1、實(shí)驗(yàn)四、血小板計數(shù)實(shí)驗(yàn)四、血小板計數(shù) 叢叢 輝輝1;.u 血小板（血小板（platelet，PLT）是由骨髓造血組織中的巨核細(xì)胞產(chǎn)生，具有維持血）是由骨髓造血組織中的巨核細(xì)胞產(chǎn)生，具有維持血管內(nèi)皮完整性以及黏附、聚集、釋放、促凝和血塊收縮等功能。管內(nèi)皮完整性以及黏附、聚集、釋放、促凝和血塊收縮等功能。u 血小板計數(shù)是止血、凝血檢查最常用的篩檢試驗(yàn)之一。血小板計數(shù)是止血、凝血檢查最常用的篩檢試驗(yàn)之一。u 血小板計數(shù)（血小板計數(shù)（PLT）是測定單位容積的血液中血小板的數(shù)量。）是測定單位容積的血液中血小板的數(shù)量。 血小板特點(diǎn)血小板特點(diǎn) 2;.血小板形態(tài)檢查血小板形態(tài)檢查 在血涂片上血小板往往散在或成

2、在血涂片上血小板往往散在或成簇分布，多為圓形、橢圓形或略欠規(guī)則簇分布，多為圓形、橢圓形或略欠規(guī)則形；胞質(zhì)呈淡藍(lán)或淡紅色，有細(xì)小、分形；胞質(zhì)呈淡藍(lán)或淡紅色，有細(xì)小、分布均勻而相聚或分散于胞質(zhì)中的紫紅色布均勻而相聚或分散于胞質(zhì)中的紫紅色顆粒。顆粒。正常血小板形態(tài)：正常血小板形態(tài)： 正常血小板呈兩面微凸的圓盤狀，直徑約正常血小板呈兩面微凸的圓盤狀，直徑約1.53m，新生血小板體積，新生血小板體積大，成熟者體積小。大，成熟者體積小。3;.異常血小板形態(tài)：異常血小板形態(tài)： 1大小異常大小異常 血小板可出現(xiàn)明顯的大小不均變化。血小板可出現(xiàn)明顯的大小不均變化。 （1）大血小板：直徑為）大血小板：直徑為47m

3、，巨型血小板直徑大于，巨型血小板直徑大于7m，常為，常為720m，也可大于，也可大于20m，胞質(zhì)中嗜天青顆粒細(xì)小或融合為大顆粒。，胞質(zhì)中嗜天青顆粒細(xì)小或融合為大顆粒。 主要見于主要見于ITP、粒細(xì)胞白血病、血、粒細(xì)胞白血病、血小板無力癥、巨大血小板綜合征、小板無力癥、巨大血小板綜合征、MDS和脾切除后等。和脾切除后等。血小板形態(tài)檢查血小板形態(tài)檢查 4;. （2）小血小板：直徑小于）小血小板：直徑小于1.5m，主要見于缺鐵性貧血、再生障礙性貧，主要見于缺鐵性貧血、再生障礙性貧血、血、ITP等。等。 2形態(tài)異常形態(tài)異常 血小板可以出現(xiàn)桿狀、逗點(diǎn)狀、蝌蚪狀、蛇形和絲狀突起血小板可以出現(xiàn)桿狀、逗點(diǎn)狀、

4、蝌蚪狀、蛇形和絲狀突起等異常形態(tài)，健康人偶見（少于等異常形態(tài)，健康人偶見（少于2%）。）。 影響血小板形狀改變的因素很多，各影響血小板形狀改變的因素很多，各種形態(tài)異常又無特異性。因此，不規(guī)則和種形態(tài)異常又無特異性。因此，不規(guī)則和畸形的血小板比值超過畸形的血小板比值超過10%時才有臨床意時才有臨床意義。義。血小板形態(tài)檢查血小板形態(tài)檢查 5;. 3聚集性和分布異常聚集性和分布異常 血小板聚集、分布狀態(tài)可間接反映其功能。聚集功血小板聚集、分布狀態(tài)可間接反映其功能。聚集功能正常的血小板在非抗凝血的外周血涂片中?？梢娔苷５难“逶诜强鼓耐庵苎科谐？梢?5個聚集成簇或成團(tuán)，聚個聚集成簇或成團(tuán)，聚

5、集與散在血小板之比為集與散在血小板之比為20 1。 在在EDTA抗凝血的血涂片中，可見抗凝血的血涂片中，可見血小板不聚集而呈散在分布狀態(tài)或出現(xiàn)血小板不聚集而呈散在分布狀態(tài)或出現(xiàn)誘發(fā)的血小板聚集現(xiàn)象。誘發(fā)的血小板聚集現(xiàn)象。6;. （1）血小板衛(wèi)星現(xiàn)象：血小板黏附、圍繞于中性粒細(xì)胞周圍（或偶爾黏附于）血小板衛(wèi)星現(xiàn)象：血小板黏附、圍繞于中性粒細(xì)胞周圍（或偶爾黏附于單核細(xì)胞）的現(xiàn)象，有時可見血小板吞噬現(xiàn)象。此時，血小板和中性粒細(xì)胞形態(tài)單核細(xì)胞）的現(xiàn)象，有時可見血小板吞噬現(xiàn)象。此時，血小板和中性粒細(xì)胞形態(tài)和功能均正常。血小板衛(wèi)星現(xiàn)象偶見于和功能均正常。血小板衛(wèi)星現(xiàn)象偶見于EDTA抗凝血。抗凝血。 因因E

6、DTA和免疫球蛋白相互作用、和免疫球蛋白相互作用、非特異性結(jié)合血小板之故，被抗體包被非特異性結(jié)合血小板之故，被抗體包被的血小板與中性粒細(xì)胞結(jié)合。血小板衛(wèi)的血小板與中性粒細(xì)胞結(jié)合。血小板衛(wèi)星現(xiàn)象是血液分析儀血小板計數(shù)假性減星現(xiàn)象是血液分析儀血小板計數(shù)假性減少的原因之一（血小板被誤計為白細(xì)少的原因之一（血小板被誤計為白細(xì)胞）。胞）。7;. （2）血小板片狀聚集：原發(fā)性血）血小板片狀聚集：原發(fā)性血小板增多癥和血小板增多的慢性粒細(xì)小板增多癥和血小板增多的慢性粒細(xì)胞白血病，血小板可呈大片聚集（圖胞白血病，血小板可呈大片聚集（圖2-57）。）。 （3）血小板減少：再生障礙性貧血和）血小板減少：再生障礙性貧

7、血和ITP因血小板數(shù)量少，血小板聚因血小板數(shù)量少，血小板聚集成團(tuán)的情況明顯減少。集成團(tuán)的情況明顯減少。 （4）血小板功能異常：血小板無力癥時血小板無聚集功能，且散在分）血小板功能異常：血小板無力癥時血小板無聚集功能，且散在分布，不出現(xiàn)聚集成團(tuán)的現(xiàn)象。布，不出現(xiàn)聚集成團(tuán)的現(xiàn)象。8;. 血小板計數(shù)血小板計數(shù)9;.血小板計數(shù)方法血小板計數(shù)方法10;.血小板計數(shù)方法學(xué)評價血小板計數(shù)方法學(xué)評價11;.血小板計數(shù)原理血小板計數(shù)原理 血液經(jīng)血小板稀釋液稀釋后，紅細(xì)胞被溶解，注入計數(shù)池后，在顯微鏡血液經(jīng)血小板稀釋液稀釋后，紅細(xì)胞被溶解，注入計數(shù)池后，在顯微鏡下計數(shù)血小板。經(jīng)換算求出每升血液中的血小板數(shù)。下計數(shù)

8、血小板。經(jīng)換算求出每升血液中的血小板數(shù)。12;. 試劑器材試劑器材 試劑試劑 草酸銨稀釋液草酸銨稀釋液 草酸銨草酸銨10克克 EDTA0.12克克 蒸餾水加至蒸餾水加至1000ml，過濾后，過濾后 備用。備用。 13;.試劑器材試劑器材器材 改良牛鮑計數(shù)板改良牛鮑計數(shù)板采血針采血針 微量吸管微量吸管顯微鏡顯微鏡14;.操作步驟 吸取血小板稀釋液吸取血小板稀釋液0.38ml于康氏試管中。于康氏試管中。 用一次性微量吸管吸血用一次性微量吸管吸血20ul于上述稀釋液中。充分混于上述稀釋液中。充分混 勻后取一小滴于血球計數(shù)池內(nèi)，靜止勻后取一小滴于血球計數(shù)池內(nèi)，靜止10-15分鐘分鐘. 用低倍鏡或高倍鏡

9、計數(shù)中央大方格中五個中方格內(nèi)之用低倍鏡或高倍鏡計數(shù)中央大方格中五個中方格內(nèi)之 血小板數(shù)。血小板數(shù)。15;.計算按下列公式計算血小板數(shù) 6910201055/10個中方格內(nèi)的血小板數(shù)LX 參考值 （100-300）109/L16;. 質(zhì)量控制質(zhì)量控制有少數(shù)患者可能紅細(xì)胞溶解不完全。有少數(shù)患者可能紅細(xì)胞溶解不完全。稀釋液可放室溫使用，但應(yīng)密閉以防灰尖及水份蒸發(fā)，最好放冰箱保存為妥。稀釋液可放室溫使用，但應(yīng)密閉以防灰尖及水份蒸發(fā)，最好放冰箱保存為妥。采血時，如同時做采血時，如同時做WBCWBC等，應(yīng)先采血做血小板。等，應(yīng)先采血做血小板。懸液制備，充分混勻，搖動標(biāo)本懸液制備，充分混勻，搖動標(biāo)本2min

10、2min或或200200次以上。次以上。計數(shù)時應(yīng)等待充液靜止計數(shù)時應(yīng)等待充液靜止10-15min10-15min后方可計數(shù)，時間過短因血小板尚未下沉，后方可計數(shù)，時間過短因血小板尚未下沉，使計數(shù)結(jié)果偏低，但時間不宜放置過長，否則出現(xiàn)顆粒沉淀物，使計數(shù)無法使計數(shù)結(jié)果偏低，但時間不宜放置過長，否則出現(xiàn)顆粒沉淀物，使計數(shù)無法進(jìn)行。進(jìn)行。血小板在鏡下為富于折光之小點(diǎn)，約為紅細(xì)胞的血小板在鏡下為富于折光之小點(diǎn)，約為紅細(xì)胞的1/21/21/3大小。大小。計數(shù)光線不可太強(qiáng)，計數(shù)光線不可太強(qiáng)，1h1h內(nèi)計數(shù)完成。如紅細(xì)胞不完全溶解，影響血小板計數(shù)內(nèi)計數(shù)完成。如紅細(xì)胞不完全溶解，影響血小板計數(shù)時，可加大稀釋倍數(shù)

11、，或另換稀釋液。時，可加大稀釋倍數(shù)，或另換稀釋液。 17;. 血小板減少是引起出血的常見原因血小板減少是引起出血的常見原因 2050109/L時，可有輕度出血或手術(shù)后出血；時，可有輕度出血或手術(shù)后出血；20109/L，可有較嚴(yán)重的出血；，可有較嚴(yán)重的出血；400109/L為血小板增多為血小板增多 臨床意義18;.毛細(xì)血管采血標(biāo)準(zhǔn)操作程序 操作步驟操作步驟u采血部位成人以左手無名指內(nèi)側(cè)為宜，半歲以下嬰幼兒通常自拇指采血部位成人以左手無名指內(nèi)側(cè)為宜，半歲以下嬰幼兒通常自拇指 內(nèi)側(cè)或足跟兩側(cè)采血。內(nèi)側(cè)或足跟兩側(cè)采血。u輕輕按摩采血部位。輕輕按摩采血部位。u用洗必泰碘棉簽消毒局部皮膚、待干。用洗必泰碘棉簽消毒局部皮膚、待干。？u緊捏刺血部位，使其自然充血。緊捏刺血部位，使其自然充血。u用無菌刺針穿刺取血，動作應(yīng)迅速，深度用無菌刺針穿刺取血，動作應(yīng)迅速，深度23mm，稍加擠壓以血液流，稍加擠壓以血液流 出為宜。出為宜。u用干棉球擦去第一滴血。用干棉球擦去第一滴血。？u按需要依次采血。按需要依次采血。u采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。采血完畢，用干棉球壓住傷口，止血片刻。19;.質(zhì)量保證u除特殊情況外，不要在耳垂采血。若在耳垂采血應(yīng)避開凍瘡、炎癥、水腫等部位。u皮膚消毒，