1、2021-11-71色譜法的理論與實踐2021-11-72一、色譜基礎理論概述一、色譜基礎理論概述n色譜法或稱層析法（chromatography）是一種物理或物理化學的分離分析方法。n1906年俄國植物學家tswett m將碳酸鈣裝在豎立的玻璃柱內，從頂端倒入植物色素的石油醚浸取液，并用石油醚沖洗，在柱的不同部位形成色帶，因而命名為色譜法。2021-11-73z色譜法是利用物質在不同的兩相中分配、吸附或其他親和作用的差異，通過多次重復使微小的差別積累起來變成大的差異，從而使混合物中各組分達到分離。z色譜技術在近二十多年中的飛速發展已形成一門專門的科學，稱為色譜學。廣泛應用于各個領域，成為多組

2、分混合物的最重要的方法。2021-11-74 二、色譜法的分類二、色譜法的分類 按流動相與固定相的分子聚集狀態分類氣相色譜法（氣-固，氣-液）液相色譜法（液-固，液-液）柱色譜，平面色譜，逆流分配2021-11-75按色譜過程的分離機制分類 u吸附色譜（adsorption ）利用吸附能力的差別.2021-11-76u離子交換色譜（ion exchange ）2021-11-77u毛細管電色譜（capillary electro- ）2021-11-78填充柱毛細管柱毛細管電色譜毛細管電泳柱色譜平面色譜逆流分配色譜gc lc sfccec 色譜法經典液相色譜hplc紙色譜法薄層色譜法薄膜色譜法

3、2021-11-79u熱力學理論塔片理論塔片理論 是由平衡的觀點來研究分離過程，是一種半經驗理論，以塔片理論為代表。u動力學理論速率理論速率理論 是從動力學觀點，即速度來研究各種動力學因素對柱效的影響，以van deemeter方程式為代表。 2021-11-710n基本概念u色譜峰（peak）樣品產生的電信號強度對洗脫時間作圖。稱為流出曲線，濃度 -時間曲線，也稱色譜帶（band）。u色譜峰有三種形式：t對稱峰t拖尾峰（tailing peak）t前延峰（leading peak）2021-11-711n峰形參數：u對稱因子u拖尾因子掌握2021-11-712w0.05h = x =h/20

4、峰的對稱性ha bd1xww0.05h0.05h2021-11-713u一個色譜峰，可用三項參數來描述：峰面積(a)峰高(h) tr tr掌握2021-11-714u基線（base line ）在操作條件下，檢測器中只有流動相通過時的流出曲線稱為基線。它反映了儀器的噪音隨時間的變化。nmv基線漂移掌握2021-11-715n定性參數2021-11-716n保留值n保留時間（retention time ，tr）進樣開始到組分色譜峰頂點時間間隔。u死時間（dead time ，t0或tm）流動相通過色譜系統的時間。2021-11-717n調整保留時間（adjusted retention tim

5、e，tr）也稱為表觀保留時間、校正保留時間某組分由于溶解或被吸附于固定相，比不溶解或不被吸附的組分在柱中多停留的時間，即：ntr= tr t0，在實驗條件一定（溫度、固定相）， tr決定組分的性質，故tr是定性的基本參數。2021-11-718tr1tr3tr2t0tr3tr2tr1mvtime進樣2021-11-719 保留體積（retention volume，vr），又稱洗脫體積流動相攜帶樣品進入色譜柱，由進樣開始到某組分在柱后出現濃度極大值時，通過色譜柱的流動相體積。 2021-11-720n相對保留值（1,2) 指組分（1）與參照物（2）兩者調整保留值的比值。 1,2= tr（1）/

6、 tr（2） = k1/k2 (k為分配系數）2021-11-721色譜峰的區域寬度）熟悉2021-11-722標準差為峰高0.607h 處的峰寬之半。h0.607h x2021-11-723n半峰寬也稱半腰寬，為色譜峰高之半處的峰寬。w1/2=2.355 ， w1/2易確定，且比值大，故測量誤差較小。h0.5hw1/22021-11-724n峰寬也稱基線寬度。對色譜峰兩側的拐點作切線,在極限上所截的距離,稱為峰寬。n對色譜峰兩側作切線后為等腰三角形，底邊為峰寬，而為等腰三角形高度之半處的寬度之半，所以 ：w=4 w2021-11-725 wh0.5h0.607hw1/22021-11-726n分配系數（partition coefficient，k ）2021-11-727n分離參數n分離參數用于衡量分離條件的優劣，常用分離度，表示。u分離度（resolution，r）ur=u即相鄰兩峰分開的距離是平均峰寬(w1+w2)/2的幾倍。 r大, 分離效果好。 2（tr2-tr1）w1+w22021-11-7282021-11-7292021-11-730n理論板數（n）與理論板高度（h）2021-11-731n理論板數取決于：u固定相種類、性質、填充狀況、柱長；u流動