1、專題 2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題 2 分解尿素的細菌的分離與計算課時重難點重點】 對土樣的選取和選擇培養(yǎng)基的配制。難點】 對分解尿素的細菌的計數(shù)。典型例題：1下列關(guān)于分解尿素的細菌，說法正確的是（A.以尿素作為唯一碳源B.能分解尿素的原因是能合成并分泌蛋白酶C.環(huán)境中含有大量的尿素誘導(dǎo)該細菌產(chǎn)生了分解尿素的特性D.以尿素為唯一氮源且添加了酸堿緩沖劑的培養(yǎng)基來培養(yǎng)該細菌后不會使酚紅指示劑變紅2原油含有大量致癌的“多環(huán)芳烴”，分子結(jié)構(gòu)十分穩(wěn)定，有些細菌可以利用原油中的多環(huán)芳烴為碳源，在培養(yǎng)基中形成分解圈。某小組以如何篩選出能降解原油的菌株并投入除污為課題設(shè)計了有關(guān)實驗。有關(guān)說法正確的是A用于篩選目

2、的菌株的培養(yǎng)基其主要特點是以原油（多環(huán)芳烴）為唯一碳源B培養(yǎng)基配制完成之后需進行消毒處理CD在選擇培養(yǎng)基上形成的菌落，即為能分解多環(huán)芳烴的目的菌種 篩選出目的菌種后，可用平板劃線法在培養(yǎng)基上進行接種和計數(shù)3關(guān)于生物技術(shù)實踐中的有關(guān)檢驗，不正確的是（A. 在果酒制作實驗結(jié)束時要檢驗是否有酒精產(chǎn)生，正確的操作步驟是先在試管中加入適量的發(fā)酵液,然后再加入硫酸和重鉻酸鉀的混合液B. 在微生物培養(yǎng)中，檢驗培養(yǎng)基是否被污染的方法是用一組不接種或接種無菌水的培養(yǎng)基與接種培養(yǎng)物的培養(yǎng)基一起培養(yǎng)C. 檢驗以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)是否分離出了分解尿素的細菌，方法是在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,若指示劑變紅，則說明分離成

3、功D. 檢驗胡蘿卜素純度的方法是紙層析法，原理是不同的色素分子在層析液中的溶解度不同，故隨層析 液在濾紙上擴散的速度不同，若樣品中有雜質(zhì)，則會出現(xiàn)不同的色素點（帶）4尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制選擇培養(yǎng)基時（A.葡萄糖在培養(yǎng)基中越多越好B.尿素分解菌有固氮能力，故培養(yǎng)基中只需無機氮5.下列生物學(xué)實驗操作，能夠順利達到實驗?zāi)康牡氖茿. 將果泥和果膠酶分裝在不同試管中恒溫處理后再混合，以探究果膠酶的最適溫度B. 洗滌紅細胞時，需要加入五倍體積的蒸餾水C. 土壤浸出液接種于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上以篩選出能分解尿素的細菌D. 根據(jù)SDS-凝膠電泳的結(jié)果可判斷蛋白質(zhì)的分子量大小6.下列有關(guān)生物技術(shù)實

4、踐的敘述，不正確 的是A.制作果醋時應(yīng)不斷通入無菌空氣B.在土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù)實驗中，應(yīng)采用平板劃線法C.通過比色法來檢測亞硝酸鹽含量需要制備標準顯色液(2)腐乳制作主要菌種是它能產(chǎn)生兩種酶將水豆腐中兩種主要大分子有機物分解成D.饑餓時，胰高血糖素分泌量上升，促進肝糖原和肌糖原分解7.下列是以酵母菌為材料進行的實驗，有關(guān)敘述錯誤的是(A.探究酵母菌的呼吸方式，可用溴麝香草酚藍檢測產(chǎn)生的COB.用酵母菌發(fā)酵釀制果酒，選擇酸性重鉻酸鉀檢測產(chǎn)生的酒精C.探究酵母菌種群數(shù)量變化，應(yīng)設(shè)空白對照排除無關(guān)變量干擾D.用稀釋涂布平板法培養(yǎng)計數(shù)，應(yīng)選擇有30300菌落數(shù)的平板&【生物一選修

5、1:生物技術(shù)實踐】有些細菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同學(xué)欲從污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株。回答問題:(1)在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講,該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。(2)(4)通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中，實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、。無菌技術(shù)要求實驗操作應(yīng)在附近進行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力9 人和哺乳動物的尿中含有尿素，大量尿素的存在會對環(huán)境造成污染。土壤中有些細菌含有脲酶，可

6、通過降解尿素作為其生長的氮源。現(xiàn)對土壤中的這類細菌進行分離實驗，請回答下列問題:(1) 分離培養(yǎng)細菌時必須進行無菌操作，包括培養(yǎng)基和各種器皿都必須是無菌的，培養(yǎng)基常用的滅菌方法有(2) 將樣液進行一系列的梯度稀釋，然后接種培養(yǎng)。在稀釋土壤溶液的過程每一步都要在旁進行操作。接種后的培養(yǎng)皿于37C的中培養(yǎng)。培養(yǎng)基。(3 )用含有酚紅指示劑的培養(yǎng)基篩選能分泌脲酶的細菌，從功能上劃分該培養(yǎng)基屬于若培養(yǎng)基中存在有分解尿素的細菌，其菌落周圍會出現(xiàn)紅色環(huán)帶，這是由于尿素被分解產(chǎn)生的使pH升高，酚紅指示劑產(chǎn)生的顏色變化，從而證明這一菌株可以尿素為氮源。變色區(qū)域越大，表明該菌株利用尿素的能力(4)與全營養(yǎng)培養(yǎng)基

7、中的菌落相比，以尿素為氮源的培養(yǎng)基中菌落數(shù)A.多 B .少 C .相等 D .幾乎為零 10.生物選修I生物技術(shù)實踐(15分)尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，經(jīng)微生物分解后能更好的被植物利用。某生物興趣小組試圖探究土壤中微(目的菌)。培養(yǎng)基成分如下表所示。將表中物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到lOOmL。實驗過程如右圖所示：KHsF 1. 4g2.1gM必6 - 7壓00.2s葡萄榨lOe尿素Ig瓊脂1宛90 回答下列問題：(1) 該培養(yǎng)基能篩選出目的菌的原因是 圖中將細菌轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基上接種時，可采用的方法是。初步篩選出來的菌種還需要進一步的鑒定：在培養(yǎng)基中加入指示劑，接種并培養(yǎng)初步篩選的菌種，若指示劑

8、變生物對尿素是否有分解作用，設(shè)計實驗并成功篩選到能高效分解尿素的細菌色，則可說明該菌種能夠分解尿素。(3)在實驗中，下列材料或用具需要滅菌的是，需要消毒的是(填序號)。培養(yǎng)細菌的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿玻棒、試管、錐形瓶和吸管實驗操作者的雙手(4)在進行分離分解尿素的細菌實驗時，A同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約50個菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約20個菌落。A同學(xué)的實驗結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有(填序號)。所取土樣不同培養(yǎng)基被污染接種操作錯誤沒有設(shè)置對照實驗(5)實驗結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進行處理后，才能倒掉。11.生物一選修1生物技術(shù)實踐(15分)請回答下列生物技術(shù)方面的問題:(1)在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)中，果醋的制作

9、往往在果酒制作基礎(chǔ)上進行，請用相關(guān)反應(yīng)式表示:人體能吸收的具鮮味的小分子有機物。分析下面培養(yǎng)基的配方：NaN KHPO、NaHPO、MgSO?7HO KCI、HQ若此培養(yǎng)基用于培養(yǎng)分解尿素的細菌，則應(yīng)除去上述成分，并加入物質(zhì)。該培養(yǎng)基能否培養(yǎng)月季花藥。胡蘿幣1果稱.果酷制件漩程（1）圖1中方框內(nèi)應(yīng)該填寫的的實驗步驟是，此步驟中起主要作用的微生物是，其發(fā)酵（需要/不需要）氧氣，適宜的發(fā)酵溫度范圍是（2）根據(jù)培養(yǎng)基的成分判斷，該同學(xué)能否分離出土壤中分解尿素的細菌?能/不能），原因（3）如果想進一步對初步篩選得到的菌株進行純化并計數(shù)，可采用的接種方法是。通常鑒定分解尿素的細菌的方法是在培養(yǎng)基中加入指

10、示劑。為什么? 提取胡蘿卜素的過程中，萃取加熱時需安裝冷凝回流裝置，其目的是卜素粗品鑒定的方法是 12.生物一一選修1:生物技術(shù)實踐專題（15分）F面是某同學(xué)制作果酒和果醋的實驗流程圖以及預(yù)分離土壤中能分解尿素的細菌的培養(yǎng)基配方，請回答挑選葡萄i沖洗一 採汁KH2PD4NaaHPO4MgSO4-7HiO酒箱發(fā)酵114 g;3丄呂0.3 gi1果酒果酵罷as葡萄糖尿素瓊脂l.Og10.Ogl.Og15.0g有關(guān)冋題。預(yù)分離土壤中能分解屎素御田菌的培養(yǎng)基配方三、授課過程:（一）基礎(chǔ)知識1.尿素是一種重要的氮肥，農(nóng)作物（能，不能）直接吸收利用，而是首先通過土壤中的細菌將尿素分解為，這是因為細菌能合成

11、，這樣也適2 科學(xué)家能從熱泉中把耐熱細菌篩選出來是因為 用于實驗室中微生物的篩選，原理是點評：生物適應(yīng)一定環(huán)境，環(huán)境對生物具有選擇作用。所以通過配制選擇培養(yǎng)基、控制培養(yǎng)條件等選 擇目的微生物。1思考1在該培養(yǎng)基配方中，為微生物的生長提供碳源的是，提供氮源的的是，瓊脂的作用是1思考2該培養(yǎng)基對微生物（具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機制是3 .在統(tǒng)計菌落數(shù)目時，常用來統(tǒng)計樣品中活菌數(shù)目的方法是。除此之外,也是測定微生物數(shù)量的常用方法。【補充】顯微鏡直接計數(shù)是測定微生物的方法。公式：觀察到的紅細胞平均數(shù)：觀察到的細菌平均數(shù)=紅細胞含量：細菌含量4.采用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)目時，培養(yǎng)基表

12、面生長的一個菌落，來源于。通過統(tǒng)計，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在的平板進行計數(shù)。3從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)的計算方法是4利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵是5位同學(xué)的結(jié)果接近真實值。你認為這兩位同學(xué)的實驗需要改進的操作是5.統(tǒng)計的菌落數(shù)比活菌的實際數(shù)目。這是因為當(dāng)兩個或多個細胞在一起時，平板上觀察到的只是菌落。因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用來表示。6 .設(shè)置對照的主要目的是7 .對照實驗是指除了的條件外，其他條件都的實驗。滿足該條件的稱為組,未滿足該條件的稱為組。（二）實驗設(shè)計1.實驗設(shè)計的內(nèi)容包括2 .根據(jù)圖示2-7填寫以下實驗流程:配制土

13、壤溶液系列稀釋涂布平板與培養(yǎng)菌落計數(shù)4.分離不同的微生物采用不同的稀釋度，其原因是，其目的是保證獲得的平板。細菌稀釋度為，放線菌稀釋度為,真菌稀釋度C培養(yǎng)12d,放線菌一般5.培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細菌一般在C培養(yǎng)57d,霉菌一般在C的溫度下培養(yǎng) 34d。.時的記錄作為結(jié)果，以防止因6.在菌落計數(shù)時，每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。選取而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。點評：菌種中有些菌體增殖快，有些菌體增值慢，所以培養(yǎng)時間要充足，使得每個菌體都能形成肉眼可觀察到的菌落。.等方面。7 .菌落的特征包括1思考8土壤微生物種類最多、數(shù)量最大的原因是什么?實驗過程取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。應(yīng)在火焰旁稱取土壤 10 g。將稱好的土樣倒入盛有 90mL無菌水的錐形瓶中，塞好棉塞。(3) 在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁進行。(4) 實驗時要對培養(yǎng)皿作好標記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等。(5) 為了提高效率，在操作時更加有條不紊，應(yīng)當(dāng)事先規(guī)劃時間。(三) 結(jié)果分析與評價1對分離的菌種作進一步的鑒定，還需要借助