1、高級動物生化試題 問答題： 1. 簡述非編碼RNA（non-coding RNA）的種類、結構特點及其主要功能。 非編碼RNA的種類結構和功能 1 tRNA 轉運RNA（transfer RNA，tRNA） 結構特征之一是含有較多的修飾成分，核酸中大部分修飾成分是在tRNA中發現的。修飾成分在tRNA分子中的分布是有規律的，但其功能不清楚。5'末端具有G（大部分）或C。3'末端都以ACC的順序終結。 有一個富有鳥嘌呤的環。有一個反密碼子環，在這一環的頂端有三個暴露的堿基，稱為反密碼子（anticodon）.反密碼子可以與mRNA鏈上互補的密碼子配對。有一個胸腺嘧啶環。tRNA具

2、有三葉草型二級結構以及“L”型三級結構，tRNA的不同種類及數量可對蛋白質合成效率進行調節。 tRNA負責特異性讀取mRNA中包含的遺傳信息，并將信息轉化成相應氨基酸后連接到多肽鏈中。tRNA為每個密碼子翻譯成氨基酸提供了結合體，同時還準確地將所需氨基酸運送到核糖體上。鑒于tRNA在蛋白質合成中的關鍵作用，又把tRNA稱作第二遺傳密碼。tRNA還具有其他一些特異功能，例如，在沒有核糖體或其他核酸分子參與下，攜帶氨基酸轉移至專一的受體分子，以合成細胞膜或細胞壁組分；作為反轉錄酶引物參與DNA合成；作為某些酶的抑制劑等。有的氨酰-tRNA還能調節氨基酸的生物合成。 2 rRNA核糖體RNA（rib

3、osomal RNA, rRNA） 核糖體RNA是細胞中最為豐富的RNA，在活躍分裂的細菌細胞中占80%以上。他們是核糖體的組分，并直接參與核糖體中蛋白質的合成。核糖體是rRNA提供了一個核糖體內部的“腳手架”，蛋白質可附著在上面。這種解釋很直接很形象，但是低估了rRNA在蛋白質合成中的主動作用。較后續的研究表明，rRNA并非僅僅起到物理支架作用，多種多樣的rRNA可起到識別、選擇tRNA以及催化肽鍵形成等多種主動作用。例如：核糖體的功能就是,按照mRNA的指令將氨基酸合成多肽鏈。而這主要依靠核糖體識別tRNA 并催化肽鍵形成而實現。可以說核糖體是一個大的核酶( ribozyme)。而核糖體的

4、催化功能主要是由rRNA來完成的,蛋白質并沒有直接參與。 3 tmRNA tmRNA主要包括12個螺旋結構和4個“假結”結構，同時還包括一個可譯框架序列的單鏈RNA結構。tmRNA中H1由5'端和3'端兩個末端形成，與tRNA的氨基酸受體臂相似。H1和H2的5'部分之間有一個由10-13nt形成的環，類似tRNA中的二氫尿嘧啶環，稱為“D”環。H3和H4，H6和H7，H8和H9，H10和H11之間分別形成Pk1，pK2，pK3，pK4。H4和H5之間則由一段包含編碼標記肽ORF的單鏈RNA連接。H12由5個堿基對和7nt形成的環組成，類似tRNA中的TC臂和TC環，稱為

5、“T”環。 tmRNA結構按照功能進行劃分可分為tRNA類似域（TLD）和mRNA類似域（MLD），TLD主要包括H1,H2,H12,“D”環和“T”環，MDL則包括ORF和H5，這兩部分分別具有類似tRNA和mRNA的功能。tmRNA是一類普遍存在于各種細菌及細胞器（如葉綠體，線粒體）中的穩定小分子RNA。它具有mRNA分子和tRNA分子的雙重功能，它在一種特殊的翻譯模式反式翻譯模式中發揮重要作用。同時，它與基因的表達調控以及細胞周期的調控等生命過程密切相關，是細菌體內蛋白質合成中起“質量控制”的重要分子之一。識別翻譯或讀碼有誤的核糖體，也識別那些延遲停轉的核糖體，介導這些有問題的核糖體的崩

6、解。 4 核仁小RNA(snoRNA) 絕大多數snoRNA可歸為兩類boxC/D snoRNA和box H/ACA snoRNA，均具有保守的特征二級結構，boxC/D snoRNA類能形成“發夾-鉸鏈-發夾-尾部”狀二級結構。boxC/D snoRNA其分子兩端的box C,boxD以及末端配對序列能形成保守的“莖-內環-莖”狀二級結構，稱為“K-turn”結構。大多數boxC/D snoRNA和box H/ACA snoRNA分別具有指導rRNA，snRNA或tRNA前體中特定核苷2'-O-核糖甲基化修飾與假尿嘧啶化修飾的功能；少部分snoRNA參與rRNA前體的加工剪切，與rR

7、NA的正確折疊和組裝相關。 5 微RNA（microRNAs；miRNA，小分子RNA） 它是一類長度為2125 nt 的單鏈RNA分子片段，有一個很有趣的共同特點，就是它的序列存在于莖環結構中的莖上。這種莖環結構通常是由70 多個核苷酸組成的不完全的發夾結構，上面有一些凸起和環狀結構。莖部形成雙鏈RNA ，但不是嚴格互補，可存在錯配和GU擺動配對。據其作用模式的不同可以分為三類：第一類如lin4，與mRNA不完全互補，當miRNA與靶mRNA不完全配對結合時，主要影響其翻譯過程而對mRNA的穩定性無影響。第二類如miR39 和 miR171，與其靶mRNA完全互補，當其與mRNA完全配對結合

8、后，分裂切割靶mRNA。第三類作用模式如let7，當其與靶RNA完全互補配對時，直接靶向切割mRNA，而不完全互補配對時起調節基因表達的作用。 6 小干擾RNA（Small interfering RNA；siRNA） siRNA是長度20到25個核苷酸的雙股RNA，在生物學上有許多不同的用途。目前已知siRNA主要參與RNA干擾（RNAi）現象，以帶有專一性的方式調節基因的表達。此外，也參與一些與RNAi相關的反應途徑，例如抗病毒機制或是染色質結構的改變。其生理意義在于，生物的抗御機制，調控細胞分化與胚胎發育，維持基因組的穩定以及RNA 水平上的調控機制。 7 snRNA（小核RNA）： 它

9、是真核生物轉錄后加工過程中RNA剪接體（spilceosome）的主要成分，參與mRNA前體的加工過程。另外，還有端體酶RNA(telomerase RNA)，它與染色體末端的復制有關；以及反義RNA(antisense RNA)，它參與基因表達的調控。還參與RNA剪接和RNA修飾。 8 eRNA eRNA從內含子或DNA非編碼區轉錄的RNA分子，精細調控基因的轉錄和翻譯效率。 9 SNP RNA 信號識別顆粒RNA，細胞質中與含信號肽mRNA識別，決定分泌的RNA功能分子，它是一種核糖核酸蛋白復合體。能夠識別并結合剛從游離核糖體上合成出來的信號肽，暫時中止新生肽的合成，又能與其在內質網上的受

10、體(即停靠蛋白質)結合而將新生肽轉移入內質網腔，防止蛋白水解酶對其損害 另外，還有端體酶RNA(telomerase RNA)，它與染色體末端的復制有關；以及反義RNA(antisense RNA)，它參與基因表達的調控。還參與RNA剪接和RNA修飾。 10 gRNA又稱引導RNA 真核生物中參與RNA編輯的具有與mRNA互補序列的RNA ,具有3'寡聚U的尾巴,中間有一段與被編輯mRNA精確互補的序列,5'端是一個錨定序列,它同非編輯的mRNA序列互補。在編輯時,形成一個編輯體(editosome),以gRNAs內部的序列作為模板進行轉錄物的校正, 同時產生編輯的mRNA。g

11、RNA3'端的oligo(U)尾可作為被添加的U的供體。 11 piRNA piRNA主要存在于哺乳動物的生殖細胞和干細胞中，通過與Piwi亞家族蛋白結合形成piRNA復合物（piRC）來調控基因沉默途徑。對Piwi亞家族蛋白的遺傳分析以及piRNA積累的時間特性研究發現，piRC在配子發生過程中起著十分重要的作用。還能維持生殖系和干細胞功能和調節翻譯和mRNA的穩定性。 12 atRNA（反義RNA） 是指與mRNA互補的RNA分子, 由于核糖體不能翻譯雙鏈的RNA，所以反義RNA與mRNA特異性的互補結合, 即抑制了該mRNA的翻譯。通過反義RNA控制mRNA的翻譯是原核生物基因表

12、達調控的一種方式，反義RNA也參與了和P22噬菌體的溶菌/溶源狀態的控制。 2. 請以發育生物學（developmental biology）、表觀遺傳學(epigenetics)、體細胞重編程技術(somatic cell reprogramming)、體細胞克隆(somatic cell cloning)、細胞凋亡(apoptosis)或誘導干細胞(iPS)、干細胞(stem cell)為關鍵詞，閱讀至少一篇2010年以后的外文文獻，闡述相關方面研究進展，或有關技術在動物生殖細胞（卵母細胞、精子）發生、卵泡發育、早期胚胎發育過程中的應用研究（不少于2000字，并附上所閱讀文獻全文）。注意不

13、能抄襲有關中文文獻。 動物生化實驗技術試題 1、 試述分子雜交技術（核酸和蛋白質）的種類、適用范圍及特點。 核酸分子雜交技術是利用DNA變性與復性的原理，在某種理化因素作用下DNA雙鏈分子解鏈變性后，在DNA復性重新形成雙螺旋結構時，把不同的DNA單鏈分子或者DNA與RNA的混合物放在同一溶液中，只要在DNA或RNA單鏈分子之間存在一定的堿基互補配對關系，就可以在DNA之間或DNA與RNA之間形成雜化的雙鏈。蛋白質分子雜交是一種借助特異性抗體鑒定抗原的有效方法。 面重點介紹三種常用的分子雜交技術。 （1） Southern雜交-DNA和DNA分子之間的雜交 southern雜交主要用來研究DN

14、A分子中某一基因位置、某一專一序列在待檢樣品中存在與否及兩種核酸分子之間的相似性。1、用于對基因組中特定基因的定位及檢測。2、用于從基因文庫中找到所需要的基因。 （2） Northern雜交DNA和RNA分子之間的雜交。 目前主要用于檢測某一組織或細胞中已知的特異性mRNA的表達水平或比較不同組織或細胞中同一基因的表達情況，如在基囚工程中是檢測目的基因是否轉錄出mRNA的方法。如果RNA分子在大小和含量上與正常情況不同，可以考慮是否有調控區的突變或剪接部分的突變。 （3） western雜交蛋白質分子(抗原一抗體)之間的雜交。 可用于檢測樣品中特異蛋白質是否存在、細胞中特異蛋白質的半定量分析以

15、及蛋白質分子的相互作用研究等。如檢測目的基因在受細胞中有沒有翻譯出相應的蛋白質，檢測病人血液中是否有某種抗體從而檢測是否感染過某種抗原，單克隆抗體技術中用于篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞等。 2. 簡述核酸和蛋白質濃度分析方法。 （1）紫外分光光度法 紫外分光光度法基于DNA鏈上堿基的苯環結構在紫光區具有較強吸收，DNA/RNA在260nm處有最大的吸收峰，蛋白質在280nm處有最大的吸收峰，鹽和小分子則集中在230nm處。因此，可以用260nm波長進行分光測定核酸濃度，OD值為1相當于大約50g/ml雙鏈DNA，單鏈DNA濃度約為33g / ml，RNA約為40g/ml，寡核苷酸約為35g

16、/ml。如用1cm光徑，用 H2O稀釋DNA/RNA樣品n倍并以H2O為空白對照，根據此時讀出的OD260值即可計算出樣品稀釋前的濃度： DNA（mg/ml）=50×OD260讀數×稀釋倍數/1000 RNA（mg/ml）=40×OD260讀數×稀釋倍數/1000。 A280nm是蛋白和酚類物質最高吸收峰的吸收波長，比值可進行核酸樣品純度評估：純DNA的A260/A280比值為1.8，純RNA為2.0。假如比值低，表示受到蛋白（芳香族）或分類物質的污染，需要純化樣品。比值=1.5相當于50%蛋白質/DNA溶液。 A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波

17、長，比值可進行核酸樣品純度評估：純DNA和RNA的A260/A230比值為2.5。若比值小于2.0標明樣品被碳水化合物（糖類）、鹽類或有機溶劑污染，需要純化樣品。 A320nm或A340nm為檢測溶液樣品的濁度，該值應該接近0.0。假如不足，標明溶液中有懸浮物，需要純化樣品。 （2）定糖定磷法 定糖定磷法是通過測定核酸中戊糖和無機磷含量實現對核酸含量的測定。該法無需特殊儀器，只需要將地衣酚、二苯胺及鉬酸銨等與核酸樣品反應，再通過分光光度計測定光吸收值即可定量核酸。但此法準確度差、靈敏度低、干擾物多、操作繁瑣，在現今的研究中已較少采用。比如二苯胺法是利用脫氧核糖核酸中的脫氧核糖在酸性環境中變成羥

18、基酮基戊醛與二苯胺試劑一起加熱產生藍色化合物，在595nm處有最大的吸收，在每毫升含DNA20-400微克范圍內，光密度與DNA的濃度成正比，在反應液中加入少量乙醛，可以提高反應的靈敏度。除DNA外，脫氧木糖、阿拉伯糖也有同樣的反應。 少采用。比如二苯胺法是利用脫氧核糖核酸中的脫氧核糖在酸性環境中變成羥基酮基戊醛與二苯胺試劑一起加熱產生藍色化合物，在595nm處有最大的吸收，在每毫升含DNA20-400微克范圍內，光密度與DNA的濃度成正比，在反應液中加入少量乙醛，可以提高反應的靈敏度。除DNA外，脫氧木糖、阿拉伯糖也有同樣的反應。 1、DNA標準曲線的制作 取8支試管，編號，以一定的梯度依次

19、加入不同濃度的DNA溶液和二苯胺試劑試劑。加畢，搖勻，于60恒溫水浴中保溫1小時，（或于沸水中煮沸15分鐘，冷卻測0.D595nm值）。以光密度為縱坐標，DNA含量（ug/ml）為橫坐標，繪制標準曲線。 2、樣品的測定 取2支試管，各加0.2-0.5毫升的待測液（內含DNA應在標準曲線可測范圍之內）加蒸餾水稀釋至2毫升，再加4毫升二苯胺試劑，搖勻，其操作步驟與標準曲線的制作相同。根據測得的光密度值，從標準曲線上查出相當該光密度DNA的含量，按下式計算出樣品中DNA的百分含量。 DNA含量/毫升待測液=標準曲線查得值×稀釋倍數 注意事項。 1、二茉胺法測定DNA含量靈敏度不高，待測樣品

20、中DNA含量低于50mg/L即難以測定。乙醛可增加二苯胺法測定DNA的發色量，又可減少脫氧木糖和阿拉伯糖的干擾，能顯著提高測定的靈敏度。 2、樣品中含有少量RNA并不影響測定，但因蛋白質、多種糖類及其衍生物、芳香醛、羥基醛等能與二苯胺反應形成有色化合物，故能干擾DNA定理。（3）酶催化法 基于酶催化的核酸定值方法是一種相對核酸定量法。其原理是染料能同時與酶和核酸結合，通過檢測酶的催化活性即可實現對核酸的定量。此法的優點在于不需要通過核酸擴增，操作方便，使用的儀器簡單。但該法實驗中，酶的催化活性受多方面影響，難以達到最佳狀態，會使定量結果出現偏差。 （3）熒光染料法 熒光染料法是通過檢測熒光試劑

21、與DNA結合后的熒光強度變化而實現對核酸的定量。某些熒光探針試劑本身熒光強度不大，但與DNA 結合后熒光強度大大增強，如：溴化乙錠在水溶液中的熒光量子產率很低，但它與DNA結合后，產生很強的熒光，激發波長顯著紅移；又如Hoechst33258是一種雙苯并咪唑熒光染料，可高度特異地與雙鏈DNA非嵌入性結合，結合后其熒光率由0.01增至0.6。 熒光染料法適用于樣品中DNA或RNA 含量較低或含有較多雜質的樣品，絕對靈敏度很高.如利用Hoechst33258可測定納克級水平的DNA。PicoGreen及SYBR Green的檢測靈敏度較EB和Hoechst33258更高，PicoGreen可檢測低

22、至0.25-0.5ng的DNA樣品。 前已有許多商品化核酸定量熒光染料，如Invitrogen公司用于測定雙鏈DNA的PicoGreen、用于測定單鏈DNA的OliGreen及用于測定RNA含量的RiboGreen等。含這些染料的核酸定量試劑盒被認為是目前對微量核酸定量較準確的方法。 與紫外分光光度法相比，熒光染料法的應用尚不廣泛它存在以下缺陷：（1）某些熒光染料（如EB等）具有極強的毒性和致誘變性；（2）熒光分析對環境因素極為敏感，易受溫度、光度、酸度、溶解氧及污染物等干擾；（3）該法需制作標準曲線，操作較復雜；（4）需專業的定量試劑盒，價格昂貴；（5）精確定量需依賴已知濃度的標準物質，而目

23、前缺乏經過精確定值的標準物質，且少數現今采用標準物質（DNA）的定量方法為紫外分光光度法，這就產生潛在的偏差并使測量結果無法溯源到國際單位制。 在水溶液中的熒光量子產率很低，但它與DNA結合后，產生很強的熒光，激發波長顯著紅移；又如Hoechst33258是一種雙苯并咪唑熒光染料，可高度特異地與雙鏈DNA非嵌入性結合，結合后其熒光率由0.01增至0.6。 熒光染料法適用于樣品中DNA或RNA 含量較低或含有較多雜質的樣品，絕對靈敏度很高.如利用Hoechst33258可測定納克級水平的DNA。PicoGreen及SYBR Green的檢測靈敏度較EB和Hoechst33258更高，PicoGr

24、een可檢測低至0.25-0.5ng的DNA樣品。 目前已有許多商品化核酸定量熒光染料，如Invitrogen公司用于測定雙鏈DNA的PicoGreen、用于測定單鏈DNA的OliGreen及用于測定RNA含量的RiboGreen等。含這些染料的核酸定量試劑盒被認為是目前對微量核酸定量較準確的方法。 與紫外分光光度法相比，熒光染料法的應用尚不廣泛它存在以下缺陷：（1）某些熒光染料（如EB等）具有極強的毒性和致誘變性；（2）熒光分析對環境因素極為敏感，易受溫度、光度、酸度、溶解氧及污染物等干擾；（3）該法需制作標準曲線，操作較復雜；（4）需專業的定量試劑盒，價格昂貴；（5）精確定量需依賴已知濃度

25、的標準物質，而目前缺乏經過精確定值的標準物質，且少數現今采用標準物質（DNA）的定量方法為紫外分光光度法，這就產生潛在的偏差并使測量結果無法溯源到國際單位制。 （4）雜交定量法 雜交定量法主要包括：Southern雜交、Northern雜交、基因芯片、支鏈信號放大技術及Rnase保護技術。 Southern雜交特異性強，但操作復雜，靈敏度低。與Southern雜交類似的是用于檢測RNA的Northern雜交技術，可用于基因表達量的比較研究。生物芯片是一種高通量的雜交定量技術。該技術以核酸雜交為基礎，將短的寡核苷酸或cDNA序列高密度地固定在固相支持物的表面，然后加入已標記的目的序列進行雜交，之

26、后檢測熒光信號。由于熒光信號的強度與目標分子的數目成比例，從而實現核酸定量檢測。 支鏈信號放大技術采用了一種人工合成的、結構如同樹枝的DNA信號放大探針分支鏈DNA，其優點是：（1）只需將釋放的核酸變性，樣品處理簡單；（2）不經過指數增長的擴增過程，避免了擴增產物污染及PCR抑制因素的影響；（3）可高通量檢測病原體。但該方法成本較高，且當放大倍數低時，敏感性較差，檢測范圍窄，不適用于RNA的低濃度檢測。RNase保護技術由Zinn于1983年首次提出，此法的靈敏度高于Northern雜交，但成本比較高、放射性同位素有致癌作用，且所轉錄成的RNA易降解，增加了實驗誤差。 蛋白質濃度分析方法 一、

27、蛋白濃度的直接測定（UV法） 這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。選擇Warburg 公式，光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應的換算方法，將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單，先測試空白液，然后直接測試蛋白 質。從而顯得結果很不穩定。蛋白質直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單；但是容易受 到平行物質的干擾，如DNA的干擾；另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。 二紫外吸收法測定蛋白質含量：大多數蛋白質分子結構中含有芳香族氨基酸（酪氨酸和色氨酸）殘基，使蛋白質在280nm的紫外光區產生最大吸收，并且這一波長范

28、圍內的吸收值與蛋白質濃度的成正比，利用這一特性可定量測定蛋白質的含量。 紫外吸收法可測定0.1-0.5mg/ml的蛋白質溶液，此操作簡便，測定迅速，不消耗樣品，低濃度鹽類不干擾測定。因此，此法在蛋白質的制備中廣泛應用。 三雙縮脲法（Biuret法） 雙縮脲（NH3CONHCONH3）是兩 個分子脲經180左右加熱，放出一個分子氨后得到的產物。在強堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡合物，稱為雙縮脲反應。凡具有兩個酰胺基或兩個直接連接的肽鍵，或能過一個中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應。紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含

29、量。測定范圍為110mg蛋白質。干擾這一測定的物質主要有：硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸等。 四BCA方法測定蛋白質含量 BCA檢測法是Lowry測定法的一種改進方法。與Lowry方法相比，BCA法的操作更簡單，試劑更加穩定，幾乎沒有干擾物質的影響，靈敏度更高（微量檢測可達到0.5g/ml），應用更加靈活。 蛋白質分子中的肽鍵在堿性條件下能與Cu2+ 絡合生成絡合物，同時將Cu2+ 還原成Cu+ 。二喹啉甲酸及其鈉鹽是一種溶于水的化合物，在堿性條件下，可以和Cu+ 結合生成深紫色的化合物，這種穩定的化合物在562nm處具有強吸收值，并且化合物顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。故可用比色的方法

30、確定蛋白質的含量。 五凱氏定氮法：凱氏定氮法用于測定有機物的含氮量,若蛋白質的含氮量已知時，則可用此法測定樣品中蛋白質的含量。 當蛋白質與濃硫酸共熱時，其中的碳、氫兩元素被氧化成二氧化碳和水，而氮則轉變成氨，并進一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過程通常稱為“消化”。但是，這個反應進行得比較緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應液的沸點，并加入硫酸銅作為催化劑，以促進反應的進行。消化完成后，在凱氏定氮儀中加入濃堿，可使消化液中的硫酸銨分解，游離出氨，借助水蒸汽蒸餾法，將產生的氨蒸餾到一定量、一定濃度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨與溶液中氫離子結合，使溶液中的氫離子濃度降低，指示劑顏色改變，然后用

31、標準無機鹽酸滴定，直至恢復溶液中原來的氫離子濃度為止。根據所用標準鹽酸的量可計算出待測物中的總氮量。 蛋白質的含氮量為16%，即1克蛋白質中的氮相當于6.25克蛋白質，用凱氏定氮法測出的含氮量乘以6.25,即得樣品中蛋白質的含量。 3. 預對某個基因的表達（RNA和蛋白質水平）進行定性和定量分析，試述可采用的技術路線和主要實驗方法。 答：通過mRNA表達水平的檢測： Northern blot、real time PCR、原位雜交等。 通過蛋白表達水平的檢測：（1）定量檢測分析：western bloting（2）蛋白質功能分析：免疫熒光技術、酵母雙雜交、ChIP、熒光共振能量轉移等。 可采用

32、的技術路線和主要實驗方法有： （1）mRNA表達水平的檢測 Northern Blot: 是一種基于RNA-DNA雜交原理建立的一種RNA分析技術。將RNA變性及電泳分離后，轉移到固相支持物上，用雜交反應來鑒定其中特定mRNA分子的含量及其大小。 基本步驟：完整mRNA的分離根據RNA的大小通過瓊脂糖凝膠電泳對RNA進行分離將RNA轉移到固相支持物（尼龍膜）上，在轉移的過程中，要保持RNA在凝膠中的相對分布將RNA固定在支持物上（UV交聯）固相RNA與探針分子（DNA或RNA）雜交除去非特異性結合到固相支持物上的探針分子對特異性結合的探針分子的圖像進行檢測、捕獲和分析。 real time PCR 又稱實時定量熒光PCR，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行