1、附三： 項目編號： 201501 合肥學院碩士研究生項目學習結項報告書 項目名稱： 畜骨粉營養成分分析與模擬吸收測定 項目來源： 安徽合大環境監測有限公司 所屬專業： 環境工程 學 分： 平均 4 學分 / 人 項目完成人： 陳靜怡 指導教師： 肖厚榮 張靖華 所屬系（部）： 生物與環境工程系 項目負責人聯系電話：項目負責人電子郵箱： xhr 研究起止時間： 2015-7-152015-8-15 合肥學院研究生處制二一三 年 五 月一、開題工作小結（開題時間、地點，參與人員，項目實施計劃，導師指導意見等）專業實習結束后，很快就進入了項目學習。結合導師目前在研的課題和畢

2、業論文所在的方向，確定項目一在安徽合大環境監測有限公司進行，結合利用安徽合大環境監測公司和生物系的實驗儀器設備在肖厚榮老師和合大相關技術人員的指導幫助下去完成。于2015年7月15號開始到2015年8月15號結束。根據導師編制的任務書，本次學習主要是通過通過感官、物理和化學測定方法對冷凍粉碎和蒸煮法制得的畜骨（牛、羊等）骨粉進行品質分析和比較。主要測定其中水分、蛋白質、鈣和磷的含量；分別用胰蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶將對冷凍粉碎和高溫蒸煮法制得的畜（牛、羊）骨粉進行酶解，通過動物實驗，研究不同蛋白酶以及兩種制粉工藝對鈣的生物利用率的影響。為后續畜骨的工程化加工打下積淀理論基礎。二、中期檢查

3、與指導中期工作小結： 項目進行了一般基本上完成了骨粉的感官物理測定、化學測定和部分骨粉的鈣磷以及生物利用率測定，在實際操作過程中現很多問題，骨粉的鈣磷測定由于操作的不熟練性導致實驗次數增多，在導師的指導和合大技術人員的專業幫助下及時糾正了錯誤，項目總體進行較為順利。 學生簽名：陳靜怡 2015 年 8 月 10 日導師評價與指導： 陳靜怡同學認真對待項目學習，正式進入項目學習前，做了大量的準備工作，了解了上屆同學想目一的學習情況，經過慎重考慮，并結合研究生培養需要，選擇在安徽合大環境檢測有限公司。畜骨加工技術被列入2011-2015安徽省食品產業技術發展指南，選題本身難度較大，且首次作為項目學

4、習選題，但該同學迅速進入工作狀態。工作態度認真、誠實；學習努力，遵守校紀校規和公司有關規定，組織紀律性強。 校內外導師簽名： 肖厚榮 張靖華 2015 年8 月10 日三、項目學習總結（項目學習過程描述、取得的成果以及存在的問題等。）為期一個月的項目學習，主要是利用生物系與合大實驗室的實驗儀器對對骨粉中的成分進行測定，本次實習的主要內容是骨粉成分的測定。一、 感官鑒定：骨粉為灰白色或黃褐色細粉，無霉變，手用力握不成團，不發滑，松手即散；骨粉有蒸煮的特有氣味，無臭味或異味。實驗結果：通過對不同品種骨粉（豬骨、牛骨、羊骨）、不同部位（肋骨、脊骨、腿骨）和不同加工方法的骨粉進行感官鑒定，得出以下結論

5、：1、 脫脂對骨粉加工很重要，未經脫脂處理的骨粉較油膩、骨粉顏色偏黃褐色。2、 食用后的骨粉顏色普遍偏暗。二、 物理鑒定：取骨粉少許置燒杯中，加入適量飽和鹽水，骨粉顆粒漂浮于表面，經攪拌方下沉。實驗結果：無論采用何種方法加工制備的骨粉，其溶解性都很低，微溶于水。三、 化學鑒定：取骨粉0.5-1.0 克置于小燒杯中，加入25%鹽酸溶液5毫升，發出“沙沙”聲，小骨粒表面不斷產生氣泡至全部溶解，溶液略渾濁，表面有極少量有機物飄浮。實驗結果：無論是食用前還是食用后的骨頭加工成的骨粉，都能被鹽酸溶解，食用后的骨頭加工成的骨粉，顏色稍暗。四、 鈣磷含量測定 鈣含量測定： EDTA滴定法 1、原理根據鈣與氨

6、羧絡合劑能定量地形成金屬絡合物,該絡合物的穩定性較鈣與指示劑所形成的絡合物強.在一定的pH范圍內,以氨羧絡合劑EDTA滴定,在達到化學計量點時,EDTA就從指示劑絡合物中奪取鈣離子,使溶液呈現游離指示劑的顏色.由絡合劑消耗量計算出鈣的含量.2、配置相關試劑（1）鈣標準溶液的配置將CaCO3在烘箱中于110條件下干燥2h后，準確稱取1.2500g于燒杯中，加入100ml蒸餾水，加入400ml鹽酸溶液（1:4）使其充分溶解，然后放在電爐上低溫煮沸2min，去除氣體CO2，待其冷卻后用10%NaOH中和到pH為6-8，然后加蒸餾水稀釋至500ml。則此溶液中含鈣量為1mg/ml。（2） EDTA溶液

7、的配置稱取約10g的EDTA，溶于熱水中，待其冷卻后用蒸餾水稀釋至1000ml，加入少量10%NaOH溶液將pH調至8，使其完全溶解，得到EDTA標準溶液。（3） 混合消化液的配置混合消化液為硝酸和高氯酸的混合，其混合比為4:1 。3、測定（1） 骨粉樣品的消化根據單因素實驗中羊骨粉的理論得率為基礎，選取其中理論得率最高的一組進行鈣含量的測定。精確稱取各最優條件下的骨粉0.5-1.5g于50ml燒杯中，加入20-30ml的混合消化液，蓋上表面皿上蓋，放置于通風廚中進行溶解，如果仍未消化徹底，則再加入混合消化液，直至溶液變成無色透亮時止。然后加入大概5ml蒸餾水，并加熱以去除多余的硝酸，待燒杯內

8、的溶液揮發至2ml-3ml時，取下冷卻。而后取同體積的混合消化液，按上述相同操作步驟進行空白對照實驗。（2）標定吸取鈣標準溶液20ml，加蒸餾水稀釋至50ml，用2mol/LNaOH溶液調節pH 至10左右，再加入2mol/L NaOH 溶液 10ml，加入鈣指示劑，并立即用EDTA溶液進行滴定。則每毫升EDTA相當于鈣的毫克數可用如下公式計算得出：式中： X -每毫升的EDTA溶液相當于的鈣毫克數； V-滴定時消耗EDTA溶液的體積（ml）。在實驗中用EDTA滴定鈣標準溶液，消耗的EDTA溶液體積為14.35ml，則每毫升EDTA相當于Ca的毫克數為1.39。（3）測定準確吸取消化樣液5ml

9、,加入20ml蒸餾水，用2mol/L NaOH 溶液調節pH 至10左右，再用蒸餾水稀釋至50ml，然后加入鈣指示劑，立即用EDTA溶液滴定。進行3次平行滴定實驗取平均值。根據以下公式計算得出消化樣夜中的鈣含量毫克數。式中： Y-消化樣夜中鈣含量的毫克數； V1-消化樣夜消耗的EDTA溶液的體積（ml）； V0-空白樣夜消耗EDTA溶液的體積（ml）。實驗結果：表1 各類骨粉鈣含量一覽表 編號骨頭種類工藝部位顆粒度鈣含量%A新鮮牛骨蒸煮肋骨200目18.94B新鮮牛骨蒸煮椎骨200目20.28C新鮮牛骨蒸煮腿骨200目25.29D新鮮牛骨蒸煮肋骨100目16.55E新鮮牛骨冷凍肋骨200目24

10、.80 F新鮮牛骨冷凍肋骨100目23.71G新鮮豬骨蒸煮腿骨200目21.24 H新鮮豬骨蒸煮腿骨100目20.40 I新鮮羊骨冷凍、加酶腿骨200目27.66J新鮮羊骨冷凍、加酶腿骨100目26.00 K新鮮羊骨冷凍未加酶腿骨200目24.23L牦牛骨粉固體飲料/200目0.64 M牦牛骨粉固體飲料/100目0.60 由上表1可以看出，各工藝各部位的牛骨粉、豬骨粉和羊骨粉的含鈣量均較高，高達20%-30%。將市場上所購得的牦牛骨粉固體飲料過篩，得100目骨粉（M）與200目骨粉（L）分別測得其含鈣量為：0.60%、0.64%。根據該產品的配料表，我們知道此骨粉固體飲料中添加了米粉、麥芽糊精

11、、菊粉、蓮子、山藥等成分，其中牦牛骨粉的加入量為：2.5g/100g。該產品的營養成分表顯示，鈣的含量為600mg/100g。經測定其含量比給出的參考值略高，主要原因是在對產品過篩時，糖、米粉等一些顆粒度較大的成分被去除，而這些成分中幾乎不含鈣，但是在計算時是以篩下物作為骨粉總量，所以其測定值相對較高。通過推算，得此產品中牦牛骨粉的鈣含量分別為：24%（M）、25.6%（L）。五、 磷含量測定 磷含量的測定-分光光度法1、磷標準曲線的制作 吸取磷標準使用液0ml；0.5ml；1.0ml；2.0ml；3.0ml；4.0ml；5.0ml(相當于含磷量0g；5g；10g；20g；30g；40g；50

12、g)，分別置于7支20ml的試管中，再加入2ml鉬酸溶液均勻混合，靜置幾秒鐘后，加入1ml亞硫酸鈉溶液和1ml對苯二酚溶液均勻混合。然后再加水至20ml，混勻。靜置30min后在分光光度計660nm波長處測定其吸光度值，以測出的吸光度值繪制磷標準曲線。2、樣品消化 稱取各單因素條件下的羊骨粉0.1-0.5g置于100ml的燒瓶中，加入3ml硫酸和3ml混合消化液，置于消化爐上，待瓶中溶液由黑色變為無色或微帶黃色的清澈液體時，則骨粉徹底消化。將溶液放冷，加入20ml蒸餾水，冷卻后轉入容量瓶中并進行定容，此溶液即為樣品測定液。取與消化樣品同體積的硫酸、混合消化液，按上述相同方法做空白溶液對比。3

13、、樣品測定準確吸取樣品測定液2ml及同體積的空白對照溶液，分別置于20ml試管中，同制作標準曲線相同步驟進行操作，則未知溶液中的磷含量可由測出的吸光度在標準曲線上查得。并平行3次平行實驗測定。按下式計算得出骨粉中磷含量。 式中： X-樣品中磷含量，mg/100g； m1-由標準曲線查得或回歸方程算得樣品測定液中磷含量（mg）； m -樣品質量（g）； V1-樣品消化液定容總體積（ml）； V2 -測定用樣品消化液的體積（ml）。實驗結果：表2 各類骨粉的磷含量一覽表編號骨頭種類工藝部位顆粒度磷含量%A新鮮牛骨蒸煮肋骨200目4.75B新鮮牛骨蒸煮椎骨200目4.45C新鮮牛骨蒸煮腿骨200目3

14、.10D新鮮牛骨蒸煮肋骨100目5.87E新鮮牛骨冷凍肋骨200目5.56F新鮮牛骨冷凍肋骨100目4.57G新鮮豬骨蒸煮腿骨200目3.45H新鮮豬骨蒸煮腿骨100目4.26I新鮮羊骨冷凍、加酶腿骨200目5.58J新鮮羊骨冷凍、加酶腿骨100目6.23K新鮮羊骨冷凍未加酶腿骨200目4.51L牦牛骨粉固體飲料/200目0.115M牦牛骨粉固體飲料/100目0.108從上表2可看出，通過蒸煮工藝和冷凍工藝制得的骨粉的磷含量在3%7%之間。通過測定，100目及200目牦牛骨粉中的磷含量分別為：0.108%、0.115%。通過推算，該產品的牦牛骨粉中是含磷量分別為：4.32%、4.6%。與實驗室

15、制得的骨粉含磷量相近。六、 生物利用率測定 1、利用胃蛋白酶溶液模擬胃部消化環境，將骨粉在37搖床上，以80r/min的頻率震蕩2h； 2、利用裝有胰液素膽汁鹽混合物溶液的透析袋模擬腸部消化環境，在37，80r/min振搖3h。消化結束后，用EDTA滴定法對透析袋中溶液的鈣含量進行測定。 表3各類骨粉的生物利用率一覽表編號骨頭種類工藝部位顆粒度鈣的吸收利用率%A新鮮牛骨蒸煮肋骨200目23.37B新鮮牛骨蒸煮椎骨200目24.80C新鮮牛骨蒸煮腿骨200目21.85D新鮮牛骨蒸煮肋骨100目21.42E新鮮牛骨冷凍肋骨200目27.75F新鮮牛骨冷凍肋骨100目22.89G新鮮豬骨蒸煮腿骨20

16、0目23.08H新鮮豬骨蒸煮腿骨100目21.46I新鮮豬骨冷凍、加酶腿骨200目37.66J新鮮豬骨冷凍、加酶腿骨100目30.28K新鮮豬骨冷凍未加酶腿骨200目25.36L牦牛骨粉固體飲料/200目29.84M牦牛骨粉固體飲料/100目26.38從上表3可以看出，骨粉中鈣的吸收利用率在15-40%之間，據研究，成人對膳食鈣的吸收利用率一般僅約20，用體外模擬吸收的方法測出的骨粉的鈣吸收利用率大多高于人體對膳食鈣的吸收率，可推斷骨粉中的鈣是能夠被人體吸收利用的，且其吸收利用率較高。經測定，200目的牦牛骨粉固體顆粒的鈣吸收率為33.84%，100目的為26.38%，吸收率也相對較高。 由表

17、3可知，冷凍法制得的骨粉的生物利用率高于蒸煮法制得的骨粉。主要的原因可能是，鈣離子在透析袋內外的運輸方式是被動運輸。由前述分析可得，冷凍法制得的骨粉中鈣含量較高，即滲透壓較大，能促進鈣離子的被動運輸，故其鈣生物利用率較高。在冷凍工藝下，酶解能增加骨粉的鈣吸收利用率。主要原因是經酶解后的骨粉鈣含量較高，相同質量的骨粉溶于同體積的水中，酶解的骨粉溶液中鈣離子含量相對較高，故其滲透壓較高，能促進鈣離子的被動運輸。200目骨粉的鈣生物利用率高于100目骨粉。其原因是，顆粒度愈小，胃消化階段作用愈完全。鈣在透析袋和模擬環境之間運輸的唯一方式是被動擴散，顆粒度愈小，被動運輸效果愈好，進入透析袋的鈣相應較多

18、，生物利用率較高。骨粉中可利用的鈣質含量豐富，且經過高溫高壓蒸煮和低溫冷凍處理后，超微粉碎得到的骨粉，無異味，色澤呈白色或略帶灰白色，可制成骨粉糊保健品，或者作為鈣營養強化劑添加到食品中。一方面可減緩因缺鈣而導致的各類疾病的發病率，為人類謀福利；另一方面可充分利用鮮骨資源，減少浪費，還能解決因大量畜禽骨遺棄而導致的環境污染問題。豐富的畜骨資源是我國的一筆財富，應加強對其研究開發，最大限度地實現其價值。在骨粉加工中，更多更好的處理工藝可以被研究出來，以使其有用成分能得到最大限度的保留。通過本次項目學習，一方面鍛煉了實際動手操作能力，掌握了骨粉中的主要營養成分，為以后的項目實習打下基礎，另一方面，通過項目學習也發現了自己的很多缺點。實驗邏輯性不夠強，不能很好的做到數據的橫縱對比，實驗設計不夠全面，在結果分析得出的結論沒有及時反饋到實驗方案設計里，實踐和理論之間銜接不好。 學生簽名：陳靜怡 2015 年 8 月 20 日導師評價： 在項目學習工作中，陳靜怡表現出較強的文獻檢索、閱讀能力；積極參與安徽合大環境檢