1、制劑工藝研究技術路原液外觀及性狀澄明度色澤 鑒定分子量大小的純度測定應采用經過論證能指示穩定性分析方法 電荷異構體的純度測定雜質及純度初步穩定性指標的建立及確證生物活性制定內部一級參考物質冷凍干燥，制成凍干制品制劑處方的初步確定及驗證制劑處方的初步篩選原液強制破壞試驗雜質及純度利用凍干顯微鏡，確定處方溶液的共熔點，及共晶點。優化凍干曲線原液擬冷凍貯藏的穩定性考察高溫，高于加速條件10有助于確定可能的降解產物，幫助了解降解途徑和分子內在的穩定性外觀性狀賦形劑相關降解監控注射制劑相關要求效價反映穩定性指標凍干制品溶解后的穩定性試驗包裝容器/閉塞物的選擇表面活性劑的選擇抗氧化劑的選擇氨基酸類選擇多糖

2、類選擇單因素影響實驗光穩定性試驗長期穩定性試驗制劑穩定性研究加速穩定性試驗優化凍干，工藝利用DOE實驗設計軟件，探討多因素相互交互影響，對制劑處方進行優化緩沖體系的選擇（協助QC，幫忙完成）較寬pH值范圍評價光穩定性試驗氧化反應（參考文獻：ICHQ5C,ICHQ1B, 生物制品穩定性研究技術指導原則，中國藥典2020版）反復凍融實驗（凍干制劑省略）震蕩實驗（凍干制劑省略）第一章 原液擬冷凍貯藏的穩定性考察國內方面根據生物制品穩定性研究技術指導原則相關要求：研究樣品通常包括原液、成品、中間產物及產品自帶的稀釋液或是重懸液。凡涉及到不連續操作的生產工藝步驟，其中間產物需要嚴格的貯存操作的均需要進行

3、相應的穩定性研究，以證明該貯存操作不會影響到后續工藝產品的質量。 穩定性研究的樣品批次數量應至少為三批。各個階段穩定性研究樣品的生產工藝與質量應一致（即具有代表性），批量應滿足穩定性研究的需要。研究用制劑產品應為來源自不同原液批次的質量檢驗后的合格批次。穩定性研究樣品應采用與實際貯存過程中相同的包裝容器與密閉系統進行研究；原液或中間產物樣品可以采用與實際應用中相同材質或材料的容器和密封系統開展研究。某些產品可能具有多個規格，如不同裝量、不同單位或是不同重量等，在穩定性研究中可以根據檢測樣品的代表性，合理的設計研究方案，減少對部分樣品的檢測頻度或根據產品特點（如規格）選擇部分代表性檢測項目。原則

4、上，濃度不一致的多種規格的產品，均應按照要求開展穩定性研究。國際方面根據ICHQ5C相關規定：如果生產出來的原料藥，在生產后、配方或者制成成品前貯藏起來，至少應提供3批穩定性數據，這3批應能代表生產規模的生產和貯藏條件。在貯藏期要求大于6個月時，至少需申報6個月的穩定性試驗資料。貯藏期要求小于6個月時，最初申報所需的最短穩定性資料交依不同的原料藥而定。在向管理機構申報全套資料時，如果穩定性資料是由試生產規模的發酵及純化工藝所生產的原料藥研究得來的，而該試生產規模比規模化生產小，則申報者應承諾在獲得批準后，對最初三批規模化生產的原料藥進行長期穩定性試驗。進行穩定性試驗的原料藥的質量應能代表用于臨

5、床前研究、臨床研究以規模化生產制品的質量。此外，中試生產的原料藥生產工藝和貯存條件亦應與規模化生產相同。進行穩定性試驗的原料藥應貯藏在能充分代表其規?；a所使用的真實容器中，也可將用于穩定性試驗的原料藥置于較小容器中，但這些容器應與規模化生產所用的容器的材料及封口的方式相同。1 材料及儀器設備1.1 試驗材料：留樣袋（廠家：待定 ； 批號：）；1.2 儀器設備：2 試驗方法2.1 批的選擇 進行正式穩定性研究，至少提供三批規?；a原料藥。2.2 包裝容器將用于穩定性試驗的原料藥置于較小容器50ml PALL 留樣袋。其該容器與規?；a所用的容器的材料及封口的方式相同。2.3 試驗條件2.

6、3.1 擬冷凍貯藏的原料藥研究放置條件申報數據涵蓋的最少時間周期長期試驗-20±512個月2.3.2 偏離標簽上所建議的貯藏條件研究放置條件申報數據涵蓋的最少時間周期偏離貯藏條件試驗5±3適當時間（暫定3個月）2.4 試驗頻率對于長期試驗，第一年每3個月一次，第二年每6個月一次，以后每年一次，直到建議的再試驗期。對于偏離貯藏條件的試驗，前一個月每周進行一次，后續，每月一次，持續兩個月。2.5 取樣量 以上試驗取樣量為全檢用量的10倍2.6穩定性留樣數量除有特殊規定，穩定性試驗取樣量為檢驗次數×2倍全檢用量，每次至少保證有2倍的化驗量。如按照常規試驗頻次，進行36個

7、月的長期穩定性試驗需要14倍的全檢用量，加速穩定性試驗需要8倍的全檢用量。0月數據采用產品初次檢驗或放行檢驗的數據。2.7檢驗周期檢驗周期內的時間規定，以首次檢驗的日期為準，長期試驗 1年內最多延后5天檢測，1年后最多延后10天檢測；加速試驗6個月內最多延后3天，不得提前檢驗。檢測周期結束后，對含量、有關物質等可量化項目，尤其質量有較大變化的產品要做趨勢分析。采用趨勢分析和統計的方法，確定產品的有效期或復驗期。有時穩定性數據顯示降解和變異非常小，這時通常不必進行正式的統計分析，只需提供正當的理由。2.8 穩定性重點考察指標2.8.1 等電點檢測。依法測定（中國藥典三部，通則0541）應符合規定

8、2.8.2 pH值檢測。依法測定（通則0631）2.8.3 純度和雜質2.8.3.1 高效液相色譜法（1）分子排阻色譜法（通則0512），檢測聚集體及降解產物（2）離子交換色譜法（通則0512），檢測電荷異構體等相關產物2.8.3.2毛細管凝膠電泳法（CE-SDS）（1） CE-SDS還原電泳 依法測定（通則3127）（2） CE-SDS非還原電泳 依法測定（通則3127）2.8.4 生物活性檢測 待定2.8.5 細菌內毒素檢查 依法測定（通則 1143）2.8.6 肽圖檢測依法測定（通則3405）3.2 穩定性數據評價參照ICHQ1E評價。4.結果與討論長期穩定性考察試驗記錄（I）產品名稱：

9、 產品代號： 產品批號： 儲存溫濕度： 日期： 檢驗項目標準限度儲 存 期 及 測 試 結 果0個月3個月6個月9個月12個月18個月24個月36個月檢驗結論備 注檢驗人員主管人員原液強制降解試驗氧化反應依據ICHQ5C及生物制品穩定性指導原則相關規定，制定如下氧化試驗方案流程圖：定義：No degradation: 符合QC制定標準范圍 Sufficient degradation: 各項指標不符合QC相關規定 Total degradation:各項指標不符合QC相關規定，主成分80%-100%降解Sufficient degradationSufficient degradation原液

10、需要在更溫和的條件下進行反應Total degradation1%H2O2 24h 37.5Total degradation1%H2O2 30min 37.5Sufficient degradationSufficient degradationSufficient degradationSufficient degradationNo degradationNo degradationNo degradation3%H2O2 24h 37.510%H2O2 24 h 37.530%H2O2 24 h 37.5原液可認為不受氧化影響ACCEPTNo degradation3%H2O2 6 h

11、 37.5原液后續制劑需添加抗氧化劑或者采取相應的抗氧化措施1材料及儀器設備1.1 試驗材料：西林瓶（廠家：肖特新康，批號：）；色譜柱：；雙氧水（廠家： 批號：）；0.22um水系濾膜（廠家：，批號：）；1.2 儀器設備：AcQuity UPLC/Waters；Millipore 純水儀；水浴鍋（廠家）；2 試驗方法參照上述氧化試驗流程圖。取樣數量為全檢用量的10倍。3. 檢測指標3.1純度和雜質高效液相色譜法（1）分子排阻色譜法（通則0512），檢測聚集體及降解產物（2）離子交換色譜法（通則0512），檢測電荷異構體等相關產物4. 結果與討論原液強制降解試驗光穩定性試驗依據ICHQ5C及生物

12、制品穩定性指導原則相關規定，制定如下光穩定性試驗方案流程圖：No DegradationSufficient Degradation/Total Degradation產品需要采用避光的包裝容器不需要采用避光的包裝容器光不穩定光穩定性樣品應暴露總照度不低于1.2×106Lux·hr,，近紫外能量不低于200w ·hr/m2 原液定義：No degradation: 符合QC制定標準范圍 Sufficient degradation: 各項指標不符合QC相關規定 Total degradation:各項指標不符合QC相關規定，主成分80%-100%降解1材料及儀器設

13、備1.1 試驗材料：西林瓶（廠家：肖特新康，批號：）；色譜柱：； 0.22um水系濾膜（廠家：，批號：）；1.2 儀器設備： AcQuity UPLC/Waters；Millipore 純水儀；Memmert CLIMATE CHAMBER ICH/ICHL 恒溫恒濕箱（光照強度為約6000Lux,紫外強度為5W/m2 ）；2 試驗方法參照上述光穩定性試驗流程圖。取樣數量為全檢用量的10倍。強光照射試驗將樣品開口放在Memmert CLIMATE CHAMBER ICH/ICHL 恒溫恒濕箱（光照強度為約6000Lux,紫外強度為5W/m2 ）裝置內，第二天關閉紫外燈，于第8天和第12天取樣，

14、按穩定性重點考察項目進行檢測，特別要注意樣品的外觀變化。對照樣品采用錫箔紙，采用含有避光材料的相同材質西林瓶，或者采用錫箔紙進行避光包裝。3. 檢測指標3.1純度和雜質高效液相色譜法（1）分子排阻色譜法（通則0512），檢測聚集體及降解產物（2）離子交換色譜法（通則0512），檢測電荷異構體等相關產物4. 結果與討論原液強制降解試驗酸堿條件考察依據ICHQ5C及生物制品穩定性指導原則相關規定，制定如下酸堿條件考察抗體穩定性試驗方案流程圖：原液用0.1N HCL/0.1N NaOH調節原液pH 為4.0; 4.5;5.0;5.5;6.0; 6.5;7.0;7.5;8.0供后續制劑緩沖體系選擇做參

15、考加入等摩爾0.1N HCL/0.1N NaOH，進行中和后，再檢測各指標37放置21天/30天1材料及儀器設備1.1 試驗材料：西林瓶（廠家：肖特新康，批號：）；色譜柱：； 0.22um水系濾膜（廠家：，批號：）；氫氧化鈉（廠家：，批號：）； 鹽酸（廠家：，批號：）；1.2 儀器設備： AcQuity UPLC/Waters；Millipore 純水儀；Memmert CLIMATE CHAMBER ICH/ICHL 恒溫恒濕箱；METER FE20 數顯酸度計;2 試驗方法參照上述試驗流程圖。將樣品放置于恒溫恒濕箱，設定溫度為37，于21天/30天取出，加入等摩爾HCL或者NaOH，進行中和后，取樣檢測。按穩