1、實驗二花粉生活力得測定懸滴培養(yǎng)法一、實驗?zāi)康茫赫莆樟私饣ǚ凵盍y定得意義與方法.二、實驗材料：二月蘭花粉三、實驗儀器及藥品：凹玻片、蓋玻片、解剖針、鐐子、紗布、標(biāo)簽、鉛筆、顯微鏡、恒溫箱、蔗糖、蒸儲水、硼酸、凡士林.四、實驗原理：花粉就是植物自然授粉與人工雜交得主要物質(zhì)根底,花粉生活力得大小就是保證雜交成功得關(guān)鍵.在有性雜交育種中,常因父母本花期得不同,作為父本得花粉必須經(jīng)過貯藏直到母本植株開花時再用于授粉花粉在低溫0-2C、枯燥、黑暗等條件下代謝強度降低.花粉貯藏得原理就就是創(chuàng)造代謝強度低得環(huán)境,以延長花粉得壽命；或者雙親不在同一個地方,必須由外地郵寄花粉供給.經(jīng)過貯藏或外地郵寄得花粉就是

2、否已經(jīng)喪失生活力,必須經(jīng)過測定才能確定.鑒定花粉生活力得方法主要有四種：一就是將待測花粉直接授粉,然后統(tǒng)計結(jié)實率與結(jié)子數(shù).此法得缺點就是需要得時間較長,且實驗得結(jié)果易受氣候條件得影響.二就是將待測花粉授到柱頭上,隔一定時間切下柱頭,在顯微鏡下檢查花粉得萌發(fā)情況.根據(jù)萌發(fā)率得上下來鑒定花粉得生活力.三就是在培養(yǎng)基上進行花粉得人工萌發(fā),檢查待測花粉萌發(fā)率得上下.后兩種方法都就是根據(jù)花粉得萌發(fā)率來反映生活力得上下,有一定得參考價值.但就是萌發(fā)得不一定都能受精,特別就是人工萌發(fā)還受許多條件得限制,所以也只有相對得可靠性.四就是用染色方法來鑒定花粉得生活力.其原理就是在活得花粉內(nèi)有過氧化氫酶得存在,它可

3、以促進過氧化物 如H2O2放氧分解.這些剛被放出得活性氧很容易使復(fù)原劑氧化,常用無色聯(lián)苯胺、 -蔡酚等復(fù)原劑做指示劑,這些復(fù)原劑被氧化后表現(xiàn)紅色或玫瑰紅色.如果花粉就是活得,那么會很快被染成紅色或玫瑰紅色,如果花粉就是死得,那么這一反響遲遲不能進行,花粉保持原色.此法優(yōu)點就是比擬快捷,但就是比擬間接.本試驗采用懸滴培養(yǎng)法鑒定花粉生活力.五、實驗步驟：1,配培養(yǎng)液：用蒸儲水與蔗糖分別配成5%、10%、15%得蔗糖溶液,并在各培養(yǎng)液中加少量硼酸.2,取盛開得正在散粉得二月蘭花朵.3,播花粉：在凹玻片得凹點滴一滴清水.在蓋玻片中央滴一滴培養(yǎng)液,用鐐子輕輕夾取二月蘭彳#花藥,在培養(yǎng)液中央車5輕蘸一下,

4、使花粉均勻得分散在培養(yǎng)液得球面上.在蓋玻片得四角涂抹少量得凡士林,用鐐子夾住蓋玻片在上提得過程中迅速把它翻轉(zhuǎn)過來,小心放在凹玻片上,使培養(yǎng)液處在蓋玻片與凹點形成得小密室中.每個凹玻片分別做蔗糖溶液得三個濃度,并用蒸儲水做對照.4,培養(yǎng):做好得凹玻片上貼好標(biāo)簽,注明花粉種類、培養(yǎng)液得濃度以及時間,然后小心放到鋪有濕潤濾紙得培養(yǎng)皿中,放到2224C得恒溫箱中培養(yǎng)5ho5.觀察:從恒溫箱中取出凹玻片,在低倍鏡下隨機觀察三個視野,計算花粉得萌發(fā)率.以花粉管長度到達花粉粒徑得2倍及以上視為萌發(fā).六、結(jié)果分析1 .分析花粉萌發(fā)率高或低得原因.2 .本實驗關(guān)鍵性步驟總結(jié)及實驗中所存在問題得討論.七、作業(yè)1,

5、繪制一幅花粉粒萌發(fā)形態(tài)圖.2.花粉生活力測定在雜交育種中得重要意義？測定花粉生活力得方法有哪些？一般2核花粉粒較3核花粉粒高,對不適宜環(huán)境(溫度、濕度、輻射化學(xué)處理)反抗力強.原因：1、營養(yǎng)消耗2、代謝旺盛3、外壁薄等花粉生活力得研究對于農(nóng)業(yè)、林業(yè)來說,具有很重要得理論及生產(chǎn)實踐意義.它為植物得育種、培育、栽培,為進行人工授粉與雜交授粉,提供理論依據(jù).一般來講,花粉生活力得長短,即決定于植物得遺傳性,又受環(huán)境因素得影響.一般情況下,花粉生活力得長短依種而異,大多數(shù)植物得花粉只能活幾個小時、幾天或幾個星期.一般來瞧:木本植物草本植物2 2 胞花粉3 3 胞花粉影響花粉生活力得主要環(huán)境因素有：溫度

6、、濕度及空氣.現(xiàn)在延長花粉生活力得舉措主要有：超低溫(192(192C C 得液態(tài)空氣,196C,196C 得液態(tài)氮)、真空、降低氧分壓、快速冷凍枯燥等方法貯存.影響花粉粒生活得因素主要一般低溫(150c),低濕(相對濕度20/10050/100)低氧.正常情況,液態(tài)氮進行超低溫保存,如：水稻100C,85/100得濕度24小時；玉米50C90/100得濕度89天.但禾本科要求高濕.研究花粉儲藏對解決花期不遇問題相當(dāng)重要.：(1)植物盛花期采集發(fā)育良好得花粉;(2)將花粉枯燥至適宜貯藏得含水量,封裝在耐低溫容器內(nèi)；(3)經(jīng)預(yù)冷處理或直接置于低溫、超低溫條件下貯藏;(4)根據(jù)需要,隨時取出封存花

7、粉得容器進行緩慢或快速升溫解凍,使花粉復(fù)蘇；(5)采用花粉染色法、萌發(fā)法、授粉結(jié)實法鑒定花粉生活力；(6)具有生活力得花粉用于育種.實驗十七花粉活力得測定在作物雜交育種、作物結(jié)實機理與花粉生理得研究中,常涉及花粉活力得鑒定.掌握花粉活力快速測定得方法,就是進行雄性不育株得選育、雜交技術(shù)得改進以及揭示內(nèi)外因素對花粉育性與結(jié)實率影響得根底.一、花粉萌發(fā)測定法【原理】正常得成熟花粉具有較強得活力,在適宜得培養(yǎng)條件下便能萌發(fā)與生長,在顯微鏡下可直接觀察計算其萌發(fā)率,以確定其活力.【器材與用具】載玻片；顯微鏡；玻棒;恒溫箱；培養(yǎng)皿；濾紙.【試劑】培養(yǎng)基10%蔗糖,10Mg/L硼酸,05%得瓊脂:稱10g

8、蔗糖、1Mg硼酸、05g瓊脂與90M1水放入燒杯中,在100c水浴中溶化,冷卻后加水至100Ml備用.【方法】【方法】1、將培養(yǎng)基熔化后,用玻棒蘸少許,涂布在載玻片上,放入墊有濕潤試紙得培養(yǎng)皿中,保濕備用.2、采集絲瓜、南瓜或其她葫蘆科植物剛開放或?qū)⒁_放得成熟花朵,將花粉灑落在涂有培養(yǎng)基得載玻片上,然后將載玻片放置于墊有濕濾紙得培養(yǎng)皿中,在25c左右得恒溫箱或室溫20c條件下中孵育,510Min后在顯微鏡下檢查5個視野,統(tǒng)計其萌發(fā)率.【考前須知】1、不同種類植物得花粉萌發(fā)所需溫度、蔗糖與硼酸濃度不同,應(yīng)依植物種類而改變培養(yǎng)條件.2、此法也可用于觀察花粉管在培養(yǎng)基上得生長速度以及不同蔗糖濃度、

9、離體時間、環(huán)境條件等因素對花粉活力得影響.3、不就是所有植物得花粉都能在此培養(yǎng)基上萌發(fā),本法適用于易于萌發(fā)得葫蘆科等植物花粉活力得測定.二、碘一碘化鉀染色測定法【原理】多數(shù)植物正常得成熟花粉粒呈球形,積累較多得淀粉,I2KI溶液可將其染成藍色.發(fā)育不良得花粉常呈畸形,往往不含淀粉或積累淀粉較少,I2KI溶液染色呈黃褐色.因此,可用I2KI溶液染色來測定花粉活力.【器材與用具】顯微鏡；載玻片與蓋玻片；鐐子；棕色試劑瓶；燒杯；量筒;天平.【試劑】I2KI溶液:取2gKI溶于510M1蒸儲水中,參加1gI2,待完全溶解后,再加蒸儲水300M1.貯于棕色瓶中備用.【方法】采集水稻、小麥或玉米可育與不育

10、植株得成熟花藥,取一花藥于載玻片上,加1滴蒸儲水,用鐐子將花藥搗碎,使花粉粒釋放,再加12滴I2KI溶液,蓋上蓋玻片,在顯微鏡下觀察.凡就是被染成藍色得為含有淀粉得活力較強得花粉粒,呈黃褐色得為發(fā)育不良得花粉粒.觀察23張片子,每片取5個視野,統(tǒng)計花粉得染色率,以染色率表示花粉得育性.【考前須知】此法不能準(zhǔn)確表示花粉得活力,也不適用于研究某一處理對花粉活力得影響.由于三核期退化得花粉已有淀粉積累,遇碘呈藍色反響.另外,含有淀粉而被殺死得花粉粒遇I2KI也呈藍色.三、氯化三苯基四氮吵TTC法【原理】具有活力得花粉呼吸作用較強,其產(chǎn)生得NADH2或NADPH2可將無色得TTC2,3,5氯化三苯基四氮吵復(fù)原成紅色得TTF三苯基甲而使其本身著色,無活力得花粉呼吸作用較弱,TTC得顏色變化不明顯,故可根據(jù)花粉吸收TTC后得顏色變化判斷花粉得生活力.【器材與用具】顯微鏡；載玻片與蓋玻片；鐐子亙溫箱；棕色試劑瓶；燒杯;量筒；天平.05%TTC溶液:稱05gTTC放入燒杯中,參加少許95%酒精使其溶解,然后用蒸儲水稀釋至100M1.溶液避光保存,假設(shè)發(fā)紅時,那么不能再用.【方法】【方法】采集任何植物得花粉,取少許放在干潔得