1、【嘉美實驗】雖然液相蛋白定量檢測的技術(shù)很多，但是大多數(shù)的技術(shù)僅能對樣本進行單一指標(biāo)的檢測，同時檢測多個指標(biāo)時則需要提供大量的樣本分批檢測，操作繁瑣，且各指標(biāo)間差異性較大。對于樣本量較少或需要對比各指標(biāo)的用戶，傳統(tǒng)的技術(shù)無法滿足需要。日常實驗中，常需對溶液體系中的可溶性蛋白進行定量檢測，如細胞培養(yǎng)上清或血清中的細胞因子含量的定量分析，由于這些因子的含量較少，低于一般常規(guī)方法的檢測下限，使用常規(guī)的蛋白檢測方法Western Blot等很難檢測。為此，著名的流式抗體公司BD-Pharmingen開發(fā)了基于流式細胞儀的液相蛋白定量技術(shù)CBA。嘉美生物是該技術(shù)在國內(nèi)最早的推廣者，并同時為廣大生命科學(xué)研究

2、者提供流式CBA的檢測外包服務(wù)。CBA工作原理：Cytometric Bead Array（CBA），即細胞因子微球檢測技術(shù)。是一種基于流式細胞檢測系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測方法，它能夠同時對單個樣品中的多個指標(biāo)進行檢測。BD公司利用流式細胞儀可對熒光信號進行級數(shù)放大的特性，將受檢的可溶性因子附著于一些具有近似細胞直徑的微粒上，即可對受檢樣品中的各種可溶性因子進行檢測。 CBA的基本原理近似于ELISA的檢測，即利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物，并利用流式細胞儀檢測類似“三明治”的顆粒待測物復(fù)合體所散發(fā)的熒光，從而測定待測物的數(shù)量。詳細原理介紹：每個CBA微球大小一致，具有特定的熒光強

3、度，包被有適用于特定分析（如其它抗體或者可溶性蛋白）的特異性捕獲抗體（Capture Antibody），提供了類似ELISA孔板的捕獲表面。當(dāng)微球和待測樣品溶液混合后，微球上的特異性抗體就與樣品（血清、血漿或者細胞培養(yǎng)液）中相應(yīng)的抗原或蛋白結(jié)合，然后加入熒光標(biāo)記的檢測抗體，就會形成“三明治”夾心復(fù)合物。最后通過流式細胞儀對特異性目的蛋白進行檢測。CBA的每種微球攜帶有不同強度的紅色熒光，在流式細胞儀的FL3通道通過檢測微球熒光強度的差異對目的蛋白定性；檢測抗體帶有PE熒光素標(biāo)記，在流式細胞儀的FL2通道檢測，通過檢測抗體的PE熒光強度定量目的蛋白。 CBA技術(shù)特點：CBA是集ELI

4、SA和細胞流式技術(shù)優(yōu)點為一身的液相蛋白檢測技術(shù)。CBA的每一種微球提供一種蛋白的捕獲表面，捕獲微球與待測樣品后，呈懸浮態(tài)，與ELISA相比，能更有效地捕獲被分析物；CBA具有FCM的寬范圍熒光檢測特點，對樣本需求量更少，檢測更快速、更準確。下面我們介紹一下CBA主要的技術(shù)特點:1、輕松實現(xiàn)多重檢測。最多可同時對一個樣本中的75個目的蛋白進行精確定量。2、樣本需要量小。僅需要50L溶液就可進行一次檢測。3、更高的靈敏度。分析靈敏度高達2.8pg/mL。4、更高的靈敏度、更寬的檢測范圍和更好的重復(fù)性。CBA技術(shù)使蛋白定量的分析靈敏度高達pg/ml級別,檢測范圍達0-5000pg/ml，所有分析只需

5、一組標(biāo)準曲線。根據(jù)抗體的熒光強度對目的蛋白定量，排除了ELISA反應(yīng)中酶聯(lián)放大產(chǎn)生的假陽性。5、檢測對象的靈活組合BD CBA Flex Set。CBA kit是同時檢測試劑盒配好的6個指標(biāo)，形式比較固定。為滿足不同客戶的實際需要和研究興趣，BD于2005年初推出了CBA Flex set。它改變了CBAkit的固定形式，成為自由組合、靈活搭配的“自助餐”。您可以根據(jù)需要組合不同的捕獲微球來檢測多個指標(biāo)，最多能同時檢測75個指標(biāo)。除了擁有CBA kit的優(yōu)勢外，F(xiàn)lex Set還配有獨立的軟件分析系統(tǒng)（CBA Flex Set Analysis Software），并且可以在BD FACSAr

6、ray Bioanalyzer上，直接用96孔和384孔板進行操作。CBA Flex set賦予研究者更靈活、更自由，更大的選擇空間，而且進一步豐富了CBA產(chǎn)品線。種類涉及免疫、細胞信號傳導(dǎo)、細胞凋亡等許多領(lǐng)域的蛋白定量分析。6、操作簡單，省時省力。CBA技術(shù)采用芯片式集成測定，所有檢測只需一組標(biāo)準曲線，就可計算出每種待測蛋白濃度；操作簡單，整個流程只需要3.5小時，對待測樣本可做實時分析，縮短檢測了時間，提高了檢測效率。7、強大的軟件分析系統(tǒng)。BD CBA軟件具有強大的數(shù)據(jù)處理能力，直接將目標(biāo)蛋白的檢測結(jié)果換算成標(biāo)準濃度；除了為用戶提供待測物的計數(shù)結(jié)果外，還能提供可視輪廓或信號圖形以幫助用戶

7、獲得更多的信息。有用于Macintosh和Microsoft系統(tǒng)兩種版本供您選擇。和傳統(tǒng)的液相蛋白定量技術(shù)相比，CBA技術(shù)是一種“多元”和“同步”的檢測技術(shù)。革新的CBA技術(shù)與傳統(tǒng)的蛋白定量相比有下列優(yōu)點：傳統(tǒng)ELISA流式CBA檢測技術(shù)單項檢測多參數(shù)檢測每項實驗樣本用量50-200ul樣本用量少于50ul需要抗原包被操作方便，節(jié)省時間實驗時間大于24h流式細胞儀自動檢測，標(biāo)準曲線自動測定，專用軟件自動計算酶-底物背景干擾無酶-底物背景干擾 CBA應(yīng)用：自CBA上市以來，越來越多的科研和臨床研究人員將CBA應(yīng)用于他們的領(lǐng)域。CBA應(yīng)用領(lǐng)域涉及眼淚、血清、唾液、細胞培養(yǎng)上清等樣本中細胞

8、因子、炎癥因子的水平的分析。CBA還用于細胞信號傳導(dǎo)中磷酸化蛋白、凋亡相關(guān)蛋白分析，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）和新生兒膿血癥等免疫疾病的監(jiān)控，腫瘤研究，藥物對病人的治療效果評估，藥物研發(fā)，疫苗研究，總體免疫功能分析等多領(lǐng)域。CBA指標(biāo)檢測明細:1、CBA指標(biāo) 目錄號 產(chǎn)品說明 檢測指標(biāo) 557800 Non-human Primate Th1/Th2 Cytokine Kit IL-2, IL-4, IL-5, IL-6,TNF, IFN- 560

9、485 Mouse Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit IL-2, IL-4, IL-6, IFN-, TNF, IL-17A, IL-10 551287 Mouse Th1/Th2 Cytokine Kit IL-2, IL-4, IL-5, IFN-,TNF 552364 Mouse Inflammation Kit IL-6,

10、 IL-10, MCP-1, IFN-, TNF, IL-12p70 550026 Mouse Immunoglobulin Isotyping Kit Heavy and light chain isotypes of mouse IgG1,   IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM, and IgE

11、60;560484 Human Th1/Th2/Th17 Kit IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-, IL-17A 550749 Human Th1/Th2 Cytokine Kit IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-g 551809 Human Th1/Th2 Cytokine

12、 Kit II IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-g 551811 Human Inflammatory Cytokine Kit IL-8, IL-1, IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70 552990 Human Chemokine Kit IL-8, RANTES, MIG,

13、60;MCP-1, IP-10 561418 Human Anaphylatoxin Kit C3A,C4A,C5A2、CBA Flex Set 細胞因子檢測指標(biāo) Human Mouse Rat IFN-,INF- IL-1  ,IL-1,    IL-2,IL-3, IL-4 , IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-

14、10,    IL-11,IL-12, IL-12p70,  IL-13,IL-17A, IL-21,  IL-23p40 TNF,TNFR,TNFR IP-10 I-TAC MIG MCP-1 MIP-1 , MIP-1  Eotaxin RANTES CD54(ICAM-1) CD62E,CD62P,CD62L CD106(VCAM-1) sC

15、D40 sCD154 sCD121a,sCD121b Soluble CD14 Basic FGF VEGF Angiogenin G-CSF,GM-CSF LIF LT- OSM Granzyme A,  Granzyme B Fas Ligand(FasL) Fractalkine IgA, IgG1, IgG2,   IgG3,Ig

16、G4, IgM,   Total IgG, IFN-  IL-1  ,IL-1, IL-2,IL-3, IL-4 , IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-12, IL-12p70, IL-13, IL-17A, IL-21,  IL-23p40, TNF MIG MCP-1 MIP-1 ,

17、 MIP-1  RANTES KC CD62E(E-Selectin), CD62L(L-Selectin) G-CSF,GM-CSF IFN-  IL-1 , IL-4 , IL-6, IL-10 TNF 3、CBA Flex Set 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)指標(biāo) Phospho Akt1(S473) Phospho Akt2(S474) Phospho BLNK (Y8

18、4) Phospho p120 Catenin(Y228) Phospho Btk (Y551) Phospho MEK1/2(S222) Phospho eNOS (S1177) Phospho Paxillin(Y118) Phospho ERK1/2 (T202/Y204) Phospho Pyk2(Y402) Phospho Itk (Y511) Phospho SLP-76(Y145) Phospho JNK1/2 (T183/Y185) Phospho c-jun(S63) Phospho p38 (T180/Y182) Phospho stat3 Phospho PLCg (Y783) Total Stat1 Phospho Rsk (T573) Total Syk Phospho Stat1 (Y701)&#