1、鐵心甘草醇提物對小鼠離體子宮平滑肌的舒張作用及其機制探討    作者：杜娟 周東仙 王英華 余建強 【摘要】 目的 觀察鐵心甘草醇提物對小鼠離體子宮平滑肌收縮運動的影響及作用機制。方法 雌性未孕小鼠，己烯雌酚致敏后，制備離體子宮標本，觀察鐵心甘草醇提物對離體子宮平滑肌的作用，以及加入鹽酸苯海拉明、甲磺酸酚妥拉                     

2、;             作者：杜娟 周東仙 王英華 余建強 【摘要】  目的 觀察鐵心甘草醇提物對小鼠離體子宮平滑肌收縮運動的影響及作用機制。方法 雌性未孕小鼠，己烯雌酚致敏后，制備離體子宮標本，觀察鐵心甘草醇提物對離體子宮平滑肌的作用，以及加入鹽酸苯海拉明、甲磺酸酚妥拉明、鹽酸維拉帕米、吲哚美辛對鐵心甘草作用的影響。結果 鐵心甘草醇提物(0.4、0.6、0.8g/L)可顯著抑制未孕小鼠離體子宮平滑肌的自發性收縮活動。鹽酸維拉帕米和吲哚美辛對鐵心甘草舒

3、張小鼠離體子宮平滑肌的作用具有顯著性影響。甲磺酸酚妥拉明可增加鐵心甘草的作用時間，但不能增加鐵心甘草的作用強度。鹽酸苯海拉明對鐵心甘草抑制子宮平滑肌的作用無顯著性影響。結論 鐵心甘草醇提物具有松弛小鼠離體子宮平滑肌的作用，該作用可能與受體、抑制細胞內鈣庫釋放及抑制前列腺素的合成和釋放有關。 【關鍵詞】  鐵心甘草醇提物 小鼠 子宮平滑肌 機制鐵心甘草為豆科植物甘草的根和根莖心部部分，質地堅硬呈紫黑色，產于西北各省區，我區主產于鹽池、靈武等縣。微苦、甘、平。功能和中緩急、理氣止痛。民間用于治療急性腸炎、胃炎、嘔吐、腹瀉及婦女痛經等1。侯玲玲、趙自強等研究顯示，此藥用于治療痛經具有良好的

4、臨床療效2。本研究觀察鐵心甘草醇提物對小鼠子宮平滑肌的作用并對其作用機制進行初步的探討。1  材料與方法 1.1  動物  昆明種小鼠60只，雌性，未孕，體重2530g。由寧夏醫科大學實驗動物中心提供。1.2  儀器  Biolap 420E+生物信號采集系統(成都泰盟科技有限公司)，FT-100 生物張力傳感器(成都泰盟科技有限公司)，超級恒溫水浴(KAYAGAKI IRIKA KOGYO CO.LTD.)。1.3  藥品及制備  鐵心甘草醇提物(寧夏藥檢所王英華提供)，己烯雌酚注射液(天津金耀氨基酸有限公司，批

5、號：12020536)，鹽酸苯海拉明注射液(天津市和平制藥廠，批號：800712)，甲磺酸酚妥拉明注射液(上海旭東海普藥業有限公司，批號：31020589)，鹽酸維拉帕米注射液(上海禾豐制藥有限公司，批號：31021343)，吲哚美辛(上海第十七制藥廠，批號：840303)。吲哚美辛于50g/L的NaOH溶液中溶解后，以10mol/L鹽酸滴定至pH為7.4。4種藥品分別制備為2×10-6 mol/L、2×10-6 mol/L、2×10-7 mol/L、2×10-5 mol/L終濃度的溶液。1.4  實驗方法  實驗前3d，按 0.02

6、5mg/10g 體重給小鼠腹腔注射己烯雌酚，隔天1次，共2次，以提高子宮對藥物的敏感性。用頸椎脫臼法將小鼠處死，剪開腹腔，揭起腸管及網膜，可見淡粉色的索狀子宮，左右各一。輕輕分離，然后結扎兩側子宮遠近端，剪斷底部，取出子宮置于含5mL Kreb's液的恒溫浴槽內，將子宮一端固定在玻璃掛鉤上，另一端與張力傳感器相連，張力調到0.5g。恒溫浴槽內的溫度保持(37±0.5)，并不斷通入95氧氣5二氧化碳的混合氣體，6070個氣泡/min。    將子宮標本隨機分為三組：正常對照組、鐵心甘草組及受體拮抗劑+鐵心甘草組。各組待子宮的自發活動平穩30min后

7、，記錄給藥前正常的子宮收縮曲線10min，然后各組分別加入不同的藥物。子宮平穩的自發活動(即不加入任何藥物)為正常對照組，累計加入鐵心甘草醇提物(以下簡稱鐵心甘草)100 g/L 10L使其終濃度(指溶于浴槽中5mL溶液后的濃度)分別為0.2、0.4、0.6、0.8 g/L，為鐵心甘草組。受體拮抗劑+鐵心甘草組即：子宮的自發活動平穩后分別加入鹽酸苯海拉明、甲磺酸酚妥拉明、鹽酸維拉帕米、吲哚美辛5min后，再加入鐵心甘草(0.6 g/L)。用 Biolap 420E+生物信號采集系統記錄子宮平滑肌收縮運動，各組分別觀察和記錄給藥前后5min內的子宮平滑肌收縮的頻率、幅度和收縮間隔的持續時間，進行

8、比較。1.5  統計學方法  數據以(±s)表示，使用SPSS 10.0軟件進行方差分析，以P0.05為差異有統計學意義。2  結果2.1  鐵心甘草對小鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響    與正常對照組相比，鐵心甘草隨劑量增加可逐漸減弱子宮平滑肌自發收縮運動，收縮波的頻率減慢，振幅減小，收縮波間隔的持續時間增加，見表1。表1  鐵心甘草對小鼠離體子宮平滑肌收縮活動的影響（略）*與對照組比較*P0.052.2  使用拮抗劑后鐵心甘草對小鼠離體子宮平滑肌作用的影響   

9、0;  鹽酸維拉帕米和吲哚美辛均可增強鐵心甘草抑制子宮平滑肌的作用，表現為子宮平滑肌的收縮頻率減小、收縮振幅降低及收縮波間隔的持續時間延長，其與鐵心甘草組相比差異均具有統計學意義；受體阻斷劑甲磺酸酚妥拉明可延長子宮平滑肌收縮間隔的持續時間，而對收縮頻率和收縮振幅均無顯著性影響；H1受體阻斷劑鹽酸苯海拉明，可減弱鐵心甘草對子宮平滑肌的作用，表現為收縮振幅增大，且收縮頻率和收縮波間隔的持續時間與鐵心甘草組相比差異無統計學意義，見表2。表2  使用拮抗劑后鐵心甘草對小鼠離體子宮平滑肌作用的影響（略）與鐵心甘草組比較*P0.05；與正常對照組比較P0.05(責任編輯：admin)&

10、#160;                3 討論 原發性痛經是由于各種原因導致子宮肌肉不規則痙攣性收縮而引起，目前醫學界對其發病機制還不完全清楚，但普遍認為痛經的發生與體內前列腺素F2(p rostaglandinF2，PGF2)、縮宮素(催產素，oxytocin)、血            3  討論 &

11、#160;  原發性痛經是由于各種原因導致子宮肌肉不規則痙攣性收縮而引起，目前醫學界對其發病機制還不完全清楚，但普遍認為痛經的發生與體內前列腺素F2(p rostaglandinF2，PGF2)、縮宮素(催產素，oxytocin)、血管加壓素等過高引起子宮過度收縮有關7-8。痛經患者普遍伴隨子宮過度收縮、宮內壓升高、子宮局部缺血和血流不暢，以及由此所引起的下腹部疼痛等癥狀。鐵心甘草具有緩急、止痛之功。動物實驗證明，鐵心甘草對動物離體和在體的子宮平滑肌均具有明顯的舒張作用，并能對抗催產素和MPGF2引起的子宮劇烈收縮1-2。實踐證明，鐵心甘草對痛經及痛經伴發的胃腸道反應有可靠的治療作用

12、2。本實驗結果顯示，鐵心甘草醇提物可抑制小鼠離體子宮平滑肌的自發收縮活動。加入受體阻斷劑甲磺酸酚妥拉明后，子宮平滑肌收縮間隔的持續時間延長，且與鐵心甘草組相比具有統計學意義，但其收縮頻率和收縮振幅與鐵心甘草組相比均無統計學意義，因此，提示為甲磺酸酚妥拉明可增加鐵心甘草作用的時間，但不能增加鐵心甘草的作用強度，其作用機制也可能與受體有關。在加入前列腺素合成酶抑制劑吲哚美辛后，鐵心甘草的抑制作用與鐵心甘草組相比差異有統計學意義，提示鐵心甘草的抑制作用可能也與前列腺素的合成與釋放有關。在使用L型電壓依從性Ca2通道(L-VDCC)阻斷劑鹽酸維拉帕米后，與鐵心甘草組相比，鐵心甘草舒張子宮平滑肌的作用亦

13、具有統計學意義，提示鐵心甘草的抑制作用也可能與抑制細胞內鈣庫釋放有關。有報道9，細胞外Ca2主要通過L-VDCC進入細胞內，該通道常隨動作電位的發生而開放。L-VDCC是平滑肌興奮收縮耦聯的重要部分，胞漿內游離Ca2濃度是肌肉收縮蛋白活動的決定性調節劑5。加入H1受體阻斷劑鹽酸苯海拉明后，離體子宮平滑肌收縮的振幅加大，并且其收縮頻率和收縮波間隔的持續時間與鐵心甘草組相比均無統計學意義，提示鐵心甘草的抑制作用與H1受體無關。本實驗結果提示，鐵心甘草醇提物抑制小鼠子宮平滑肌收縮運動的作用可能與受體及通道L-VDCC使平滑肌細胞內Ca2濃度降低有關，也與前列腺素的合成與釋放有關。【參考文獻】

14、0; 1 趙自強，高保京，韓生銀，等.鐵心甘草對大鼠離體子宮的作用研究J.寧夏醫學院學報，1996，18(1)：20-23.2 趙自強，牛陽，韓生銀，等.鐵心甘草治療痛經藥理作用的實驗研究J.中國中醫藥科技，1995，2(6)：26-27.3 李志強，馬力揚，徐敬東，等.香附對未孕大鼠離體子宮肌收縮的影響J.西安交通大學學報(醫學版)，2007，28(4)：399-400.4 徐敬東，王文，秦曉民.遠志增強未孕大鼠子宮平滑肌運動的機制研究J.中國中藥雜志，2005，30(4)：295-297.5 徐敬東，王文，楊惠霞，等.延胡索對未孕大鼠離體子宮平滑肌運動的抑制作用J.中國組織工程研究與臨床康

15、復，2007，11(21)：4178-4181.6 趙丁，詹文紅，李連懷，等.生化湯提取物對正常未孕、雌激素預處理及產后小鼠離體子宮平滑肌收縮功能的影響J.中國中藥雜志，2006，31(3)：2437 Lundstrêm V，Gréen K.Endogenous levels of prosta2 glandin F2alpha and itsmain metabolites in plasma and endometrium of normal and dysmenorrheic womenJ.Am J Obstet Gynecol，1978，130(6)：640-646

16、.8 AkerlundM.Involvement of oxytocin and vasop ressin in the pathophysiology of preterm labor and primary dys2 menorrheaJ.Prog Brain Res，2002，139(4)：359-365.9 Zhenyu C，Qinghuiqi，LixinL，et al.Effects of emodin on Ca2+ signal transduction of smooth muscle cells in multiple organ dysfunction syndromeJ.

17、J Surg Res，2006，131(1)：80-85.(責任編輯：admin)                 3 討論 原發性痛經是由于各種原因導致子宮肌肉不規則痙攣性收縮而引起，目前醫學界對其發病機制還不完全清楚，但普遍認為痛經的發生與體內前列腺素F2(p rostaglandinF2，PGF2)、縮宮素(催產素，oxytocin)、血        

18、;    3  討論    原發性痛經是由于各種原因導致子宮肌肉不規則痙攣性收縮而引起，目前醫學界對其發病機制還不完全清楚，但普遍認為痛經的發生與體內前列腺素F2(p rostaglandinF2，PGF2)、縮宮素(催產素，oxytocin)、血管加壓素等過高引起子宮過度收縮有關7-8。痛經患者普遍伴隨子宮過度收縮、宮內壓升高、子宮局部缺血和血流不暢，以及由此所引起的下腹部疼痛等癥狀。鐵心甘草具有緩急、止痛之功。動物實驗證明，鐵心甘草對動物離體和在體的子宮平滑肌均具有明顯的舒張作用，并能對抗催產素和MPGF2引起

19、的子宮劇烈收縮1-2。實踐證明，鐵心甘草對痛經及痛經伴發的胃腸道反應有可靠的治療作用2。本實驗結果顯示，鐵心甘草醇提物可抑制小鼠離體子宮平滑肌的自發收縮活動。加入受體阻斷劑甲磺酸酚妥拉明后，子宮平滑肌收縮間隔的持續時間延長，且與鐵心甘草組相比具有統計學意義，但其收縮頻率和收縮振幅與鐵心甘草組相比均無統計學意義，因此，提示為甲磺酸酚妥拉明可增加鐵心甘草作用的時間，但不能增加鐵心甘草的作用強度，其作用機制也可能與受體有關。在加入前列腺素合成酶抑制劑吲哚美辛后，鐵心甘草的抑制作用與鐵心甘草組相比差異有統計學意義，提示鐵心甘草的抑制作用可能也與前列腺素的合成與釋放有關。在使用L型電壓依從性Ca2通道(

20、L-VDCC)阻斷劑鹽酸維拉帕米后，與鐵心甘草組相比，鐵心甘草舒張子宮平滑肌的作用亦具有統計學意義，提示鐵心甘草的抑制作用也可能與抑制細胞內鈣庫釋放有關。有報道9，細胞外Ca2主要通過L-VDCC進入細胞內，該通道常隨動作電位的發生而開放。L-VDCC是平滑肌興奮收縮耦聯的重要部分，胞漿內游離Ca2濃度是肌肉收縮蛋白活動的決定性調節劑5。加入H1受體阻斷劑鹽酸苯海拉明后，離體子宮平滑肌收縮的振幅加大，并且其收縮頻率和收縮波間隔的持續時間與鐵心甘草組相比均無統計學意義，提示鐵心甘草的抑制作用與H1受體無關。本實驗結果提示，鐵心甘草醇提物抑制小鼠子宮平滑肌收縮運動的作用可能與受體及通道L-VDCC

21、使平滑肌細胞內Ca2濃度降低有關，也與前列腺素的合成與釋放有關。【參考文獻】  1 趙自強，高保京，韓生銀，等.鐵心甘草對大鼠離體子宮的作用研究J.寧夏醫學院學報，1996，18(1)：20-23.2 趙自強，牛陽，韓生銀，等.鐵心甘草治療痛經藥理作用的實驗研究J.中國中醫藥科技，1995，2(6)：26-27.3 李志強，馬力揚，徐敬東，等.香附對未孕大鼠離體子宮肌收縮的影響J.西安交通大學學報(醫學版)，2007，28(4)：399-400.4 徐敬東，王文，秦曉民.遠志增強未孕大鼠子宮平滑肌運動的機制研究J.中國中藥雜志，2005，30(4)：295-297.5 徐敬東，王文，楊惠霞，等.延胡索對未孕大鼠離體子宮平滑肌運動的抑制作用J.中國組織工程研究與臨床康復，2007，1