1、抗原抗體反應PPT課件第十章 抗原抗體反應 免疫測定 Immunoassay, IA MD 副教授 食品質量與安全教學系抗原抗體反應PPT課件一、抗原抗體反應的特點 （體外反應） p176 特異性 交叉性 兩種抗原含有共同部分（同抗原決定基） 比例相關性/ 按比性 可逆性 如提取純化，親和層析 階段性 第一階段 AgAb特異結合，幾分鐘 第二階段 出現肉眼可見變化：凝集、沉淀、溶解、標記放大 。幾分鐘、幾小時抗原抗體反應PPT課件二、影響AgAb 反應的因素 電解質 0.85NaCl 或其他 Buffer 酸堿度 pH68 溫度 最適 37， 低溫緩慢，室溫也可，不高于56抗原抗體反應PPT課

2、件三、AgAb反應（試驗）種類 凝集反應 agglutination test 概念： 顆粒Ag 與相應Ab 結合，在電解質存在下，經過一定時間（幾分幾小時）出現肉眼可見的凝集塊現象稱為凝集反應 凝集原 凝集素抗原抗體反應PPT課件 凝集試驗的類型 直接凝集反應 試管凝集試驗 玻片凝集試驗 如血型檢驗、O抗原檢驗 間接凝集試驗 將可溶性Ag，或者把Ab 吸附于不直接參與和干擾AgAb反應的顆粒載體上，然后使二者混合發生凝集反應。 協同凝集反應 屬于間接凝集反應 抗原抗體反應PPT課件間接凝集反應抗原抗體反應PPT課件 沉淀反應 概念 指可溶性Ag 與相應Ab 特異結合，形成免疫復合物在電解質影

3、響下形成沉淀現象。 沉淀原 precipitinogen 可溶Ag 如 細菌浸出液 沉淀素 precipitin 抗原抗體反應PPT課件 沉淀試驗類型 環狀沉淀試驗 液體中直接沉淀 凝膠沉淀試驗 /免疫擴散 雙向免疫擴散 免疫單擴散 免疫電泳 抗原抗體反應PPT課件抗原抗體反應PPT課件抗原抗體反應PPT課件 補體結合反應/試驗 AgAb 特異結合后，補體參與下，發生溶菌、溶細胞、溶血現象。 溶血素抗原抗體反應PPT課件 標記抗原抗體反應/技術 免疫標記技術 概念 指用熒光素、放射性同位素、酶、鐵蛋白、膠體金、生物素親和素等標記Ab 或 Ab，后進行的AbAg 反應。 一抗、二抗（抗抗體）、酶

4、標二抗 熒光素、放射性同位素、酶標記最為成熟，稱為免疫學三大標記技術 抗原抗體反應PPT課件 免疫標記技術的優點 a 特異性強 b 敏感性高 c 快速 d 能定性、定量和定位抗原抗體反應PPT課件ELISA 測定原理ELISA，enzyme-linked immunoadsorbent assay 酶聯免疫吸附試驗 一種標記 抗體 / 抗原 的 分析技術抗原抗體反應PPT課件ELISA 種類 夾心法 間接法 競爭法 抗原抗體反應PPT課件雙抗體夾心法（HBsAg、HBeAg等）示意圖固相載體抗體抗原酶抗體酶標記抗體1.將抗體包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗原，則結合為抗原抗體復合物。3.再

5、加入酶標記抗體，則結合為抗體-抗原-酶標記抗體復合物。4.酶催化底物并顯色。抗原抗體反應PPT課件雙抗原夾心法（抗-HBs等）示意圖1.將抗原包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗體，則結合為抗原抗體復合物。3.再加入酶標記抗原，則結合為抗原-抗體-酶標記抗原復合物。4.酶催化底物并顯色。酶抗原酶標記 抗原抗體抗原固相載體抗原抗體反應PPT課件酶抗抗體酶標記抗抗體抗體抗原固相載體1.將抗原包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗體，則結合為抗原抗體復合物。3.再加入酶標記抗抗體，則結合為抗原-抗體-酶標記抗抗體復合物。4.酶催化底物并顯色。間接法（抗-HCV等）示意圖抗原抗體反應PPT課件捕捉法（抗

6、-HAV IgM、抗-HDV IgM等）示意圖酶抗體酶標記 抗體抗原抗抗體固相載體抗體1.將抗抗體包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗體，則結合為抗抗體-抗體復合物。3. 加入抗原及酶標記抗體，則結合為抗抗體-抗體-抗原-酶標記抗體復合物。4.酶催化底物并顯色。抗原抗體反應PPT課件免疫膠體金技術抗原抗體反應PPT課件簡介 膠體金作為示蹤標志物標記抗原（半抗原）或抗體 目前發展為一種常用的標記技術 各種生物學研究中廣泛使用。 各種食品衛生、安全指標的最快速檢測幾乎都用免疫膠體金技術。 醫學診斷使用的免疫印跡技術幾乎都使用其標記。同時在流式、電鏡、免疫、分子生物學以至生物芯片中都可能用到。 抗原

7、抗體反應PPT課件免疫膠體金技術的基本原理： 還原劑 弱堿性 蛋白質陽離子基團 氯金酸 金顆粒 陰離子膠體 膠體金蛋白質HAuCl4 膠體金標記物： 抗原、半抗原、抗體均可標記 多種生物大分子，如SPA、PHA、ConA等。抗原抗體反應PPT課件抗原抗體反應PPT課件 免疫金標記技術 Immunogold labelling technique 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，在金標蛋白結合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中，這一反應也可以通過銀顆粒的沉積被放大，稱之為免疫金銀染色。 抗原

8、抗體反應PPT課件常用的免疫膠體金檢測技術： 免疫膠體金光鏡染色法 細胞懸液涂片或組織切片，可用膠體金標記的抗體進行染色。 免疫膠體金電鏡染色法 斑點免疫金滲濾法 應用微孔濾膜（硝酸纖維膜）作載體，先將抗原或抗體點于膜上，封閉后加待檢樣本，洗滌后用膠體金標記的抗體檢測相應的抗原或抗體。 膠體金免疫層析法 immunochromatography 抗原抗體反應PPT課件免疫層析膠體金測試片 將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結合墊上，當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細作用向前移動，溶解結合墊上的膠體金標記試劑后相互反應，再移動至固定的抗原或抗體的區域時，待檢物與