1、1多克隆抗體的制備及抗體活性測(cè)定 2主要內(nèi)容主要內(nèi)容多克隆抗體制備的基本原理多克隆抗體制備的基本原理多克隆抗體制備的操作步驟多克隆抗體制備的操作步驟抗體活性的實(shí)驗(yàn)原理、操作流程和結(jié)果判斷抗體活性的實(shí)驗(yàn)原理、操作流程和結(jié)果判斷3原原 理理1、克隆、克隆(clone)： 是指無(wú)性繁殖細(xì)胞系，由單一個(gè)祖先細(xì)胞是指無(wú)性繁殖細(xì)胞系，由單一個(gè)祖先細(xì)胞分裂繁殖而形成的一簇細(xì)胞系。在這個(gè)家族的所有成員中，分裂繁殖而形成的一簇細(xì)胞系。在這個(gè)家族的所有成員中，如無(wú)發(fā)生突變其基因是完全相同的。如無(wú)發(fā)生突變其基因是完全相同的。2、多克隆抗體（、多克隆抗體（polyclonal antibody, pAb）：用一種包含

2、多）：用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物，可刺激機(jī)體種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物，可刺激機(jī)體多個(gè)多個(gè)B細(xì)胞克細(xì)胞克隆隆產(chǎn)生針對(duì)產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位多種抗原表位的不同抗體。所獲得的免疫血清的不同抗體。所獲得的免疫血清實(shí)際上是含有實(shí)際上是含有多種抗體的混合物，即多克隆抗體多種抗體的混合物，即多克隆抗體。3 3、單克隆抗體（、單克隆抗體（monoclonal antibodies, mAbmonoclonal antibodies, mAb）：由一個(gè)）：由一個(gè)識(shí)別一種抗原表位識(shí)別一種抗原表位的的B B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的同源抗體。高度均細(xì)胞克隆產(chǎn)生的同源抗體。高度均一、特異性強(qiáng)、效價(jià)高、少或無(wú)交叉反應(yīng)性

3、。一、特異性強(qiáng)、效價(jià)高、少或無(wú)交叉反應(yīng)性。4第一代抗體是傳統(tǒng)的抗體制備方法即利用抗原免疫動(dòng)物第一代抗體是傳統(tǒng)的抗體制備方法即利用抗原免疫動(dòng)物后獲得抗體，稱為多克隆抗體（后獲得抗體，稱為多克隆抗體（polyclonal polyclonal antibodyantibody）；）；第二代抗體是通過(guò)雜交瘤技術(shù)制備出針對(duì)抗原中某一抗第二代抗體是通過(guò)雜交瘤技術(shù)制備出針對(duì)抗原中某一抗原決定簇的抗體稱為單克隆抗體原決定簇的抗體稱為單克隆抗體(monoclonal antibody, (monoclonal antibody, McAb)McAb)；第三代抗體是利用基因工程技術(shù)制備而來(lái)，稱為基因工第三代抗體

4、是利用基因工程技術(shù)制備而來(lái)，稱為基因工程抗體程抗體(genetic engineering antibody)(genetic engineering antibody)。抗體發(fā)展歷史抗體發(fā)展歷史5 多克隆抗體制備流程多克隆抗體制備流程免疫原的制備免疫原的制備免疫動(dòng)物免疫動(dòng)物免疫血清的收集免疫血清的收集免疫血清的鑒定免疫血清的鑒定免疫血清的保存免疫血清的保存6 免疫原（免疫原（immunogenimmunogen）： 指能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性抗體或致敏淋巴細(xì)指能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性抗體或致敏淋巴細(xì)胞胞 的抗原最重要的性質(zhì)是的抗原最重要的性質(zhì)是免疫原性（免疫原性（immunogeni

5、cityimmunogenicity）. . 免疫原種類：免疫原種類： 天然抗原、人工合成抗原；天然抗原、人工合成抗原； 蛋白質(zhì)、多糖、脂類、核酸抗原。蛋白質(zhì)、多糖、脂類、核酸抗原。 免疫原的制備免疫原的制備7 細(xì)胞性抗原制備：細(xì)胞性抗原制備： 綿羊紅細(xì)胞（綿羊紅細(xì)胞（SRBCSRBC）- - 溶血素；溶血素； 細(xì)菌細(xì)菌- - 抗菌抗體（動(dòng)物免疫血清）。抗菌抗體（動(dòng)物免疫血清）。 可溶性抗原制備：可溶性抗原制備： 指蛋白質(zhì)、多糖和脂類等。指蛋白質(zhì)、多糖和脂類等。8細(xì)胞破碎細(xì)胞破碎反復(fù)凍融法反復(fù)凍融法超聲破碎法超聲破碎法自溶法自溶法酶處理法酶處理法表面活性劑處理法表面活性劑處理法9 超速離心分離

6、超速離心分離： 是一種根據(jù)分離物質(zhì)的比重特點(diǎn)，通過(guò)差速或梯度是一種根據(jù)分離物質(zhì)的比重特點(diǎn)，通過(guò)差速或梯度密密 度離心，將分子大小不同的抗原顆粒分開的方法，度離心，將分子大小不同的抗原顆粒分開的方法，只只 適宜少數(shù)大分子物質(zhì)的分離。適宜少數(shù)大分子物質(zhì)的分離。 選擇性沉淀：選擇性沉淀： 選擇某抗原理化特性，采用相應(yīng)沉淀劑或溶液環(huán)境，選擇某抗原理化特性，采用相應(yīng)沉淀劑或溶液環(huán)境， 如：如： 核酸去除核酸去除 鹽析沉淀法鹽析沉淀法 有機(jī)溶劑沉淀法有機(jī)溶劑沉淀法 高分子聚合物沉淀法高分子聚合物沉淀法 50% 50%飽和硫酸銨鹽溶液可沉淀析出血清球蛋白；飽和硫酸銨鹽溶液可沉淀析出血清球蛋白； 8% 8%1

7、2%PEG600012%PEG6000可沉淀可沉淀IgGIgG。粗分離粗分離10 超濾法：超濾法： 利用孔徑大小不同的特制薄膜對(duì)不同分子大小的抗利用孔徑大小不同的特制薄膜對(duì)不同分子大小的抗原物質(zhì)進(jìn)行濾篩。原物質(zhì)進(jìn)行濾篩。 電泳電泳11精分離精分離 層析法：層析法： 凝膠過(guò)濾層析凝膠過(guò)濾層析 離子交換層析離子交換層析 親和層析親和層析 疏水層析疏水層析 反相層析反相層析12 鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及免疫學(xué)活性。免疫學(xué)活性。蛋白含量蛋白含量凱氏定氮（紫外光凱氏定氮（紫外光280nm280nm等），等），LowryLowry分子質(zhì)量分子

8、質(zhì)量電泳、質(zhì)譜電泳、質(zhì)譜蛋白純度蛋白純度電泳、電泳、HPLCHPLC免疫原性免疫原性免疫印跡免疫印跡 、免疫雙擴(kuò)散、免疫組化、免疫雙擴(kuò)散、免疫組化蛋白活性蛋白活性 ELISA ELISA、XTTXTT蛋白結(jié)構(gòu)蛋白結(jié)構(gòu)紅外光譜、氨基酸測(cè)序紅外光譜、氨基酸測(cè)序蛋白等電點(diǎn)蛋白等電點(diǎn)IEFIEF蛋白鑒定蛋白鑒定13免疫佐劑免疫佐劑 某些物質(zhì)與抗原一起或先于抗原注入機(jī)體，可某些物質(zhì)與抗原一起或先于抗原注入機(jī)體，可增強(qiáng)機(jī)體對(duì)該抗原的特異性免疫應(yīng)答或改變免疫增強(qiáng)機(jī)體對(duì)該抗原的特異性免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型，此類物質(zhì)稱為應(yīng)答類型，此類物質(zhì)稱為免疫佐劑免疫佐劑(immunoadjuvant)(immunoad

9、juvant)，簡(jiǎn)稱佐劑。，簡(jiǎn)稱佐劑。 14佐劑的種類佐劑的種類佐劑一般包括以下幾類：佐劑一般包括以下幾類： 無(wú)機(jī)佐劑：無(wú)機(jī)佐劑：如氫氧化鋁、明釩等；如氫氧化鋁、明釩等； 生物性佐劑：生物性佐劑：如結(jié)核分枝桿菌、卡介苗、小棒狀桿菌、百日如結(jié)核分枝桿菌、卡介苗、小棒狀桿菌、百日咳桿菌、革蘭陰性桿菌內(nèi)毒素、霍亂毒素的咳桿菌、革蘭陰性桿菌內(nèi)毒素、霍亂毒素的B B亞單位、胞壁酰亞單位、胞壁酰二肽和細(xì)胞因子等；二肽和細(xì)胞因子等； 人工合成佐劑：人工合成佐劑：如雙鏈多聚肌苷酸：胞苷酸（如雙鏈多聚肌苷酸：胞苷酸（poly Ipoly I：C C）、）、雙鏈多聚腺苷酸：尿苷酸（雙鏈多聚腺苷酸：尿苷酸（poly

10、 Apoly A：U U）；油劑：如弗氏完全）；油劑：如弗氏完全佐劑、花生油乳劑等；佐劑、花生油乳劑等； 納米佐劑納米佐劑 15弗氏佐劑（弗氏佐劑（Freunds adjuvant）分為弗氏不完全佐劑和完全佐劑兩種：分為弗氏不完全佐劑和完全佐劑兩種： 前者是由油劑（礦物油或花生油）和乳化劑（羊毛脂前者是由油劑（礦物油或花生油）和乳化劑（羊毛脂或吐溫或吐溫-80）按）按1：11：5比例混合而成；比例混合而成； 后者由弗氏不完全佐劑加卡介苗組成。在免疫動(dòng)物時(shí)，后者由弗氏不完全佐劑加卡介苗組成。在免疫動(dòng)物時(shí)，先將弗氏佐劑與抗原等比混勻，制成先將弗氏佐劑與抗原等比混勻，制成“油包水油包水”乳化乳化液。

11、液。 16 佐劑與抗原混合乳化的方法：佐劑與抗原混合乳化的方法： 研磨法研磨法 攪拌混合法攪拌混合法17 佐劑的免疫生物學(xué)作用佐劑的免疫生物學(xué)作用 增強(qiáng)抗原免疫原性：使無(wú)或微弱免疫原性的物質(zhì)變成增強(qiáng)抗原免疫原性：使無(wú)或微弱免疫原性的物質(zhì)變成持久或強(qiáng)的免疫原；持久或強(qiáng)的免疫原； 增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原刺激的反應(yīng)性，提高初次應(yīng)答和再次增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原刺激的反應(yīng)性，提高初次應(yīng)答和再次應(yīng)答所產(chǎn)生的抗體滴度；應(yīng)答所產(chǎn)生的抗體滴度； 改變抗體類型，使產(chǎn)生抗體由改變抗體類型，使產(chǎn)生抗體由IgM型轉(zhuǎn)變?yōu)樾娃D(zhuǎn)變?yōu)镮gG型；型； 引起或增強(qiáng)遲發(fā)性超敏反應(yīng)。引起或增強(qiáng)遲發(fā)性超敏反應(yīng)。18佐劑的作用機(jī)制佐劑的作用機(jī)制佐劑的作用

12、機(jī)制歸納起來(lái)主要有如下幾種：佐劑的作用機(jī)制歸納起來(lái)主要有如下幾種： 可增強(qiáng)抗原的表面積和改變抗原活性基團(tuán)構(gòu)型，從而增可增強(qiáng)抗原的表面積和改變抗原活性基團(tuán)構(gòu)型，從而增強(qiáng)強(qiáng) 抗原的免疫原性。抗原的免疫原性。 佐劑與抗原混合一起注入機(jī)體，可改變抗原的物理性狀，佐劑與抗原混合一起注入機(jī)體，可改變抗原的物理性狀，形成抗原儲(chǔ)存庫(kù)，延長(zhǎng)抗原在局部組織的滯留時(shí)間，有利于形成抗原儲(chǔ)存庫(kù)，延長(zhǎng)抗原在局部組織的滯留時(shí)間，有利于抗原的緩慢釋放。抗原的緩慢釋放。 增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬作用（被佐劑吸附的抗原易被吞噬增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬作用（被佐劑吸附的抗原易被吞噬細(xì)胞吞噬），促進(jìn)對(duì)抗原的處理，刺激淋巴細(xì)胞增生，從而細(xì)胞吞噬）

13、，促進(jìn)對(duì)抗原的處理，刺激淋巴細(xì)胞增生，從而增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答的效應(yīng)。增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答的效應(yīng)。 19動(dòng)物免疫動(dòng)物免疫免疫動(dòng)物的選擇：免疫動(dòng)物的選擇： 抗原來(lái)源與動(dòng)物種屬的關(guān)系：抗原的來(lái)源與免疫動(dòng)物種抗原來(lái)源與動(dòng)物種屬的關(guān)系：抗原的來(lái)源與免疫動(dòng)物種屬差異越遠(yuǎn)，其免疫源性越強(qiáng)，免疫效果越好，而同種系屬差異越遠(yuǎn)，其免疫源性越強(qiáng)，免疫效果越好，而同種系或親緣關(guān)系越近，免疫效果越差。或親緣關(guān)系越近，免疫效果越差。 動(dòng)物個(gè)體的選擇：適齡、健康、體重符合要求的正常動(dòng)物個(gè)體的選擇：適齡、健康、體重符合要求的正常動(dòng)物（以雄性為佳）；抗體需要量少時(shí)，選用家兔、豚鼠動(dòng)物（以雄性為佳）；抗體需要量少時(shí)，選用家兔、豚鼠

14、和雞等小動(dòng)物；抗體需要量大時(shí)，可選用綿羊、山羊、馬、和雞等小動(dòng)物；抗體需要量大時(shí)，可選用綿羊、山羊、馬、驢等大動(dòng)物。驢等大動(dòng)物。20 免疫方法免疫方法 選定動(dòng)物后，在免疫過(guò)程中應(yīng)考慮免疫劑量、免疫途選定動(dòng)物后，在免疫過(guò)程中應(yīng)考慮免疫劑量、免疫途徑、免疫次數(shù)、免疫間隔等因素。徑、免疫次數(shù)、免疫間隔等因素。 免疫原的劑量：免疫原的接種劑量按免疫原性的強(qiáng)弱、免疫原的劑量：免疫原的接種劑量按免疫原性的強(qiáng)弱、動(dòng)物的個(gè)體狀態(tài)和免疫時(shí)間來(lái)確定。首次免疫時(shí)，劑量不動(dòng)物的個(gè)體狀態(tài)和免疫時(shí)間來(lái)確定。首次免疫時(shí)，劑量不宜過(guò)大，以免產(chǎn)生免疫麻痹。宜過(guò)大，以免產(chǎn)生免疫麻痹。 免疫途徑通常有皮內(nèi)、皮下、肌肉、靜脈、腹腔、

15、淋巴免疫途徑通常有皮內(nèi)、皮下、肌肉、靜脈、腹腔、淋巴 結(jié)結(jié)等，視不同的免疫方案而異。對(duì)于不易獲取的寶貴抗原可采等，視不同的免疫方案而異。對(duì)于不易獲取的寶貴抗原可采用淋巴結(jié)免疫法。用淋巴結(jié)免疫法。免疫間隔時(shí)間是影響抗體產(chǎn)生的重要因素，其中首次與第二免疫間隔時(shí)間是影響抗體產(chǎn)生的重要因素，其中首次與第二次免疫的間隔時(shí)間尤為重要，一般以次免疫的間隔時(shí)間尤為重要，一般以1020天為佳，二次后天為佳，二次后間隔時(shí)間一般為間隔時(shí)間一般為710天，若間隔時(shí)間太長(zhǎng)，則刺激減弱，天，若間隔時(shí)間太長(zhǎng)，則刺激減弱，抗體效價(jià)不高。抗體效價(jià)不高。 21動(dòng)物采血?jiǎng)游锊裳?采集免疫血清前，要預(yù)先測(cè)試抗體效價(jià)測(cè)定，若效價(jià)達(dá)到采

16、集免疫血清前，要預(yù)先測(cè)試抗體效價(jià)測(cè)定，若效價(jià)達(dá)到要求，應(yīng)在末次免疫后一周及時(shí)采血，否則抗體效價(jià)會(huì)下降。要求，應(yīng)在末次免疫后一周及時(shí)采血，否則抗體效價(jià)會(huì)下降。 頸動(dòng)脈采血法頸動(dòng)脈采血法 心臟采血法心臟采血法 靜脈采血法靜脈采血法22免疫血清的鑒定免疫血清的鑒定 表達(dá)量的測(cè)定：表達(dá)量的測(cè)定：顆粒性抗原可采用凝集試驗(yàn)，可溶顆粒性抗原可采用凝集試驗(yàn)，可溶性抗原常用雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、性抗原常用雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、ELISAELISA等方法。等方法。 玻片凝集試驗(yàn)玻片凝集試驗(yàn) 肥達(dá)試驗(yàn)（微量法）肥達(dá)試驗(yàn)（微量法） ELISA ELISA23玻片凝集試驗(yàn)玻片凝集試驗(yàn) 玻片凝集試驗(yàn)為定性試驗(yàn)方法，一般用已知抗體

17、作為診玻片凝集試驗(yàn)為定性試驗(yàn)方法，一般用已知抗體作為診斷血清、與受檢顆粒抗原如菌液或紅細(xì)胞懸液各加斷血清、與受檢顆粒抗原如菌液或紅細(xì)胞懸液各加1 1滴在滴在玻片上，混勻，數(shù)分鐘后即可用肉眼觀察凝集結(jié)果，出現(xiàn)玻片上，混勻，數(shù)分鐘后即可用肉眼觀察凝集結(jié)果，出現(xiàn)顆粒凝集的為陽(yáng)性反應(yīng)。顆粒凝集的為陽(yáng)性反應(yīng)。 此法簡(jiǎn)便、快速，一般用來(lái)鑒定菌種或分型，也用于人此法簡(jiǎn)便、快速，一般用來(lái)鑒定菌種或分型，也用于人類類ABOABO血型的鑒定。血型的鑒定。24肥達(dá)試驗(yàn)（肥達(dá)試驗(yàn)（Widal test）是用已知的傷寒桿菌）是用已知的傷寒桿菌O、H抗原和抗原和甲、乙型副傷寒桿菌甲、乙型副傷寒桿菌H抗原與病人血清做定量凝

18、集試驗(yàn)，抗原與病人血清做定量凝集試驗(yàn)，以測(cè)定患者血清中有無(wú)相應(yīng)抗體，根據(jù)抗體含量的多少以以測(cè)定患者血清中有無(wú)相應(yīng)抗體，根據(jù)抗體含量的多少以及增長(zhǎng)情況判斷陽(yáng)性。及增長(zhǎng)情況判斷陽(yáng)性。此法一般用來(lái)幫助診斷傷寒及副傷寒。此法一般用來(lái)幫助診斷傷寒及副傷寒。 肥達(dá)試驗(yàn)肥達(dá)試驗(yàn)25ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA) 即將已知的抗原或抗體吸附即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。進(jìn)行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測(cè)大分子抗原和特異性抗體等，具有快該技術(shù)可用于檢測(cè)大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、

19、簡(jiǎn)便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。速、靈敏、簡(jiǎn)便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。26 特異性鑒定：特異性鑒定：抗體特異性鑒定常用雙向免疫擴(kuò)散法、免疫電泳法。抗體特異性鑒定常用雙向免疫擴(kuò)散法、免疫電泳法。 純度鑒定：純度鑒定： 抗體純度的鑒定可采用抗體純度的鑒定可采用SDS-聚丙酰胺凝膠電泳（聚丙酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）、）、雙向擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫電泳等方法。雙向擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫電泳等方法。 IgG含有重鏈和輕鏈，純含有重鏈和輕鏈，純IgG的的SDS-PAGE結(jié)果應(yīng)有兩條蛋白電泳結(jié)果應(yīng)有兩條蛋白電泳帶（分子量約帶（分子量約53kD和和22kD），若出現(xiàn)多條電泳帶則表明制備的抗），若出現(xiàn)多條電泳帶則表明制備的

20、抗體混有雜蛋白，需進(jìn)一步純化。體混有雜蛋白，需進(jìn)一步純化。 結(jié)合活性鑒定：結(jié)合活性鑒定：測(cè)定抗體親力的方法較多，如平衡透析法、測(cè)定抗體親力的方法較多，如平衡透析法、ELISA或或RIA競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)等。競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)等。27抗體親合常數(shù)測(cè)定抗體親合常數(shù)測(cè)定 親合常數(shù)測(cè)定采用非競(jìng)爭(zhēng)酶免疫試驗(yàn)法：親合常數(shù)測(cè)定采用非競(jìng)爭(zhēng)酶免疫試驗(yàn)法： 先確定在某一抗原濃度時(shí)抗體可以達(dá)到飽和；先確定在某一抗原濃度時(shí)抗體可以達(dá)到飽和； 以該抗原濃度為實(shí)驗(yàn)條件，飽和時(shí)的以該抗原濃度為實(shí)驗(yàn)條件，飽和時(shí)的OD值作為值作為OD-100，找出找出OD-50時(shí)的抗體濃度和相應(yīng)的抗原濃度；時(shí)的抗體濃度和相應(yīng)的抗原濃度； 根據(jù)公式根據(jù)公式

21、Ka= n-1 計(jì)算抗體的計(jì)算抗體的Ka值。值。 2(nAbt-Ab t)t代表測(cè)定時(shí)的溫度；代表測(cè)定時(shí)的溫度；n=Abt/Abt；Abt 表示抗原濃度較高的表示抗原濃度較高的Amax的一半；的一半；Abt表示抗原濃度較低的表示抗原濃度較低的Amax的一半。的一半。 對(duì)于單克隆抗體，一般親合力要求對(duì)于單克隆抗體，一般親合力要求107L/mol，好的單抗多，好的單抗多大于大于109 L/mol。 28多克隆抗體的保存多克隆抗體的保存 4保存（保存（6個(gè)月）個(gè)月）低溫保存（低溫保存（-70 -20 ，5年）年）真空干燥保存（真空干燥保存（5 10年）年）注意點(diǎn)：保存前需經(jīng)除菌注意點(diǎn)：保存前需經(jīng)除菌

22、 保存液含防腐劑保存液含防腐劑 避免反復(fù)凍融（分裝）避免反復(fù)凍融（分裝） 29半抗原性免疫原的制備半抗原性免疫原的制備 載體選擇：載體選擇：（1）蛋白質(zhì)類：常用的有人血清白蛋白、牛血清白蛋白、血蛋）蛋白質(zhì)類：常用的有人血清白蛋白、牛血清白蛋白、血蛋白等，其中以牛血清白蛋白最為常用。白等，其中以牛血清白蛋白最為常用。（2）多肽類聚合物：是由人工合成的多肽聚合物，也是一類良）多肽類聚合物：是由人工合成的多肽聚合物，也是一類良好的載體，常用的有多聚賴氨酸。好的載體，常用的有多聚賴氨酸。（3）大分子聚合物：聚乙烯吡咯烷酮（）大分子聚合物：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、羧甲基纖維素）、羧甲基纖維素(CMC)等皆可與半抗原結(jié)合，加入福氏完全佐劑可誘導(dǎo)動(dòng)物等皆可與半抗原結(jié)合，加入福氏完全佐劑可誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生良好的抗體。產(chǎn)生良好的抗體。30 連接方法：連接方法： 物理法：是用物理吸附法將載體與半抗原連接，其物理法：是用物理吸附法將載體與半抗原連接，其原理是通過(guò)電荷和微孔來(lái)吸半抗原，吸附載體主要原理是通過(guò)電荷和微孔來(lái)吸半抗原，吸附載體主要有有PVPPVP和和CMCCMC等；等； 化學(xué)法：是利用某些功能基團(tuán)把半抗原連接到蛋白化學(xué)法：是利用某些功能基團(tuán)把半抗原連接到蛋白質(zhì)類或多肽類聚合物載體上。不同的半抗原應(yīng)選用質(zhì)類或多肽類聚合物載體上。