發(fā)現(xiàn)的一個重要領(lǐng)域。29234 鮮活動物的內(nèi)源性物質(zhì)動物藥作為中藥使用有著悠久的歷史，神農(nóng)本草經(jīng)收載動物藥67種。對動物藥進行系統(tǒng)的活性成分研究開展較晚。近二十年的研究表明，動物藥特別是鮮活動物含有大量的活性物質(zhì)，其活性成分具有生理活性強、療效確切、副作用小等特點，如蛇毒、蚯蚓纖溶酶、水蛭素、斑蝥素、蜂毒等都是活性很強的天然產(chǎn)物。我國有動物藥2 000多種，目前已進行過較系統(tǒng)研究的不到1 ，因此對動物藥，特別是鮮活動物進行系統(tǒng)的活性成分研究，有望開發(fā)

20、出療效顯著、作用專一、副作用小的新藥。 30235 中藥復方 中藥復方是中醫(yī)臨床用藥的主要形式。由于分離技術(shù)的限制，中藥復方的活性成分研究以前開展較少。近年來，隨著分離技術(shù)的快速發(fā)展，各種高性能色譜填料和高效色譜分離技術(shù)已逐漸在我國普及，使中藥復方的活性成分研究成為可能。近年來的研究表明，中藥復方的化學成分確實有別于單味中藥，這并非完全是中藥復方共煎產(chǎn)生新的成分，而是通過成分之間的增溶作用，使一些在單味中藥研究中沒有發(fā)現(xiàn)的成分在復方研究中被發(fā)現(xiàn)，如我們在補陽還五湯的化學成分研究中發(fā)現(xiàn)4個新的生物堿_2 J，為創(chuàng)新藥物的發(fā)現(xiàn)提供新的結(jié)構(gòu)化合物。另外，中藥復方的活性成分研究是發(fā)現(xiàn)具有臨床使用價值的

21、中藥成分的組合或有效部位組合的最有效途徑。31v236中藥成分的體內(nèi)代謝產(chǎn)物從代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)新藥一直是國際上非常重視的領(lǐng)域，特別是近十年來隨著新藥研發(fā)成本的快速增長，國際上一些較小的制藥企業(yè)和新藥研發(fā)公司難以承受新藥發(fā)現(xiàn)的巨大成本，紛紛將研究重點轉(zhuǎn)向代謝產(chǎn)物的研究，一旦大公司發(fā)現(xiàn)新藥，小公司馬上研究其代謝產(chǎn)物，這樣可以大大提高新藥發(fā)現(xiàn)的幾率，降低研發(fā)成本。中藥和天然藥物中的成分，由于其具有比化學藥更好的生物順應(yīng)性，在體內(nèi)更易發(fā)生代謝，其代謝產(chǎn)物往往是其真正的活性成分，如黃芩苷、番瀉苷等。因此，對體內(nèi)代謝產(chǎn)物進行生物活性研究，從代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)新藥也是一個很好的途徑。32v3 中藥創(chuàng)新藥物的研發(fā)v

22、31 中藥創(chuàng)新藥物選題的原則v311 突出中醫(yī)藥特點、優(yōu)勢原則 “辯證施治，調(diào)節(jié)陰陽”是中醫(yī)藥理論的精髓。中醫(yī)治病多從整體觀念人手，以調(diào)節(jié)整體功能為主，如扶正祛邪、調(diào)整陰陽、調(diào)整臟腑功能及調(diào)理氣血等，都是中醫(yī)重要的治療法則。長期的臨床使用表明，中醫(yī)藥在生理功能的調(diào)節(jié)、病毒性感染、免疫性疾病、各種慢性病、養(yǎng)生保健、抗衰老等方面具有明顯的優(yōu)勢。因此，在中藥創(chuàng)新藥物研發(fā)的選題時必須充分考慮中醫(yī)藥治療的優(yōu)勢病種，發(fā)揮中醫(yī)藥的特色與優(yōu)勢，切忌選擇目前化學藥治療效果很好的疾病。 33v312 醫(yī)療需要(社會效益)原則 醫(yī)療需要即社會效益。作為藥物，其主要功能是預防、治療、診斷人的疾病，為人民的健康事業(yè)提供

23、保障。因此，新藥的選題必須針對當前社會的人口譜、健康譜和疾病譜，研制治療常見病、多發(fā)病和疑難病的藥物。具體來說，當今社會急需治療下列幾類疾病的藥物：常見病：感冒、肝炎、消化道疾病、呼吸系統(tǒng)疾病等；現(xiàn)代社會流行病：心腦血管疾病、癌癥、肺病、糖尿病等； 老年病：老年癡呆癥、老年糖尿病、骨質(zhì)疏松、各種器質(zhì)性疾病、白內(nèi)障等；疑難病：艾滋病、各種免疫性疾病等。 34313 市場需求(經(jīng)濟效益)原則市場需求即經(jīng)濟效益。藥品作為一種商品，除了療效外，必須還有市場效益，否則，該新藥獲得證書后只能存在檔案室。因此，在新藥選題時必須進行充分的市場調(diào)研，分析所選病種的發(fā)病率、當前上市藥物的品種、臨床用藥狀況、各個品

24、種的特點和目前市場占有率，根據(jù)擬選新藥的優(yōu)勢和特點，預測新藥上市后可能的市場占有率和市場前景。對于這一點，國內(nèi)的企業(yè)和科研單位做得不夠充分，較少有新藥研究單位在立項時能夠拿出一套詳細的市場調(diào)研報告，這也是為什么報批的新藥大部分不能很好地開發(fā)市場的重要原因。35314 立足創(chuàng)新原則 作為創(chuàng)新藥物必須立足于“新”字，中藥創(chuàng)新藥物的創(chuàng)新可以從三方面實現(xiàn)：新物質(zhì)，包括新化合物和新有效部位；新藥用，一個已知化合物或已知提取物，發(fā)現(xiàn)其藥用價值，將其開發(fā)成為新藥，也是非常有價值的，如砒霜，發(fā)現(xiàn)其可以治療白血病，曾引起國際上的轟動；名優(yōu)中成藥的二次開發(fā)，對名優(yōu)中成藥進行深入研究，闡明其有效部位，將其研制成為新

25、的有效部位復方制劑，從而降低服用劑量、提高療效、建立有效的質(zhì)量標準，對中成藥來說，也是很好的創(chuàng)新。36v315 可行性原則 在創(chuàng)新藥物研發(fā)時必須注意生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標準的可行性。因為，其一，生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標準將伴隨著藥品的終生，一個無法工業(yè)化或高成本的生產(chǎn)工藝將使新藥無法投產(chǎn)，一個難以重現(xiàn)的質(zhì)量標準將無法控制藥品的質(zhì)量；其二，有效成分新藥要求有效成分的含量達到提取物的90以上，有效部位的新藥要求有效部位含量達到提取物的50以上，在選擇藥材時就必須考慮是否能夠純化到相應(yīng)的含量，是否能夠測出這些成分的含量。根據(jù)我們的經(jīng)驗，創(chuàng)新藥物的研發(fā)必須考慮以下二點：37(1)生產(chǎn)工藝可行性：研制有效成分的新藥，

26、應(yīng)選擇有效成分含量高、主成分明顯、易于分離的植物，如果該成分是針對某種重大疾病的特效藥物，則另當別論；研制有效部位的新藥，應(yīng)選擇有效部位集中，化學成分類別較少的植物；研制復方有效部位的新藥，應(yīng)選擇藥味較少，方中各味藥的有效部位較明確的中藥復方。 38(2)質(zhì)量標準可行性：質(zhì)量標準可行性主要是在有效部位新藥研發(fā)中存在的問題，因為有效部位新藥要求對各類成分進行含量測定，且所測各類成分的含量之和必須大于50。因此，在有效部位新藥研發(fā)時首先必須考慮各類成分是否能夠測定、相互之間是否存在干擾。在定量方法建立時可考慮采用以下措施：a選擇適當?shù)姆椒ǎ瑢⒏黝惓煞诌M行分離，分別測定；b選擇各類成分專屬的紫外一可

27、見吸收波長分別進行測定；e采用各類成分專屬性強、且穩(wěn)定的顯色方法，排除成分之間的干擾。39v32 各類中藥創(chuàng)新藥物的研究思路v321 有效成分新藥 有效成分新藥實際上與化學藥沒有本質(zhì)性的區(qū)別，研發(fā)有效成分的新藥應(yīng)該與上市的適應(yīng)癥相同或相似的化學藥進行比較，分析擬開發(fā)新藥在療效、安全性、生產(chǎn)成本等方面的優(yōu)勢或特色，如果沒有優(yōu)勢或特色，則該新藥的開發(fā)意義就不大。由于中藥中的成分多數(shù)情況下存在著協(xié)同作用，單體化合物的活性往往不是很強，難以與化學藥相比，從近幾年申報的中藥一一類新藥也可以看出這一點，所以開發(fā)有效成分新藥必須慎重。40v322有效部位新藥 中藥有效部位是經(jīng)過篩選確定的某一中藥或復方中的各

28、類有效成分的組合，仍然是個混合物，只不過把無效成分去除，使療效更強、作用更專一，所以有效部位新藥仍然具有中藥多成分、多靶點的作用特點，符合中醫(yī)藥理論。同時，經(jīng)過精制，除去無效成分，提高療效，降低服用劑量，達到化學成分清楚、質(zhì)量易控的目的，符合中藥現(xiàn)代化的發(fā)展趨勢。因此，有效部位新藥將是中藥創(chuàng)新藥物研發(fā)的主要方向，特別是根據(jù)中醫(yī)藥配伍理論結(jié)合現(xiàn)代藥效學篩選組成的中藥有效部位復方制劑，能夠更好地發(fā)揮中醫(yī)藥的特色與優(yōu)勢，將是今后有效部位新藥研發(fā)的主要方向。在開發(fā)有效部位的新藥中，單味藥的有效部位是研發(fā)的基礎(chǔ)。如果一個單位要進行系列有效部位新藥的研發(fā)，應(yīng)該先進行一些常用中藥的有效部位研究，申請專利。如

29、果單味藥的有效部位能夠開發(fā)成為新藥，先進行單味藥的開發(fā)，在此基礎(chǔ)上，再進行有效部位復方制劑的開發(fā)，達到多快好省的目的。否則，常用中藥的有效部位的工藝和用途都被專利保護后，即使有很好的處方或思路，也無法進行研發(fā)。41v323中成藥二次開發(fā)如前所述，名優(yōu)中成藥的二次開發(fā)是中藥創(chuàng)新藥物研發(fā)的重要組成部分。名優(yōu)中成藥的二次開發(fā)不是簡單的改變劑型或改變工藝，名優(yōu)中成藥的二次開發(fā)應(yīng)該在“精、新、效、優(yōu)”四個字上做文章。“精”，是指精制，提高有效成分的含量，降低服用劑量，盡可能地將其研制成為有效部位的新藥，達到質(zhì)的飛躍，如果可測性成分含量難以達到50以上，也盡量往高含量研究。“新”，是指劑型新，根據(jù)疾病治療

30、的需要，從制劑學上做文章，提高中藥的制劑水平。“效”，是指療效，通過二次開發(fā)應(yīng)提高藥物的療效，起碼與原制劑達到等效，如果二次開發(fā)，其他工作做得很好，但療效卻降低了，這樣的開發(fā)也是不成功的開發(fā)。“優(yōu)”，是指質(zhì)量優(yōu)，主要表現(xiàn)在： 質(zhì)量標準有了很大的提高，所建立的質(zhì)量標準能夠有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量；藥品穩(wěn)定性和批次間的一致性均有了很大的提高。如果能夠?qū)崿F(xiàn)這幾點，二次開發(fā)就是一個很成功的開發(fā)。42二、天然藥物化學成分預實驗二、天然藥物化學成分預實驗（一）預試驗的目的和要求 中藥化學成分預試驗是指通過簡單的提取分離和定性反應(yīng)，初步檢驗?zāi)持兴幹锌赡芎心男┗瘜W成分，然后按照所含化學成分的性質(zhì)，設(shè)計有效成分提

31、取、分離的具體方法。對預試驗的要求是簡便、快捷而正確。一般采用試管實驗，由于植物提取液大多顏色較深，顏色變化在試管內(nèi)觀察易產(chǎn)生干擾，可另采用紙片法，把試樣和試劑點在濾紙上，觀察其化學反應(yīng)后的顏色變化。如果還難以肯定，可進一步采用紙色譜及薄層色譜方法，把各類成分初步分開后噴灑各類顯色劑，再加以判斷，靈敏度也可提高。薄層色譜比紙色譜展開時間短，操作方便，更適用于預試驗工作。43 預試驗往往只能提供初步線索，其準確性受多種因素影響，主要表現(xiàn)在：共存成分相互干擾；提取分離方案不很完善；提取液中雜質(zhì)多，顏色深，影響定性反應(yīng)的觀察；定性檢出試劑不夠?qū)Ｒ唬怀煞趾康停c檢出試劑反應(yīng)不靈敏；成分在植物體中的存

32、在狀態(tài)等。為提高預試驗檢出的準確性，可從以下幾方面考慮：44v1預試驗前對藥材的性狀特征進行認真觀察，以引起提取檢識時的注意。如黃色藥材可能含有黃酮、蒽醌等；紅色藥材可能含有蒽醌或其他醌類、酮類化合物；具苦味的可能含生物堿、強心苷；具酸味的可能含有機酸；具甜味的常含糖類成分；具澀味的可能含鞣質(zhì)等。v2制備供試液時，應(yīng)盡量除去雜質(zhì)，以減少成分間的相互干擾。如檢查生物堿時，可利用生物堿溶于酸水而與香豆素、中性內(nèi)酯分離，再用生物堿沉淀試劑檢出生物堿。 45v3在化學反應(yīng)檢識時，盡量采用專屬性強的檢出試劑，并選用幾種不同試劑同時檢查，根據(jù)反應(yīng)結(jié)果綜合分析。如強心苷首選-去氧糖反應(yīng)，再配合lieberm

33、ann-burchard和Beljet反應(yīng)等。在檢識方法上，可配合TLC或PC檢識，往往可提高檢出的準確度。v4反應(yīng)顏色判斷不準確時，可同時作對照試驗和空白試驗。v5成分含量太低時，可配合生物測定方法。 預試驗結(jié)果只能提供藥材中可能含有哪些類型的化學成分，要完全肯定某類化學成分，則需提取分離得到后再進一步檢識。46v（二）預試驗的方法（二）預試驗的方法 天然藥物化學成分預試驗的方法可以分為兩類。一類是單項預試驗，即根據(jù)工作的需要有重點的檢查某一類成分。另一類是系統(tǒng)預試驗，即用簡便、快速的方法，對中藥中存在的各類化學成分進行全面定性檢查。47（三）預試驗溶液的制備（三）預試驗溶液的制備v1 1單

34、項預試驗溶液的制備單項預試驗溶液的制備 通常將中藥材分別用石油醚、95乙醇和水提取，便可以將絕大部分化學成分提取出來。v（1）水提取液：取藥材粉末10g，加100ml蒸餾水，室溫浸泡24小時，濾過，取少量濾液檢查蛋白質(zhì)、氨基酸，剩余濾液和濾渣水浴加熱（5560）1小時，濾過，濾液檢查糖、皂苷、有機酸、鞣質(zhì)、生物堿鹽。 48（2） 乙醇提取液49（3）石油醚提取液：取藥材粉末1g，加10ml石油醚（沸程：6090），浸漬24小時，濾過，濾液進行萜類、揮發(fā)油、甾體、油脂等親脂性成分檢查。502 2系統(tǒng)預試驗供試液制備系統(tǒng)預試驗供試液制備 利用各類成分極性大小的不同，用極性由小到大的溶劑連續(xù)抽提，將

35、各類成分分開。常用的溶劑梯度順序為：石油醚、苯、乙醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇、丙酮、乙醇、水。每級提取液，可進一步結(jié)合化合物的酸堿性不同，采用酸、堿液處理，使其分為酸性、堿性和中性部分。51（四）供試液中化學成分的檢識（四）供試液中化學成分的檢識 各類化學的檢識反應(yīng)一般在試管、濾紙片或薄層板上進行。檢識時應(yīng)盡量采用對尋查成分專屬性強的反應(yīng)，如蒽醌首選堿液反應(yīng)；強心苷首選Keller-Kiliani反應(yīng)；皂苷首選泡沫試驗等。另外還可結(jié)合儀器分析的方法，如利用甾體皂苷的特征紅外光譜，可迅速準確的辨認甾體皂苷。52v1水溶性成分的檢識 取中藥粗粉5g，加50ml蒸餾水，浸泡過夜，或于5060水浴中溫

36、浸1小時，濾過，濾液供檢識下列各類成分：53（1）糖、多糖和苷類v1）Molish反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加入12滴10-萘酚乙醇試劑搖勻，傾斜試管45，沿管壁滴加1ml濃硫酸，分成兩層。如在兩液層交界面出現(xiàn)紫紅色環(huán)，表明可能含有糖、多糖或苷類。v2）斐林反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加入新配制的45滴斐林試劑，在沸水浴中加熱數(shù)分鐘，如產(chǎn)生磚紅色氧化亞銅沉淀，表明含有還原糖。 將上述溶液中沉淀濾過除去，濾液加1ml 10鹽酸溶液，置沸水浴中加熱水解數(shù)分鐘，放冷后，滴加10氫氧化鈉溶液調(diào)pH至中性，重復上述斐林反應(yīng)，如仍產(chǎn)生磚紅色氧化亞銅沉淀，表明可能含有多糖或苷類。54（2）氨基酸、多肽

37、和蛋白質(zhì)類v1）茚三酮反應(yīng)：取供試液點于濾紙片上，噴霧茚三酮試劑后，吹熱風數(shù)分鐘，如呈紫紅色或藍色，表明可能含氨基酸、多肽或蛋白質(zhì)。v2）雙縮脲反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加1滴10氫氧化鈉試劑，搖勻，再加0.5硫酸銅溶液，邊加邊搖勻，如溶液呈現(xiàn)紫色、紅紫色或藍紫色，表明可能含有多肽或蛋白質(zhì)。v3）酸性蒽醌紫反應(yīng)：取供試液點于濾紙片上，噴灑酸性蒽醌紫試劑，如呈現(xiàn)紫色，表明可能含有蛋白質(zhì)。55（3）酚類、鞣質(zhì)類化合物v1）三氯化鐵反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加醋酸酸化后，加數(shù)滴1三氯化鐵試劑，溶液如呈顯綠、藍綠、藍黑或紫色，表明可能含有酚性成分或鞣質(zhì)。v2）三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)：取供試液點

38、于濾紙片上，干燥后，噴灑三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑，如立即呈現(xiàn)藍色，表明可能含有鞣質(zhì)。噴試劑后應(yīng)立即觀察，若放置一段時間，背景也能逐漸呈藍色。如欲使紙上的斑點保存下來，在紙片仍濕潤時，用稀鹽酸洗滌，再用水洗至中性，置室溫干燥即可。56v3）香草醛-鹽酸反應(yīng)：取供試液點于濾紙片上，干燥后，噴灑香草醛-鹽酸試劑，如立即呈不同程度的紅色，表明含有間苯二酚和間苯三酚結(jié)構(gòu)的化合物。v4）明膠-氯化鈉反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加入12滴明膠-氯化鈉試劑，如產(chǎn)生白色混濁或沉淀，表明可能含有鞣質(zhì)。v5）咖啡堿反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加入數(shù)滴0.1咖啡堿溶液，如產(chǎn)生棕色沉淀，表明可能含有鞣質(zhì)。57（4）有

39、機酸類v1）pH試紙反應(yīng)：取供試液，以廣泛pH試紙測試，如呈酸性，表明可能含有有機酸或酚類成分。v2）溴酚藍反應(yīng)：取供試液點于濾紙片上，噴灑0.1溴酚藍試劑的70乙醇溶液，如在藍色背景上產(chǎn)生黃色斑點，表明可能含有有機酸。如顯色不明顯，可再噴霧氨水，然后暴露于鹽酸蒸氣中，背景逐漸由藍色變成黃色，而有機酸的斑點仍為藍色。58（5）皂苷類v1）泡沫反應(yīng)：取2ml供試液于試管中，劇烈振搖2分鐘，如產(chǎn)生大量持久性泡沫，再把溶液加熱至沸或加入乙醇，再振搖，如仍能產(chǎn)生多量持久性泡沫，表明可能含有皂苷。v2）溶血反應(yīng)：取供試液點于濾紙片上，干燥后，加1滴2紅細胞試液，數(shù)分鐘后，如在紅色背景中出現(xiàn)白色或淡黃色斑

40、點，表明可能含有皂苷。本實驗也可在試管中進行。592.醇溶性成分的檢識 取10g中藥粗粉，加100ml乙醇，沸水浴中回流提取1小時，濾過。濾液回收乙醇至無醇味，取1/2量濃縮液，加10ml乙醇溶解，供甲項檢識。剩余的濃縮液加10ml 5鹽酸，充分攪拌，濾過，濾液部分供乙項檢識。酸水不溶部分，加10ml醋酸乙酯溶解，醋酸乙酯液用5氫氧化鈉溶液振搖洗滌2次（每次23ml），棄去堿水層。醋酸乙酯層再用蒸餾水洗12次，至水洗液呈中性，棄去水洗液，置于水浴上蒸發(fā)除去醋酸乙酯，殘留物用15ml乙醇溶解，供丙項檢識。60甲項檢識（1）鞣質(zhì)類：同水溶性成分檢識（2）有機酸類：同水溶性成分檢識（3）黃酮類v1）

41、鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加鎂粉適量，搖勻，加25滴濃鹽酸，即產(chǎn)生劇烈反應(yīng)，如溶液呈紅色或紫紅色，表明可能含有黃酮類。v2）三氯化鋁反應(yīng)：取供試液點于濾紙上，晾干，噴霧三氯化鋁試劑，干燥后，斑點呈鮮黃色，如在紫外燈下觀察，斑點有明顯的黃綠色熒光，表明可能含有黃酮類。v3）氨熏反應(yīng)：取供試液滴于濾紙片上或硅膠色譜板上，置氨氣中熏片刻，斑點呈亮黃色，在紫外燈下觀察，斑點呈黃色熒光，表明可能含有黃酮類。61（4）蒽醌類化合物v1）堿液反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加10苛性堿試劑呈紅色，如加酸使成酸性，則紅色褪去，表明可能含有蒽醌類。v2）醋酸鎂反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加數(shù)滴1醋

42、酸鎂甲醇溶液，如溶液呈橙紅色、紫色等顏色，表明可能含有蒽醌類。62（5）甾體和三萜類v1）醋酐-濃硫酸反應(yīng)：取1ml供試液，置蒸發(fā)皿中水浴蒸干，加1ml冰醋酸使殘渣溶解，再加1ml醋酐，最后加1滴濃硫酸，如溶液顏色由黃紅紫藍墨綠，表明可能含有甾體類成分。如溶液最終呈現(xiàn)紅或紫色，表明含有三萜類成分。v2）三氯醋酸反應(yīng)：取供試液滴于濾紙片上，滴三氯醋酸試劑，加熱至60，產(chǎn)生紅色，漸變?yōu)樽仙砻骱摅w類成分。加熱至100才顯紅色、紅紫色，表明含有三萜類成分。v3）氯仿-濃硫酸反應(yīng)：取1ml供試液，置于蒸發(fā)皿中水浴蒸干，加1ml氯仿使殘渣溶解，將氯仿液轉(zhuǎn)入試管中，加1ml濃硫酸使其分層，如氯仿層顯紅

43、色或青色，硫酸層有綠色熒光，表明可能含有甾體或三萜。63乙項檢識（1）生物堿類v1）碘化鉍鉀反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加12滴碘化鉍鉀試劑，如立即有棕黃色至棕紅色沉淀產(chǎn)生，表明可能含有生物堿。v2）碘化汞鉀反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加23滴碘化汞鉀試劑，如產(chǎn)生白色或類白色沉淀，表明可能含有生物堿。v3）碘-碘化鉀反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加23滴碘-碘化鉀試劑，如產(chǎn)生褐色或暗褐色沉淀，表明可能含有生物堿。v4）硅鎢酸反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加12滴硅鎢酸試劑，如產(chǎn)生黃色沉淀或結(jié)晶，表明可能含有生物堿。64丙項檢識（1）強心苷類v1）堿性苦味酸反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加數(shù)

44、滴堿性苦味酸試劑，如溶液即刻或15分鐘內(nèi)顯紅色或橙紅色，表明可能含有強心苷類。v2）間二硝基苯反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加數(shù)滴間二硝基苯試劑，搖勻后再加數(shù)滴20氫氧化鈉，如產(chǎn)生紫紅色，表明可能含有強心苷類。65v3）冰醋酸-三氯化鐵反應(yīng)：取1ml供試液于蒸發(fā)皿中，水浴上蒸干，殘留物加0.5ml冰醋酸-三氯化鐵試劑溶解后，置于試管內(nèi)，沿管壁加入1ml濃硫酸，使分成二層，如上層為藍綠色，界面處為紫色或紅色環(huán)，表明可能含有2，6-二去氧糖的強心苷類。v4） 呫噸氫醇反應(yīng)：取1ml供試液于蒸發(fā)皿中，水浴上蒸干，加呫噸氫醇試劑，置水浴上加熱2分鐘，如溶液顯紅色，表明可能含有2，6-二去氧糖的強心苷類

45、。v本實驗也可取強心苷固體樣品少許，加入1ml呫噸氫醇試劑振搖，置水浴上加熱3分鐘，如呈現(xiàn)紅色，表明可能含有2，6-二去氧糖。66（2）香豆素、內(nèi)酯類v1）異羥肟酸鐵反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加7鹽酸羥胺醇溶液及10氫氧化鈉溶液各23滴，置沸水浴上加熱數(shù)分鐘至反應(yīng)完全，放冷，加1鹽酸調(diào)pH34，再加12滴1三氯化鐵試劑，如溶液為紅色或紫色，表明可能含有香豆素或內(nèi)酯類。v2）開環(huán)-閉環(huán)反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，加23滴1氫氧化鈉溶液，于沸水浴上加熱34分鐘，得澄清溶液，再加35滴2鹽酸使溶液酸化，如溶液變?yōu)榛鞚幔砻骺赡芎袃?nèi)酯類化合物。67v3）重氮化偶合反應(yīng)：取1ml供試液于試管中，

46、加數(shù)滴5碳酸鈉試劑，于沸水浴上加熱數(shù)分鐘，冷后，加數(shù)滴新配制的重氮鹽試劑，如呈紅色或紫色，表明可能含有香豆素類化合物。v4）間硝基苯反應(yīng)：取供試液點于濾紙片上，噴灑2間硝基苯試劑，待乙醇揮發(fā)后，再噴灑2.5mol/L氫氧化鉀溶液，置70100的恒溫箱中加熱，如呈紫紅色，表明可能含有內(nèi)酯類化合物。本試驗也可在試管中進行。v5）熒光反應(yīng)：取供試液，點于濾紙片上或硅膠色譜板上，干燥后置紫外燈下觀察，如呈現(xiàn)藍-綠色熒光，再噴灑1氫氧化鉀試劑，熒光加強，表明可能含有香豆素類化合物。68v3.石油醚溶性成分的檢識 取2g中藥粗粉，加10ml石油醚，室溫下浸漬提取23小時，濾過，濾液作下列成分檢識。（1）甾

47、體、三萜類：同醇溶性成分甲項檢識。69（2）揮發(fā)油、油脂類v1）油斑試驗：取供試液點于濾紙片上，室溫下?lián)]去溶劑后，濾紙片上如留有油斑，表明可能含有油脂或揮發(fā)油，若稍經(jīng)加熱，油斑消失或減少，表明可能含有揮發(fā)油，如油斑無變化，表明可能含有油脂。v2）香草醛-濃硫酸反應(yīng)：取供試液點于硅膠色譜板上，揮去石油醚，噴灑香草醛-濃硫酸試劑，如產(chǎn)生紅、藍、紫等顏色，表明可能含有揮發(fā)油、萜類和甾醇。704.氰苷類成分的檢識v（1）苦味酸鈉反應(yīng)：取1g樣品，檢前搗碎，置于試管中，加數(shù)滴蒸餾水使?jié)駶櫍谠嚬苤袘覓煲粭l苦味酸鈉試紙（勿使試紙接觸試管下部樣品），用膠塞塞住試管，于5060水浴中加熱1530分鐘，如試紙由

48、黃色變?yōu)榇u紅色，表明可能含有氰苷。v（2）普魯士藍反應(yīng)：取1g樣品，檢前搗碎，置于試管中，加蒸餾水使?jié)駶櫍⒓从脼V紙將試管口包緊，并在濾紙上加1滴10氫氧化鉀溶液，于5060水浴中加熱1530分鐘，再在濾紙上分別滴加10硫酸亞鐵試劑、10鹽酸、5三氯化鐵試劑各1滴，如濾紙顯藍色，表明可能含有氰苷。715.實驗說明及注意事項v（1）本實驗所用的供試品，可根據(jù)具體情況，靈活選擇，但應(yīng)包括試驗材料項中所列出的成分，提倡盡可能使用有代表性的化學對照品。v（2）預試驗反應(yīng)完成后，首先對反應(yīng)結(jié)果明顯的成分進行分析判斷，作出初步結(jié)論。而對某些反應(yīng)結(jié)果不十分明顯的，應(yīng)進一步濃縮處理供試液，再進行檢識或另選一些

49、試劑進行檢識，有時可配合色譜法檢識。72v（3）判斷分析各反應(yīng)結(jié)果時，應(yīng)綜合考慮，例如異羥肟酸鐵反應(yīng)為陽性的有酯、內(nèi)酯、香豆素類等化合物，要配合香豆素的特有反應(yīng)，將香豆素與其它酯類化合物進行區(qū)別。v（4）預試驗結(jié)果一般只能提供試樣中可能含有哪些類型的化學成分，然后設(shè)計提取分離的工藝方法，通過對提取分離得到的成分進一步檢識，才能確定該藥材中含有哪些成分。73（五）色譜預試（五）色譜預試 色譜預試不僅可以減少成分間的相互干擾，還可以根據(jù)展開劑和各成分的比移值Rf，推斷各成分的極性大小和溶解性能。如有尋查物的標準品作對照，可以初步判斷供試液中含有何種化合物。各類成分的常用色譜預試條件見表12-2。 7475三、活性成分篩選三、活性成分篩選（一）活性成分篩選的兩種思路（一）活性成分篩選的兩種思路 對中藥進行有效成分探索時，進行活性成分篩選應(yīng)以能反映中藥治療作用的藥理活性指標（即動物試驗）作為指針。篩選方法有兩種：一種是在提取分離得到單體后再進行活性測試，即對每一個單體成分進行多個生物活性試驗指標的觀察。這種方法測試結(jié)果比較容易判斷，但分離工作盲目性較大，特別是那些活