1、NoImage第一節第一節 急性毒性作用及其試驗與評價急性毒性作用及其試驗與評價 第二節亞慢性毒性作用及其試驗與評價方第二節亞慢性毒性作用及其試驗與評價方法法第三節第三節 蓄積毒性作用及其試驗與評價蓄積毒性作用及其試驗與評價 第四節第四節 慢性毒性作用及其試驗與評價慢性毒性作用及其試驗與評價NoImage外來化學物在一定劑量、一定接觸時間和接觸方式下對試驗動物產生的綜合毒效應稱為一般毒性作用。一般毒性作用。 一般毒性作用根據接觸毒物的時間長短又可分為急性毒性、亞慢性毒性和慢性毒性急性毒性、亞慢性毒性和慢性毒性。 NoImageNoImage一、急性毒性的概念一、急性毒性的概念 二、急性毒性試驗

2、的目的二、急性毒性試驗的目的 三、急性毒性試驗方法的要點三、急性毒性試驗方法的要點 四、急性毒性分級和評價四、急性毒性分級和評價 NoImage一、急性毒性的概念一、急性毒性的概念 急性毒性是指機體（實驗動物或人）一次或急性毒性是指機體（實驗動物或人）一次或24h內多次接觸外源化學物后在短期內所產生的毒性內多次接觸外源化學物后在短期內所產生的毒性效應，包括一般行為和外觀改變、大體形態變化效應，包括一般行為和外觀改變、大體形態變化以及死亡效應。以及死亡效應。 NoImage1、急性接觸的次數、急性接觸的次數 （一次或多次）（一次或多次） 24h內內2、中毒效應出現的時間、中毒效應出現的時間（一般

3、為（一般為7-28d） 急性毒性效應一般是指機體接觸化學物后，在急性毒性效應一般是指機體接觸化學物后，在較短時間內觀察到的毒性癥狀。較短時間內觀察到的毒性癥狀。 3、中毒效應的強度、中毒效應的強度急性毒性概念中的幾個問題NoImage1、測試和求出毒物的致死劑量以及其他急性毒、測試和求出毒物的致死劑量以及其他急性毒性參數，通常以性參數，通常以LD50為最主要的參數；為最主要的參數； 2、初步評價毒物對機體的毒效應特征、靶器官、初步評價毒物對機體的毒效應特征、靶器官、劑量劑量-反應（效應）關系和對人體產生損害的危反應（效應）關系和對人體產生損害的危險性；險性； 3、研究受試物在動物體內的動力學變

4、化規律；、研究受試物在動物體內的動力學變化規律；4、為亞慢性、慢性毒性試驗研究以及其他毒理、為亞慢性、慢性毒性試驗研究以及其他毒理試驗提供接觸劑量和觀察指標選擇的依據。試驗提供接觸劑量和觀察指標選擇的依據。 二、急性毒性試驗的目的二、急性毒性試驗的目的NoImage包括實驗動物、染毒途徑、染毒劑包括實驗動物、染毒途徑、染毒劑量、觀察周期、觀察指標的選擇、量、觀察周期、觀察指標的選擇、計算方法和評價等。計算方法和評價等。 一般來說，一個新化學物在研制初一般來說，一個新化學物在研制初期就要進行急性毒性試驗。期就要進行急性毒性試驗。 如果急性毒性試驗通不過，則后面如果急性毒性試驗通不過，則后面的所有

5、試驗都不必進行了。的所有試驗都不必進行了。NoImage（一）實驗動物的選擇和要求（一）實驗動物的選擇和要求 盡量選擇急性毒性反應與人近似的動物；盡量選擇急性毒性反應與人近似的動物； 易于飼養管理、試驗操作方便的動物；易于飼養管理、試驗操作方便的動物； 繁殖生育力較強，數量較大能夠保障供應；繁殖生育力較強，數量較大能夠保障供應； 價格較低，易于獲得的動物。價格較低，易于獲得的動物。 實驗動物的選擇包括物種和品系、年齡、體重、實驗動物的選擇包括物種和品系、年齡、體重、數量等方面，必須按照其規范要求進行。數量等方面，必須按照其規范要求進行。NoImage1、實驗動物的物種和品系、實驗動物的物種和品

6、系 急性毒性試驗一般首先選擇哺乳動物，急性毒性試驗一般首先選擇哺乳動物，選擇兩種或兩種以上的動物。包括嚙齒選擇兩種或兩種以上的動物。包括嚙齒類和非嚙齒類。嚙齒類以大鼠、小鼠為類和非嚙齒類。嚙齒類以大鼠、小鼠為最常用。非嚙齒類以犬或猴最常用。最常用。非嚙齒類以犬或猴最常用。 急性毒性試驗所用大鼠的品系以急性毒性試驗所用大鼠的品系以Sprague-Dawley（SD）、）、Wistar為主，為主，小鼠則以昆明種、小鼠則以昆明種、NIH、ICR為多。為多。昆明種小鼠昆明種小鼠（KM小鼠）小鼠）特特 點：體型小，產仔多，生點：體型小，產仔多，生長繁殖快，飼養管理方便，長繁殖快，飼養管理方便，對環境的適

7、應性和對疾病的對環境的適應性和對疾病的抵抗力強。廣泛應用于藥理抵抗力強。廣泛應用于藥理毒力病理和細菌學研究，以毒力病理和細菌學研究，以及生物制品和藥品的鑒定。及生物制品和藥品的鑒定。NIH小鼠小鼠特特 點：體型小，產仔多，生點：體型小，產仔多，生長繁殖快，飼養管理方便，對長繁殖快，飼養管理方便，對環境的適應性和對疾病的抵抗環境的適應性和對疾病的抵抗力強。廣泛應用于藥理毒力病力強。廣泛應用于藥理毒力病理和細菌學研究，以及生物制理和細菌學研究，以及生物制品和藥品的鑒定。品和藥品的鑒定。Wistar大鼠大鼠特特 點：點： 抗病力強，自抗病力強，自發性腫瘤發病率低，發性腫瘤發病率低，多用于腫瘤、免疫、

8、多用于腫瘤、免疫、 藥理、內分泌。藥理、內分泌。 SD大鼠大鼠特點特點 ：白色，產仔多，：白色，產仔多，生長發育較生長發育較Wistar大大鼠快，對疾病的抵抗鼠快，對疾病的抵抗力較強，尤以對呼吸力較強，尤以對呼吸道疾病的抵抗力強。道疾病的抵抗力強。NoImage2、實驗動物的年齡和體重、實驗動物的年齡和體重 通常要求剛成年的動物，且為健通常要求剛成年的動物，且為健康未受孕的動物。康未受孕的動物。 通常大鼠通常大鼠180240g、小鼠、小鼠1825g、家兔、家兔22.5kg、豚鼠、豚鼠200250g、Beagle犬犬46kg、雜種犬、雜種犬815kg。（一）實驗動物的選擇和要求（一）實驗動物的選

9、擇和要求NoImage3、實驗動物的性別、實驗動物的性別 通常要求為雌雄各半。通常要求為雌雄各半。 但如有資料或預試驗發現試驗品但如有資料或預試驗發現試驗品對雌、雄動物毒效應有明顯的性對雌、雄動物毒效應有明顯的性別差異，則應單獨分別試驗并求別差異，則應單獨分別試驗并求出雌性和雄性動物各自的出雌性和雄性動物各自的LD50值。值。NoImage4、實驗動物的預檢、實驗動物的預檢 應先進行動物的給藥前檢疫觀察。應先進行動物的給藥前檢疫觀察。 大鼠、小鼠、豚鼠、兔的檢疫期為大鼠、小鼠、豚鼠、兔的檢疫期為1周，犬、周，犬、猴等適當地延長至猴等適當地延長至23周。周。 設定檢疫期有兩個主要目的：設定檢疫期

10、有兩個主要目的： 一是讓外購來的實驗動物要適應一段時間，減一是讓外購來的實驗動物要適應一段時間，減少環境和生理條件變化對試驗結果的影響；少環境和生理條件變化對試驗結果的影響； 二是篩檢健康等不符合試驗要求的動物二是篩檢健康等不符合試驗要求的動物 NoImage5、實驗動物的給藥前禁食處理、實驗動物的給藥前禁食處理 采用經口途徑染毒，實驗動物胃腸采用經口途徑染毒，實驗動物胃腸道內食物存留量對化學毒物的毒性道內食物存留量對化學毒物的毒性可產生較明顯的干擾，因此在試驗可產生較明顯的干擾，因此在試驗給藥前應作禁食處理。給藥前應作禁食處理。 大鼠在前一天傍晚下班時或晚間將大鼠在前一天傍晚下班時或晚間將飼

11、料撤掉。飼料撤掉。 小鼠由于其消化吸收和代謝速度較小鼠由于其消化吸收和代謝速度較快，可隔夜禁食也可禁食快，可隔夜禁食也可禁食4h以上。以上。NoImage 6.試驗動物的飼養環境試驗動物的飼養環境 恒定的溫度：恒定的溫度：223濕度：濕度：3070%光照度：晝夜各半光照度：晝夜各半飼料合格、飲水合格、墊料合格飼料合格、飲水合格、墊料合格NoImage不同的不同的LD50計算方法對動物組數的計算方法對動物組數的要求有所不同，一般為要求有所不同，一般為57組。組。 大、小鼠等小動物每組數量通常為大、小鼠等小動物每組數量通常為不少于不少于10只，家兔每組不少于只，家兔每組不少于8只，只，犬等大動物每

12、組不少于犬等大動物每組不少于6只。只。嚴格按照隨機分組進行。嚴格按照隨機分組進行。（二）實驗動物分組與數量（二）實驗動物分組與數量 NoImage受試物的接受、分樣、保管、稱量、配制以及受試物的接受、分樣、保管、稱量、配制以及在此過程中嚴格的質量保證是急性毒性試驗成在此過程中嚴格的質量保證是急性毒性試驗成功與否的重要環節。功與否的重要環節。 受試物的化學結構、純度、雜質成分、理化性受試物的化學結構、純度、雜質成分、理化性質特別是揮發性、溶解性等均需了解。質特別是揮發性、溶解性等均需了解。 計算試驗所需受試物的總量，一次備齊全部實計算試驗所需受試物的總量，一次備齊全部實驗的用量。應以同一批號為宜

13、。驗的用量。應以同一批號為宜。NoImage一般推薦，染毒最大量為：一般推薦，染毒最大量為： 經口經口20ml/kg（對空腹動物）；（對空腹動物）； 經皮經皮2ml/kg（根據體表面積計算，限于染毒的（根據體表面積計算，限于染毒的準確性）；準確性）； 靜脈靜脈1ml/kg（5min以上）；以上）； 肌內注射肌內注射0.5ml/kg（一個部位）；（一個部位）； 每眼每眼0.01ml； 直腸直腸0.5ml/kg； 吸入吸入2mg/L； 鼻：猴或犬每鼻孔鼻：猴或犬每鼻孔0.1ml。NoImage染毒途徑（染毒途徑（exposure routes）的選擇需考慮：）的選擇需考慮：1. 模擬人在生活和生產

14、環境中實際接觸受試物的模擬人在生活和生產環境中實際接觸受試物的途徑和方式途徑和方式；2. 有利于不同化學物之間急性毒性大小的比較有利于不同化學物之間急性毒性大小的比較； 3. 受試物的性質和用途；受試物的性質和用途；4. 各種受試物毒性評價程序的要求等。各種受試物毒性評價程序的要求等。（五）染毒方法（五）染毒方法NoImage 最常用的染毒途徑為最常用的染毒途徑為經口、經呼吸道、經口、經呼吸道、經皮及注射途徑。經皮及注射途徑。 吸收速率依次排列，一般是靜脈注射吸吸收速率依次排列，一般是靜脈注射吸入肌內注射腹腔注射皮下注射經入肌內注射腹腔注射皮下注射經口皮內注射經皮。口皮內注射經皮。NoImag

15、e1、經口（胃腸道）染毒、經口（胃腸道）染毒 灌胃灌胃 喂飼喂飼 吞咽膠囊吞咽膠囊 NoImage2、經呼吸道染毒、經呼吸道染毒 研究生產條件下以氣體、蒸氣、粉研究生產條件下以氣體、蒸氣、粉塵、煙、霧等形式存在于車間空氣塵、煙、霧等形式存在于車間空氣中的工業毒物，評價環境空氣污染中的工業毒物，評價環境空氣污染物，以吸入為給藥途徑的藥物，常物，以吸入為給藥途徑的藥物，常常采用經呼吸道染毒的途徑。常采用經呼吸道染毒的途徑。NoImage3、經皮膚染毒、經皮膚染毒 經皮膚染毒的方式：先使用化學經皮膚染毒的方式：先使用化學法脫毛（常用脫毛劑為硫化鋇加法脫毛（常用脫毛劑為硫化鋇加滑石粉滑石粉1：4或硫化

16、鈉加淀粉或硫化鈉加淀粉1：4）或機械法脫毛（剪剃去毛），將或機械法脫毛（剪剃去毛），將動物脊柱兩側背毛脫去，去毛面動物脊柱兩側背毛脫去，去毛面積常為體表面積的積常為體表面積的10。 局部涂敷受試物并以玻璃紙覆蓋局部涂敷受試物并以玻璃紙覆蓋固定一定時間接觸染毒。固定一定時間接觸染毒。NoImage4、經注射途徑染毒、經注射途徑染毒 對注射藥品或需作比較毒性觀察對注射藥品或需作比較毒性觀察的藥品進行急性毒性試驗時，須的藥品進行急性毒性試驗時，須作經注射途徑染毒。作經注射途徑染毒。 注射途徑可分為靜脈注射或滴注、注射途徑可分為靜脈注射或滴注、腹腔注射腹腔注射(ip)、肌內注射、肌內注射(im)、皮下

17、注射皮下注射(sc)、皮內注射、皮內注射(id)、椎、椎管內注射等。管內注射等。NoImage查閱文獻查閱文獻了解化學毒物的結構式、分子量、常溫常壓下的狀態、了解化學毒物的結構式、分子量、常溫常壓下的狀態、熔點、沸點、密度、閃點、揮發度、蒸氣壓、水溶性和脂熔點、沸點、密度、閃點、揮發度、蒸氣壓、水溶性和脂溶性等理化特性，生產批號及純度，雜質成分與含量等。溶性等理化特性，生產批號及純度，雜質成分與含量等。確定使用哪一種計算方法求確定使用哪一種計算方法求LD50，然后再設計劑量分組，然后再設計劑量分組。LD50的計算方法常用改良寇氏法、概率單位法、霍恩氏法的計算方法常用改良寇氏法、概率單位法、霍恩

18、氏法等。等。找出與受試化學毒物結構與理化性質近似的化學物的毒找出與受試化學毒物結構與理化性質近似的化學物的毒性資料，并以文獻資料中相同的動物種系和相同接觸途徑性資料，并以文獻資料中相同的動物種系和相同接觸途徑所測得的所測得的LD50(LC50)值作為受試化學物的預期毒性中值。值作為受試化學物的預期毒性中值。 NoImage一般來說，化學結構和性質比較近似的毒一般來說，化學結構和性質比較近似的毒物，毒性也比較近似。通過以上資料從而物，毒性也比較近似。通過以上資料從而對受試物毒力做出估計，以預期毒性劑量對受試物毒力做出估計，以預期毒性劑量設計預實驗方案。設計預實驗方案。每個劑量組間的組距可大些，以

19、便尋找出每個劑量組間的組距可大些，以便尋找出受試物的致死劑量范圍。受試物的致死劑量范圍。目的是找出目的是找出0及及100估計致死量。更確估計致死量。更確切地說是找到一個切地說是找到一個0死亡的最大劑量和死亡的最大劑量和100死亡的最小劑量的估值以決定實驗中采死亡的最小劑量的估值以決定實驗中采用的最大劑量用的最大劑量(Dm)和最小劑量和最小劑量(Dn)，這在，這在測定中非常重要，是實驗成敗的關鍵。測定中非常重要，是實驗成敗的關鍵。預試驗預試驗NoImage預試驗預試驗設定以此預期值作為待測化學物的中間劑量組，設定以此預期值作為待測化學物的中間劑量組，并在該劑量的上下各設計并在該劑量的上下各設計l

20、2個劑量組作為預試驗劑個劑量組作為預試驗劑量；量；根據確定的劑量組進行染毒；根據確定的劑量組進行染毒；根據預試驗的死亡資料確定組距。根據預試驗的死亡資料確定組距。可根據以下公式計算出劑量分組：可根據以下公式計算出劑量分組： i=(lgLD90-lgLD10)(n-1) 或：或： i=(lgLD100-lgLD0)(n-1)公式中公式中i為組距為組距(相鄰的兩個劑量組對數劑量之差相鄰的兩個劑量組對數劑量之差)；n為設計的劑量組數。為設計的劑量組數。一般來說、根據試驗設計所選用的一般來說、根據試驗設計所選用的LD50計算方法來確計算方法來確定組數。例如寇氏法、幾率單位法一般設定組數。例如寇氏法、幾

21、率單位法一般設610個劑個劑量組；霍恩法固定設量組；霍恩法固定設4個劑量組。求得個劑量組。求得i值后，以最低值后，以最低劑量組劑量組(LD0或或LD10)的對數劑量加上一個的對數劑量加上一個i值，即是第值，即是第二個劑量組的對數劑量，依此類推直至最高劑量組，二個劑量組的對數劑量，依此類推直至最高劑量組，查各自的反對數即得出各組劑量的真實值。查各自的反對數即得出各組劑量的真實值。123456LgLD0LgLD0+iLgLD0+2i LgLD0+3iLgLD0+4i正式試驗正式試驗NoImage對未知毒性的化學物，估計毒性較低時，預試驗也對未知毒性的化學物，估計毒性較低時，預試驗也可以可以5g/k

22、g劑量進行摸索，來決定是否需正式求劑量進行摸索，來決定是否需正式求LD50。一般來說，化學物。一般來說，化學物LD50如大于如大于5g/kg已表明已表明毒性不大。毒性不大。 我國藥品的毒理研究指導原則規定要以最大容積最我國藥品的毒理研究指導原則規定要以最大容積最高濃度給予動物后未見死亡，方可不進一步試驗求高濃度給予動物后未見死亡，方可不進一步試驗求出出LD50值。值。 急性毒性試驗除設立幾個劑量組外，是否設正常和急性毒性試驗除設立幾個劑量組外，是否設正常和溶劑對照組，根據需要確定。溶劑對照組，根據需要確定。NoImage急性毒性試驗一般是以死亡為主要記錄內容。急性毒性試驗一般是以死亡為主要記錄

23、內容。除此之外還要注意：除此之外還要注意： 中毒體征及發生過程；中毒體征及發生過程； 死亡情況和時間分布；死亡情況和時間分布； 體重體重 病理形態學變化。病理形態學變化。NoImage1、中毒體征及發生過程、中毒體征及發生過程 應詳細觀察和記錄動物出現的中毒體征、應詳細觀察和記錄動物出現的中毒體征、發生時間和體征發展的經過。發生時間和體征發展的經過。 機體對毒物作用的反應可以表現出各個機體對毒物作用的反應可以表現出各個系統的特征。系統的特征。NoImageNoImage2、死亡情況和時間分布、死亡情況和時間分布 急性毒性試驗中實驗動物的死亡數是計算急性毒性試驗中實驗動物的死亡數是計算LD50值

24、的依據，動物死亡數量每增加或減少值的依據，動物死亡數量每增加或減少一只都會對一只都會對LD50值產生明顯影響，因此應認值產生明顯影響，因此應認真觀察和記錄。真觀察和記錄。 分析中毒死亡時間的分布規律，也可以提供分析中毒死亡時間的分布規律，也可以提供重要信息。重要信息。 NoImage3、體重、體重 實驗動物體重變化指標，可以反映動物中毒后實驗動物體重變化指標，可以反映動物中毒后綜合性整體變化，是一個比較客觀簡便的量化綜合性整體變化，是一個比較客觀簡便的量化指標。指標。 因此在觀察實驗動物中毒體征的同時，對存活因此在觀察實驗動物中毒體征的同時，對存活動物應定期多次稱量動物的體重變化，一般為動物應

25、定期多次稱量動物的體重變化，一般為每周每周1次或次或2次。次。NoImage體重可以反映動物中毒后的整體變化。體重可以反映動物中毒后的整體變化。對存活動物尤其是對低于對存活動物尤其是對低于LD50劑量組的存活動物。劑量組的存活動物。應在觀察期應在觀察期28天內稱量其體重的變化天內稱量其體重的變化,以便了解受以便了解受試物引起毒效應的持續時間。試物引起毒效應的持續時間。NoImage4、病理檢查、病理檢查 對死亡動物應及時進行大體解剖，肉眼觀察大體對死亡動物應及時進行大體解剖，肉眼觀察大體病理變化，如臟器外觀、大小、色澤的變化，有病理變化，如臟器外觀、大小、色澤的變化，有無充血、出血、水腫或其他

26、改變，如有改變須取無充血、出血、水腫或其他改變，如有改變須取材作組織病理學檢查。材作組織病理學檢查。 對存活動物在觀察期結束時亦應進行解剖檢查，對存活動物在觀察期結束時亦應進行解剖檢查，必要時做組織病理學檢查。必要時做組織病理學檢查。NoImage高劑量組動物染毒后常在數分鐘或數十分鐘高劑量組動物染毒后常在數分鐘或數十分鐘內出現死亡，染毒以后應即刻開始觀察動物內出現死亡，染毒以后應即刻開始觀察動物的中毒表現和死亡情況。的中毒表現和死亡情況。 給藥當天應連續或多次觀察，以后可根據情給藥當天應連續或多次觀察，以后可根據情況，每天況，每天2次或多次觀察直到試驗周期結束。次或多次觀察直到試驗周期結束。

27、 急性毒性試驗觀察周期一般為急性毒性試驗觀察周期一般為7-28天天。NoImage改良寇氏法（改良寇氏法（Karber）霍恩氏法（霍恩氏法（Horn）威爾氏法（威爾氏法（Weil）概率單位法概率單位法其他計算方法其他計算方法（九）（九）LD50的計算方法的計算方法NoImagel l NoImagel l NoImageNoImageLD50標志著一個化合物毒性的大小，所以常用作急性毒性分級。毒性大小于LD50值成反比，LD50越小，毒性越大，反之，毒性越小。除了LD50以外，還應當報告LD50 95%可信限范圍、急性毒作用帶等指標，并盡可能詳盡描述中毒特征、癥狀表現、出現時間、死亡前兆、毒性

28、作用的發生、發展、恢復經過，以及體重、剖檢和病理學變化等。從而全面的對急性毒性做出評價。NoImage五、經典急性毒性試驗的局限性五、經典急性毒性試驗的局限性1.消耗的動物量大2.獲得的信息有限3.測得的LD50僅僅是一個近似值4.在安全性評價中僅評價動物死亡和簡單的癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學、血液學及其它化驗檢查所提供的深入細致的毒性信息。NoImage一、基本概念一、基本概念二、試驗目的二、試驗目的 三、亞慢性毒性試驗設計及其評價三、亞慢性毒性試驗設計及其評價第二節第二節 亞慢性毒性作用及其試驗與亞慢性毒性作用及其試驗與評價方法評價方法NoImage 亞慢性毒性作用是指試驗動物連續

29、多日接亞慢性毒性作用是指試驗動物連續多日接觸較大劑量的外來化學物所出現的中毒效應。觸較大劑量的外來化學物所出現的中毒效應。 試驗染毒期限應為試驗染毒期限應為36個月，或一般為實個月，或一般為實驗動物生命期的驗動物生命期的1/101/30。 如用小鼠，試驗期通常為如用小鼠，試驗期通常為3個月，大鼠個月，大鼠36個月，狗個月，狗412個月。個月。 NoImage（1）進一步探索受試物的毒作用特點和靶器官；）進一步探索受試物的毒作用特點和靶器官；（2）了解受試物有無蓄積作用，是否產生耐受性；）了解受試物有無蓄積作用，是否產生耐受性；（3）分析受試物的劑量）分析受試物的劑量-效應關系；效應關系；（4）

30、初步估計不出現毒性作用的最大耐受劑量）初步估計不出現毒性作用的最大耐受劑量（NOEL或或NOAEL）和出現毒性的最小有作用劑量）和出現毒性的最小有作用劑量（MED）；）；（5）為慢性毒性試驗的劑量設計和觀察指標提供依據；）為慢性毒性試驗的劑量設計和觀察指標提供依據；（6）為受試物的毒理機制提供基礎資料。）為受試物的毒理機制提供基礎資料。NoImage在遺傳毒理學及一些前期的試驗難以做出明確評在遺傳毒理學及一些前期的試驗難以做出明確評價時需要進行亞慢性毒性試驗。價時需要進行亞慢性毒性試驗。 根據前期的試驗結果來設計亞慢性毒性試驗，其根據前期的試驗結果來設計亞慢性毒性試驗，其試驗的周期從幾個月到一

31、年不等。試驗的周期從幾個月到一年不等。 在整個亞慢性試驗期間，動物均應攝食試驗飼料。在整個亞慢性試驗期間，動物均應攝食試驗飼料。受試物可摻入飼料中，也可摻入飲水中。不得巳受試物可摻入飼料中，也可摻入飲水中。不得巳時可采用灌胃法進行。時可采用灌胃法進行。NoImage1、實驗動物的選擇、實驗動物的選擇 （l）物種和品系）物種和品系 一般要求兩種實驗動物，一種是嚙齒類，一種是非一般要求兩種實驗動物，一種是嚙齒類，一種是非嚙齒類，以便全面地了解受試物的毒性。嚙齒類，以便全面地了解受試物的毒性。 基本上均使用大鼠和犬，有時用猴，這取決于受試基本上均使用大鼠和犬，有時用猴，這取決于受試物的重要性和試驗條

32、件。亞慢性經皮毒性試驗，可物的重要性和試驗條件。亞慢性經皮毒性試驗，可用兔或豚鼠。用兔或豚鼠。 大鼠常用大鼠常用Wistar和和Sprague-Dawley。 犬的亞慢性毒性試驗多使用犬的亞慢性毒性試驗多使用Beagle犬。犬。NoImage（2）性別、年齡和動物數）性別、年齡和動物數 性別：一般每組雌雄各半；性別：一般每組雌雄各半； 年齡：剛斷乳不就得動物年齡：剛斷乳不就得動物大鼠大鼠68周齡（體重周齡（體重80100g） 動物數：大鼠、小鼠每組不少于動物數：大鼠、小鼠每組不少于20只；只； 犬、猴每組不少于犬、猴每組不少于6只。只。NoImage（3）微生物學寄生蟲學等級和飼養環境：）微生

33、物學寄生蟲學等級和飼養環境： 亞慢性毒性試驗周期較長，觀察指標較多，實驗動亞慢性毒性試驗周期較長，觀察指標較多，實驗動物的質量、喂飼條件和試驗環境明顯影響受試物的物的質量、喂飼條件和試驗環境明顯影響受試物的毒性反應。毒性反應。 實驗動物分四級：普通級、清潔級、無特定病原體實驗動物分四級：普通級、清潔級、無特定病原體級（級（SPF級）、無菌級。級）、無菌級。 犬和猴分為普通級和犬和猴分為普通級和SPF兩級。兩級。 亞慢性毒性試驗，應使用清潔級及以上等級大小鼠，亞慢性毒性試驗，應使用清潔級及以上等級大小鼠，并飼養在屏障環境內進行試驗。并飼養在屏障環境內進行試驗。NoImage2、染毒方式、染毒方式

34、 一是應當盡量選擇和人類接觸途徑相似的方式；一是應當盡量選擇和人類接觸途徑相似的方式； 二是應當與預期進行的慢性毒作用研究的接觸途徑二是應當與預期進行的慢性毒作用研究的接觸途徑相一致。相一致。 一般以經口、經呼吸道和經皮染毒為多。一般以經口、經呼吸道和經皮染毒為多。 染毒頻率通常每日一次，連續給予，如試驗期為染毒頻率通常每日一次，連續給予，如試驗期為3個月或超過個月或超過3個月時，也可每周個月時，也可每周6次。次。NoImage3、染毒途徑、染毒途徑 （l）經口染毒：灌胃法、喂飼法、膠囊法。）經口染毒：灌胃法、喂飼法、膠囊法。 （2）經呼吸道染毒：）經呼吸道染毒： （3）注射：）注射： （4）

35、特殊途徑：）特殊途徑： （5）在進行亞慢性毒性試驗時，最好結合進行）在進行亞慢性毒性試驗時，最好結合進行毒代動力學血藥濃度的監測。毒代動力學血藥濃度的監測。NoImage4、劑量選擇和分組、劑量選擇和分組 一般至少應設一般至少應設3個劑量組和個劑量組和1個陰性（溶劑）對照個陰性（溶劑）對照組。組。陰性對照組陰性對照組低劑量組低劑量組中劑量組中劑量組高劑量組高劑量組組距：組距：310倍，最低不小于倍，最低不小于2倍倍高劑量組應能引起明顯的毒性或少量動物的死高劑量組應能引起明顯的毒性或少量動物的死亡（少于亡（少于10%）。）。低劑量組應無中毒反應，相當于未觀察到有害低劑量組應無中毒反應，相當于未觀

36、察到有害作用劑量（作用劑量（NOAEL）。）。高低劑量組間設置高低劑量組間設置1個中劑量組，比較理想的個中劑量組，比較理想的中劑量組約相當于觀察到有害作用的最低劑量中劑量組約相當于觀察到有害作用的最低劑量（LOAEL）。）。NoImage原則是，盡量控制在受試動物在整個試驗期既不原則是，盡量控制在受試動物在整個試驗期既不發生死亡，又有明顯毒性反應。發生死亡，又有明顯毒性反應。 各組劑量設計的依據：各組劑量設計的依據： 高劑量組：以急性毒性的閾劑量作為亞慢性高劑量組：以急性毒性的閾劑量作為亞慢性毒性試驗的最高劑量。毒性試驗的最高劑量。 或以該受試物或以該受試物LD50的的1/201/5作為最高劑

37、量作為最高劑量 一般在一般在LD50的的1/101/50之間按等比級數設計之間按等比級數設計其它各組。其它各組。4. 觀察指標1234（1）一般性指標）一般性指標包括每日采食量、體重變化（定期稱量）、包括每日采食量、體重變化（定期稱量）、外觀特征（被毛光澤、精神狀態、呼吸動作、外觀特征（被毛光澤、精神狀態、呼吸動作、分泌物、排泄物、飲食、活動、行為等）、分泌物、排泄物、飲食、活動、行為等）、異常表現和中毒癥狀等。異常表現和中毒癥狀等。（2）實驗室檢查：）實驗室檢查：NoImagel）血液學檢查）血液學檢查 2）血液生化檢查）血液生化檢查 通常為通常為血清血清天門冬氨酸氨基轉移酶（天門冬氨酸氨基

38、轉移酶（AST）、丙氨）、丙氨酸氨基轉移酶（酸氨基轉移酶（ALT）、堿性磷酸酶（）、堿性磷酸酶（ALP）、尿）、尿素氮（素氮（BUN）、總蛋白（）、總蛋白（TP）、清蛋白（）、清蛋白（ALB）、）、血糖（血糖（GLU）、總膽紅素（）、總膽紅素（T-BIL）、肌酐）、肌酐（Crea）、總膽固醇（）、總膽固醇（T-CHO）等。）等。 尿液尿液檢查包括外觀、檢查包括外觀、pH值、蛋白、糖、潛血和沉值、蛋白、糖、潛血和沉淀物鏡檢等，可提供與毒物有關的靶器官毒性和中淀物鏡檢等，可提供與毒物有關的靶器官毒性和中間代謝產物的信息。間代謝產物的信息。NoImage（3）系統尸解和組織病理學檢查）系統尸解和組織

39、病理學檢查l）臟器重量和臟器系數：一般稱取心、肝、脾、）臟器重量和臟器系數：一般稱取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、卵巢或睪丸、腦等臟器濕重，肺、腎、腎上腺、卵巢或睪丸、腦等臟器濕重，并計算其臟器系數。并計算其臟器系數。 2）病理學檢查：目的是確定化學毒物對機體毒作）病理學檢查：目的是確定化學毒物對機體毒作用的靶部位、損害的性質和程度。用的靶部位、損害的性質和程度。 病理學檢查包括：大體檢查、常規組織病理學檢病理學檢查包括：大體檢查、常規組織病理學檢查、酶組織化學檢查、免疫組織化學檢查、細胞查、酶組織化學檢查、免疫組織化學檢查、細胞超微結構檢查等，超微結構檢查等，NoImage分子生物學和分子免疫

40、學手段可應用于測分子生物學和分子免疫學手段可應用于測定許多具有毒理學意義的指標。定許多具有毒理學意義的指標。活性氧增加、細胞凋亡、免疫功能異常活性氧增加、細胞凋亡、免疫功能異常選擇相關指標進行測定，有利于探討有害選擇相關指標進行測定，有利于探討有害作用的機理和對安全性的評價。作用的機理和對安全性的評價。NoImage（5）分析劑量）分析劑量-效應關系效應關系生物體產生的某種效應只有與其接觸的化學物劑量之間呈現相關關系，才能確定此種效應是該接觸物引起的。否則，可能另有原因。對于進一步的毒理學試驗觀察指標的選擇和毒理機制的研究具有一定的指導意義。NoImage心電圖、血壓、眼底檢測；心電圖、血壓、

41、眼底檢測； 對神經系統有影響，可進行神經行為、神經反對神經系統有影響，可進行神經行為、神經反射等檢查；射等檢查； 對電解質、微量元素代謝有毒作用，則檢測血對電解質、微量元素代謝有毒作用，則檢測血鈣、血磷等含量；鈣、血磷等含量； 還可增加眼科、骨髓象檢查等。還可增加眼科、骨髓象檢查等。NoImage亞慢性毒性作用評價：亞慢性毒性作用評價： 如某物質的亞慢性毒性無作用劑量小于或等于人如某物質的亞慢性毒性無作用劑量小于或等于人的可能攝入量的的可能攝入量的100倍，則表示毒性很強，應放倍，則表示毒性很強，應放棄該化學物的使用：棄該化學物的使用： 在在100300倍之間者，可進行慢性毒性試驗；倍之間者，

42、可進行慢性毒性試驗； 若大于或等于若大于或等于300倍者則不必進行慢性試驗，可倍者則不必進行慢性試驗，可直接進行毒性評價。直接進行毒性評價。第三節第三節 蓄積毒性作用蓄積毒性作用 一、蓄積毒性作用的基本概念一、蓄積毒性作用的基本概念 二、蓄積作用的研究方法二、蓄積作用的研究方法 一、基本概念一、基本概念 多次間隔給予小劑量受試物，多次間隔給予小劑量受試物，當給予受試物的時間間隔和劑量當給予受試物的時間間隔和劑量超過機體的解毒和排泄能力時，超過機體的解毒和排泄能力時，導致受試物在體內蓄積，由此引導致受試物在體內蓄積，由此引起的毒性作用稱為蓄積性毒性作起的毒性作用稱為蓄積性毒性作用。用。（二）目的

43、：（二）目的： 1. 了解受試物是否具有蓄積作用及蓄積性大小了解受試物是否具有蓄積作用及蓄積性大小如何如何; 2. 評定該化合物是否可引起潛在的慢性毒性危評定該化合物是否可引起潛在的慢性毒性危害害; 3. 為制訂該物質在食品中的衛生限量標準時為制訂該物質在食品中的衛生限量標準時,安安全系數的選擇提供依據。全系數的選擇提供依據。 4. 確定該受試物是否可以用于食品供人類長期確定該受試物是否可以用于食品供人類長期食用。食用。物質蓄積物質蓄積：是指機體少量反復多次接觸毒物后，該：是指機體少量反復多次接觸毒物后，該毒物在機體內逐漸積累。可以用一定的分析方法檢毒物在機體內逐漸積累。可以用一定的分析方法檢

44、測出體內該物質或其代謝產物在體內的增加過程，測出體內該物質或其代謝產物在體內的增加過程，這種累計隨著時間延長而含量增加，當達到中毒閾這種累計隨著時間延長而含量增加，當達到中毒閾值時而產生毒性作用。值時而產生毒性作用。功能蓄積功能蓄積：是指機體少量反復多次接觸化學毒物或：是指機體少量反復多次接觸化學毒物或其他形式的危害物，每次引起的輕微功能損害逐漸其他形式的危害物，每次引起的輕微功能損害逐漸積累，當積累到一定程度時出現毒性效應，而這時積累，當積累到一定程度時出現毒性效應，而這時用檢測手段卻查不出體內毒物的的存在或增加。用檢測手段卻查不出體內毒物的的存在或增加。蓄積毒性作用產生的因素（1）與接觸劑

45、量大小和時間間隔有關）與接觸劑量大小和時間間隔有關（2）與毒物本身的性質有關）與毒物本身的性質有關脂溶性物質脂溶性物質 水溶性物質水溶性物質貯存庫：如血漿蛋白、脂肪組織、肝臟、貯存庫：如血漿蛋白、脂肪組織、肝臟、腎臟、骨骼等是某些毒物的常見貯存庫。腎臟、骨骼等是某些毒物的常見貯存庫。（3）與動物種屬的代謝特點有關）與動物種屬的代謝特點有關NoImage二、蓄積作用的研究方法二、蓄積作用的研究方法 蓄積毒性作用的研究方法有多種，蓄積毒性作用的研究方法有多種，常用方法有常用方法有蓄積系數法和生物半減期蓄積系數法和生物半減期法法。一、慢性毒性的概念一、慢性毒性的概念 二、慢性毒性試驗的目的二、慢性毒

46、性試驗的目的 三、慢性毒性試驗方法要點三、慢性毒性試驗方法要點 四、慢性毒件試驗的注意事項四、慢性毒件試驗的注意事項第四節第四節 慢性毒性試驗設計慢性毒性試驗設計 NoImage一、慢性毒性的概念一、慢性毒性的概念 是指實驗動物或人長期（甚至終生）反復接觸外源化是指實驗動物或人長期（甚至終生）反復接觸外源化學物所產生的毒性效應。學物所產生的毒性效應。 所謂所謂“長期長期”，一般是指，一般是指2年。年。 對大鼠相當于終生染毒，對兔相當于生命期的對大鼠相當于終生染毒，對兔相當于生命期的36%，對犬為對犬為20%，對猴為，對猴為13。對于有些遠期毒性評價，。對于有些遠期毒性評價，試驗期要求達到試驗期

47、要求達到710年，甚至在有些動物上要包括若年，甚至在有些動物上要包括若干代試驗。干代試驗。NoImage1、研究慢性毒性劑量、研究慢性毒性劑量-反應（效應）關系。反應（效應）關系。 確定長期接觸造成有害作用的最低劑量（確定長期接觸造成有害作用的最低劑量（LOAEL)或閾劑量和未造成有害作用的劑量（或閾劑量和未造成有害作用的劑量（NOAEL)；2、為制定外來化學物質在食品中的安全限量，如、為制定外來化學物質在食品中的安全限量，如人體每日容許攝入量人體每日容許攝入量 ADI值，最高殘留限量值，最高殘留限量MRL值，以及為危險度評價與管理提供毒理學依據；值，以及為危險度評價與管理提供毒理學依據；3、觀察慢性毒性效應譜、毒作用特點和毒作用靶、觀察慢性毒性效應譜、毒作用特點和毒作用靶器官，為毒性機制研究和將毒性結果外推到人提供器官，為毒性機制研究和將毒性結果外推到人提供依據。依據。二、慢性毒性試驗的目的二、慢性毒性試驗的目