1、血管抑素對口腔鱗癌移植瘤抑制作用探究【摘要】目的：(1)建立口腔鱗狀細(xì)胞癌裸鼠移植瘤模型。(2 )血管抑素(angiostatin)對口腔鱗癌移植瘤抑制作用的研 究。方法：建立口腔鱗狀細(xì)胞癌裸鼠移植瘤模型：將人tca8113細(xì)胞系培養(yǎng)并接種至20只裸小鼠皮下，1周后移 植瘤模型建立。再將裸鼠分為一個對照組和3個治療組，治 療組用3個不同濃度重組人血管抑素干擾。對照組用pbs 液注射。每周測量1次腫瘤大小。35天后取標(biāo)本并稱重。結(jié) 果:rhagn 處理劑量為 50 mg / (kg•d)、100 mg /(kg•d)和 200mg / (kg&#8

2、226;d)時，腫瘤體積分別為 (4945±364)mm3. (2423±258)mm3 和(472±48)mm3 ,與對 照組相比，治療組的體積和重量明顯減小(pvo.05 ,p<0.01);其抑瘤率分別為31.5%, 62.0%和85.5%o結(jié)論：血管抑素能顯著抑制人tca8113移植瘤的生長，且作用呈劑量依賴 性。【關(guān)鍵詞】血管抑素；口腔鱗癌；移植瘤文章編號:1009-5519( 2007 )15-2213-02中圖分類號:r73文獻(xiàn)標(biāo)識碼：athe effect that angiostatin inhibits growth oftransplan

3、ted tumor of oral squamous-cell carcinomajiang li-hui1 , liu zhi-gang1 , xiang rong2 , etal.(1.department of dentofacial surgery , the stomatological hospital affiliated to chongqing universtiy of medical sciences ,chongqing 400015 ,china 2huaihua new hospital , the seenond people's hospital ofh

4、uaihua,hunan 418000 , china)study the effect thatabstract objective : ( 1 ) to construct the model of transplanted tumor of oral squamous-cell carcinoma.(2)toangiostatin inhibits growth oftransplanted tumorof oralsquamous-cellcarcinoma.methods:tocon struct themodels oftran splanted tumorof oralsquam

5、ous-cellcarcinoma.tca8113 cells were cultivated and inoculated to twenty nude mice.a week later , the models of transplanted tumor of oral squamous-cell carcinoma were constructed.the twenty nude mice were divided into 4 groups , ie one control group and 3 treatment groups.the treatment groups beari

6、ng huma n tca8113 were subcutaneously injected with different dose of rhagn daily for 35 days , the size of tumor was measured every week .at the end of the treatment , all the speciment were dissected and weighed the volume and weight of tumor were analyzed by statistics.results:the volume of tumor

7、 was(4945±364)mm3 , (2423±258)mm3 and(472±48)mm3 at rhagn dose of 50 mg / (kg&#8226;d) , 100 mg / (kg&#8226;d)and 200 mg / (kg&#8226;d) respectively ; compared with the control group ,the volume and weight of tumor were significantly decreased(p<0 05 , p<0 . 01), and

8、 the inhibitory rate of growth on transplanted tumors of oral squamous-cell carcinoma was 31 . 5% , 62 0% and 85 . 5 % respectively.conclusion:the angiostatin can significantly inhibit growth of human oral squamous-cell carcinoma in vivo in a dose-dependent mariner key words】angiostatin ; oscc ;tran

9、splanted tumor隨著分子腫瘤學(xué)的發(fā)展，人們認(rèn)識到腫瘤血管生成是實體瘤惡性轉(zhuǎn)化、生長和轉(zhuǎn)移的生物基礎(chǔ)和重要環(huán)節(jié)口。因此, 抑制腫瘤血管生成已成為一種新穎抗癌途徑。血管抑素(angiostatin )是血漿纖維蛋白溶酶原的內(nèi)部片段，它是第 一個被發(fā)現(xiàn)的腫瘤源性血管生成抑制因子，能特異性地抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，并可進入血液循環(huán)對遠(yuǎn)離腫瘤部位 產(chǎn)生作用。本研究即建立口腔鱗癌裸鼠移植瘤模型，用血管 抑素治療觀察抑制移植瘤情況。1材料與方法1.1細(xì)胞株:tca8113從華西醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生化室購買。 裸小鼠:5 7周齡balb / c裸小鼠均為雄性 體重(20±2)g , 購自北京

10、醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，飼養(yǎng)于重慶醫(yī)科大學(xué)實驗 動物中心。血管抑素：由晶美公司聯(lián)系購買。1.2人舌癌tca8113裸鼠移植瘤模型的建立：將人舌癌 tca8113細(xì)胞系用含體積分?jǐn)?shù)為10%小牛血清的rpmi-1640大培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)傳代約67代歷時約3周左右， 已經(jīng)達(dá)到20個200 ml大培養(yǎng)瓶鋪滿瓶底約達(dá)80% ,細(xì)胞 處于對數(shù)生長期，此時細(xì)胞的活力強，容易接種成功。調(diào) 整細(xì)胞濃度為2x107個/ml ,分別用皮試針頭接種于裸鼠右側(cè)腋部皮下，每鼠為0 j ml ,l周后腫瘤可長至直徑為10- 20 mm ,即建立人舌癌tca8113裸鼠移植瘤模型。1.3血管抑素抑制腫瘤試驗1.3.1試驗分組：隨機

11、分成4組，每組5只為一籠。即1 個對照組和3個治療組。1.3.2標(biāo)記裸鼠：手術(shù)用小剪刀，將5只中的4只裸鼠按 左耳前、左耳后、右耳前、右耳后的耳緣處分別剪一個長約 1 mm ,深約2 mm的楔形切口，剩余的1只不剪。這樣將 同一籠中的5只裸鼠得以標(biāo)記。1.3.3血管抑素試驗：治療組每個裸鼠分別在遠(yuǎn)離腫瘤部位腹腔注射02 ml的rhagn ,劑量分別為50 mg/(kg&#8226;d)(t1). 100 mg/(kg&#8226;d)(t2)和 200 mg/(kg&#8226;d)仃3),對照組注射等量的pbs液。治療期為35天，給藥期間每1周用游標(biāo)卡尺測量1次腫瘤最

12、長徑、 最短徑。1.3.4手術(shù)切除標(biāo)本:斷頸法失活裸鼠，取下腫瘤后測量長短徑并稱重。取每個腫瘤的一部分放入10%中性甲醛溶液 中，以備后續(xù)的免疫組化，一部分放入rna組織保存液以 備后續(xù)的rt-pcr檢測。1.3.5實驗結(jié)果的判定方法2 :口腔鱗癌移植瘤組織抑制 結(jié)果判定按公式v=tt / 6(a+b)/23(v為腫瘤近似體積，a 為瘤體的最短徑，b為瘤體的最長徑)計算瘤體的近似體積。 處死裸鼠后，稱取體重和瘤重(mg),計算抑瘤率(%)=(1-實 驗組平均瘤重/對照組平均瘤重)x100%。所有口腔鱗癌移 植瘤組織形態(tài)變化結(jié)果數(shù)據(jù)均用x±s表示，采用t、r檢驗。應(yīng)用spss(8.0)

13、統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析。2實驗結(jié)果 2.1成功建立口腔鱗狀細(xì)胞癌裸鼠移植瘤模型。2.2血管抑素對腫瘤體積及重量影響：見表仁2o從表1可看出，對照組腫瘤生長迅速，增大明顯，35天 后瘤體積增加gij(7932±541)mm3o t1. t2、t3治療組腫瘤 生長緩慢，體積明顯縮小，與對照組相比，差異均有顯著性 (p<0.01),其中t2和t3治療組效果更明顯，且生長速度 與rhagn劑量呈負(fù)相關(guān)(0.926 , p<0.01)orhagn對人tca8113移植瘤生長的抑制作用：從表2中可看岀，各治療組的腫瘤重量均顯著低于對照組(pvo . 05), 其抑瘤率隨rhagn劑量

14、的增加而增大，表明rhagn能有效 抑制人tca8113移植瘤在裸鼠體內(nèi)的生長，其抑瘤率與rhagn劑量呈正相關(guān)(r=0942 , p<0.01)o3討論口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous-cell carcinoma)占口腔頜面部惡性腫瘤的80%以上。oscc具有局部侵襲、區(qū)域 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移.遠(yuǎn)隔轉(zhuǎn)移的特性。盡管采用手術(shù)、放療.化療 或綜合治療的手段，但其5年的生存率尚未能得到明顯地提 高。而抗腫瘤血管生成治療為其提供一個好的治療手段，作 為最早發(fā)現(xiàn)抗腫瘤血管生成劑的血管抑素(angiostatin ,agn) 是1994年美國哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院的o'reilly等學(xué)者從荷瘤

15、小鼠 的血清和尿液中首次提純出來的一種血管生成抑制劑。在血 管抑素作用機制的研究中3，體外實驗證實了血管抑素抗血 管生成作用與其誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡有關(guān)；血管抑素能特異 性抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移，并可進入血液循環(huán)，對遠(yuǎn)離腫 瘤的部位作用，從而使腫瘤原發(fā)灶萎縮，并防止轉(zhuǎn)移灶的生 長。血管抑素能明顯抑制原發(fā)瘤和轉(zhuǎn)移瘤的生長，是迄今為止最有效的內(nèi)源性血管生成抑制劑。然而目前對rhagn的 最佳給藥濃度、劑量與途徑研究報道不多，應(yīng)用于口腔頜面 部的腫瘤治療研究更少，為此，我們采用不同劑量的rhagn 治療人tca8113荷瘤裸小鼠，以探討有效劑量。本實驗結(jié)果 證明rhagn有抑瘤作用，小劑量即可抑制腫瘤

16、的生長，并 隨著劑量的增加抑制效果更明顯，其作用呈劑量依賴性。與 對照組相比，治療組的體積和重量明顯減小(pvo05 , p<001);其抑瘤率分別為31 . 5%、62 . 0%和855%o 實驗還發(fā)現(xiàn)，裸小鼠在應(yīng)用rhagn治療過程中，未岀現(xiàn)明 顯的不良反應(yīng)，治療組裸小鼠順利完成治療，未出現(xiàn)死亡。這種藥品國內(nèi)只是實驗室血液提取實驗用，但已由美國醫(yī)藥 公司生產(chǎn)，也只進行二期臨床試驗，主要原因是治療需長期 進行且用藥量大，停藥后易復(fù)發(fā)且不能使腫瘤完全消退4。但血管抑素?zé)o不良反應(yīng)，無耐藥性，無抗原性，必將成為一極具潛力的新型抗腫瘤藥物。參考文獻(xiàn):1 飛虎 腫瘤血管生成抑制因子及endostatin研究進展j.安徽醫(yī)藥，2003 , 7(1)