1、臨床研究用間充質干細胞制劑分期檢測項目對照表一、背景介紹間充質干細胞（MSC）由于來源方便、安全性相對較好等優點，目前較所有其它干細胞產品的研發發展更加迅猛。加拿大、韓國等國家的藥品監管機構已批準了超過4種不同來源間充質干細胞制劑作為藥物上市，國內也有數家公司正在進行間充質干細胞制劑的注冊申報工作，目前有3家獲批IND。一般來說，間充質干細胞具有跨胚層的多向分化潛能，表 現為向骨、軟骨、脂肪、肌、神經等細胞分化的能力，而且具有調節免疫應答的特性，在臨 床研究中主要用于治療移植物宿主排斥反應（GVHD ）、骨關節炎、肝纖維化、糖尿病、結腸炎和紅斑狼瘡等疾病。然而，作為細胞治療產品，間充質干細胞從

2、其獲取、擴增、體外復雜操作、凍存、使用 等不同環節，都可能存在外在和內在的風險因素。另外，間充質干細胞的分離、培養、擴增 等體外操作過程尚缺乏標準化規程，導致不同的間充質干細胞制劑之間的特性，特別是生物學效應差異性較大。為了更有效地對間充質干細胞制劑進行質量控制，確保其安全、有效和質量可控，小編在干細胞制劑質量控制及臨床前研究指導原則（試行稿（以下簡稱指導原則）的指導下，結合深圳市地方標準臨床研究用人臍帶來源間充質干細胞制劑規范整理出來了全面的間充質干細胞質量評價體系和相應的檢驗方法。臨床研究用間充質干細胞制劑分期檢測項目對照表細胞產品質控項目匯總項目分類檢測項目標準要求研發階段檢驗生產制備階

3、段檢驗出廠檢驗型式檢驗HBsAg （ELISA 法）HBsAg 陰性是是否否病原體HBcAb （ELISA 法）HBcAb 陰性是是否否篩查，HBV-DNA （PCR 法）HBV-DNA 陰性是是否否既往病HCVAb （ELISA 法）HCVAb 陰性是是否否史（特HCV-RNA （PCR 法）HCV-RNA 陰性是是否否別是患HIV （I +nAb （ELISA法）HIV （ I + n Ab 陰性是是否否杓嚴重傳染性HIV-1 RNA （ PCR 法）HIV-1 RNA 陰性是是否否疾病）CMV-IgM （ELISA 法）CMV-IgM 陰性是是否否和家族史（有Anti-TP （TRUST

4、 或TPPA 法）Anti-TP 陰性是是否否明確遺EBV-IGM （ELISA 法）EBV-IGM 陰性是是否否傳性疾HTLV （ ELISA 法）HTLV陰性是是否否病）6-磷酸葡萄糖脫氫酶2500 到 5800是是否否谷丙轉氨酶ALT 040U/L是是否否外觀要性狀乳白色至淡黃色的澄明液體是是是是求可見異物無肉眼可見異物（如沉淀、絮狀物等）是是是是組織再促血管形成功能血管靜脈內皮細胞在4 h形成血管環數37個/10000個細胞是否否是切匕匕 目生巨噬細胞極化將產品與巨噬細胞共培養24h后，與巨噬細胞對照組相比，培養液上清中 TNF- a ,IL-1 0水平應下降，是否否是TGF- 0 ,

5、 IL-10水平應上升，且差異具有統計學意義（P< 0.05 ）抗凋亡功能收集培養產品 24h后上清液，培養成纖維細胞，與普通培養基組相比，成纖維細胞凋亡比例應下降，且差異具有統11學意義（P< 0.05 ）是否否是分化能力成骨細胞向成骨細胞分化后，被茜素紅染成紅色或被馮庫薩染成黑色，染色面積占總面積的比例50%是否否是成軟骨細胞向成軟骨細胞分化后，形成的軟骨球表卸或石蠟切片被甲苯胺藍染成藍色或被II型膠原蛋白抗體染色，染色面積占總面積比例80%是否否是成脂肪細胞向成脂肪細胞分化后，被油紅氧染成紅色，染色面積占總面積的比例 50%是否否是基本性能細胞形態貼壁狀態下為梭形是是否是貼壁

6、生長率12小時內可貼壁檢測，貼壁細胞數應占總接種細胞數的80%以上。是是否是細胞數量每個使用單位（100ml ± 5ml）產品含有的細胞數量應為（2.0 5.0） X107t是是是是細胞活率產品發放前細胞活率95%產品在 28c環境下保存 6h內，細胞活率>90%;產品在 1825c環境下保存 4h內，細胞活是是是是率90%細胞表面標志物CD73+、CD105+ 和 CD90+R 95%CD45+ 、CD34+ 、CD14+ 、CD19+ （或 CD79a ）和HLA-DRY 2%是是是是群體倍增時間細胞群體倍增時間應大于8h且小于48h是是否是集落形成率集落形成率10%是是否

7、是細胞周期產品的G0/G1期細胞含量應大于80%且小于 90%,G2-M 期 5%是是否是端粒酶活性產品的兩代次細胞端粒酶活性差異10%是是否是安全性能無菌檢測不得檢出是是是是支原體檢測不得檢出是是是是內毒素檢測<0.5EU/ml是是是是外源病毒因子檢測不得檢出是是是是核型異常率檢測核型異常的細胞 0%具有相同核型異常的細胞10%復發性核型異常 5%是是是是致瘤性檢測免疫缺陷小鼠體內注射 3個月不可形成腫瘤；軟瓊脂克隆形成率，不得檢出克隆是是否是異常毒性檢測試驗動物無肝腎毒性且不可死亡是否是是殘留物檢測抗生素不得檢出外源DNA殘留量 100Pg廣品制備1小時內（加入人白蛋白"前）懸液蛋白質不得檢出懸液磷酸鹽不得檢出是否是是三、小結近年來，間充質干細胞（以下簡稱“ MSC”）已經被廣泛應用于科學研究和臨床研究試驗，對退行性疾病、免疫失調疾病等取得了較好的臨床治療效果，具有十分廣闊的臨床應用前景。間充質干細胞的生物安全性、穩定性和均一性對其臨床應用至關重要。然而，目前國內外尚無臨床研究用間充質干細胞