1、細(xì)菌的培養(yǎng)與分離技術(shù)細(xì)菌的培養(yǎng)與分離技術(shù)培養(yǎng)基培養(yǎng)基 常用玻璃器材的準(zhǔn)備常用玻璃器材的準(zhǔn)備 培養(yǎng)基的成分和作用培養(yǎng)基的成分和作用 培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類 培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備常用玻璃器材的準(zhǔn)備常用玻璃器材的準(zhǔn)備 玻璃器材的種類及用途玻璃器材的種類及用途 玻璃器材的清洗玻璃器材的清洗新購置的玻璃器材：新購置的玻璃器材：12鹽酸浸泡鹽酸浸泡清清水清洗水清洗用過的無污染器皿：洗滌劑洗刷用過的無污染器皿：洗滌劑洗刷清水清洗清水清洗 細(xì)菌污染的器材：消毒滅菌后再洗刷細(xì)菌污染的器材：消毒滅菌后再洗刷盛培養(yǎng)基試管和平皿：高壓滅菌盛培養(yǎng)基試管和平皿：高壓滅菌趁熱倒出趁熱倒出洗滌劑洗刷洗滌劑洗刷清水沖洗清

2、水沖洗吸管：吸管：3來蘇浸泡來蘇浸泡清水沖洗清水沖洗玻片和蓋玻片：玻片和蓋玻片：3來蘇和清潔液浸泡來蘇和清潔液浸泡清水清水沖洗；染色后的玻片，應(yīng)肥皂水煮沸沖洗；染色后的玻片，應(yīng)肥皂水煮沸10min再洗再洗滌滌含油脂的器皿：單獨滅菌含油脂的器皿：單獨滅菌玻璃器皿滅菌前的準(zhǔn)備玻璃器皿滅菌前的準(zhǔn)備 玻璃器皿在清洗、干燥后必須經(jīng)正確的玻璃器皿在清洗、干燥后必須經(jīng)正確的包裹和加塞后才能進(jìn)行滅菌處理。包裹和加塞后才能進(jìn)行滅菌處理。培養(yǎng)基的成分和作用培養(yǎng)基的成分和作用 培養(yǎng)基：是指人工配制的適合細(xì)菌生長繁殖的培養(yǎng)基：是指人工配制的適合細(xì)菌生長繁殖的綜合營養(yǎng)基質(zhì)。綜合營養(yǎng)基質(zhì)。 營養(yǎng)物質(zhì)：蛋白胨、肉浸液、牛肉

3、膏、糖醇類、營養(yǎng)物質(zhì)：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇類、血液、雞蛋和動物血清、生長因子、無機(jī)鹽類血液、雞蛋和動物血清、生長因子、無機(jī)鹽類 水水 凝固劑：瓊脂、明膠凝固劑：瓊脂、明膠 抑制劑抑制劑 指示劑指示劑培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類（按用途分類按用途分類） 基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基：培養(yǎng)營養(yǎng)要求不高的細(xì)菌，如普通：培養(yǎng)營養(yǎng)要求不高的細(xì)菌，如普通平板平板 營養(yǎng)培養(yǎng)基營養(yǎng)培養(yǎng)基：能滿足營養(yǎng)需求較高細(xì)菌的生長，：能滿足營養(yǎng)需求較高細(xì)菌的生長，如血平板如血平板 鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基：含有某些特定的底物，用于鑒別細(xì)：含有某些特定的底物，用于鑒別細(xì)菌，如克氏雙糖培養(yǎng)基（菌，如克氏雙糖培養(yǎng)基（kia） 選擇培養(yǎng)基

4、選擇培養(yǎng)基：具有選擇性抑制作用，用于選擇性：具有選擇性抑制作用，用于選擇性的培養(yǎng)目的菌，如的培養(yǎng)目的菌，如ss平板平板 增菌培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)基：促進(jìn)目的菌的生長，適用于含菌量：促進(jìn)目的菌的生長，適用于含菌量較少的標(biāo)本，如葡萄糖肉湯。較少的標(biāo)本，如葡萄糖肉湯。 厭氧培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)基：用于培養(yǎng)厭氧菌：用于培養(yǎng)厭氧菌培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類（按物理性狀分類按物理性狀分類） 液體培養(yǎng)基：不含凝固劑，用于增菌和液體培養(yǎng)基：不含凝固劑，用于增菌和接種純種細(xì)菌。接種純種細(xì)菌。 半固體培養(yǎng)基：含半固體培養(yǎng)基：含0.30.5瓊脂，用瓊脂，用于觀察細(xì)菌的動力。于觀察細(xì)菌的動力。 固體培養(yǎng)基：含固體培養(yǎng)基：含22.5

5、瓊脂，多用于瓊脂，多用于細(xì)菌的分離培養(yǎng)。細(xì)菌的分離培養(yǎng)。培養(yǎng)基制備的一般程序培養(yǎng)基制備的一般程序調(diào)配調(diào)配溶化溶化矯正矯正ph過濾澄清過濾澄清分裝分裝滅菌滅菌檢定檢定培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)基滅菌 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基：121高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌15分鐘分鐘 含糖培養(yǎng)基：含糖培養(yǎng)基：113 滅菌滅菌15分鐘分鐘 雞蛋、血清培養(yǎng)基：間歇滅菌雞蛋、血清培養(yǎng)基：間歇滅菌3天天3次次 不耐高溫的液體成分：濾過除菌不耐高溫的液體成分：濾過除菌保存培養(yǎng)基培養(yǎng)基ph測定及矯正測定及矯正 材料：材料： 待測培養(yǎng)基、待測培養(yǎng)基、 ph7.4標(biāo)準(zhǔn)比色管、標(biāo)準(zhǔn)比色管、4孔比色架、孔比色架、0.02酚紅、酚紅、 氫氧化鈉氫

6、氧化鈉0.1mol/l、1mol/l） 鹽酸（鹽酸（0.1mol/l、1mol/l） 蒸餾水蒸餾水 試管（與比色管口徑一致）、試管（與比色管口徑一致）、 刻度吸管（刻度吸管（5ml、1ml、0.5ml、0.25ml）、）、ph矯正矯正水水培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)基比色管比色管 酚紅酚紅指示劑指示劑目目 視視 培養(yǎng)基蒸餾水ph矯正矯正過酸相同過堿標(biāo)準(zhǔn)比色管待測管 培養(yǎng)基蒸餾水標(biāo)準(zhǔn)比色管待測管 培養(yǎng)基蒸餾水標(biāo)準(zhǔn)比色管待測管計計 算算 假設(shè)假設(shè)2ml培養(yǎng)基矯正培養(yǎng)基矯正ph至至7.4時需時需0.1mol/l naoh 0.12ml，現(xiàn)有培養(yǎng)基，現(xiàn)有培養(yǎng)基1000ml，求需加，求需加naoh的量。的量。

7、2：10000.12：x設(shè)需加需加naoh的量為的量為xml。x=0.1210002 60ml 0.1mol/l naoh 60106ml 1mol/l naoh細(xì)菌的接種與培養(yǎng)細(xì)菌的接種與培養(yǎng) 無菌技術(shù)無菌技術(shù) 細(xì)菌檢驗的操作需在無菌室或超凈工作細(xì)菌檢驗的操作需在無菌室或超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行。臺內(nèi)進(jìn)行。 無菌室、超凈工作臺使用前后需進(jìn)行消無菌室、超凈工作臺使用前后需進(jìn)行消毒。毒。 細(xì)菌檢驗使用的物品使用前后需嚴(yán)格滅細(xì)菌檢驗使用的物品使用前后需嚴(yán)格滅菌菌 標(biāo)本的采集標(biāo)本的采集 無菌試管、燒瓶的使用無菌試管、燒瓶的使用細(xì)菌接種的基本程序細(xì)菌接種的基本程序滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)沾取標(biāo)本沾取標(biāo)本接種接種滅

8、菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染標(biāo)本殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染標(biāo)本殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染環(huán)境殺滅接種環(huán)沾染的細(xì)菌，以免污染環(huán)境細(xì)菌接種法細(xì)菌接種法 平板劃線接種法平板劃線接種法： 目的：使混合的細(xì)菌呈單個分散生長，目的：使混合的細(xì)菌呈單個分散生長，形成單個菌落，以便獲得純菌。形成單個菌落，以便獲得純菌。 方法：方法：分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本 液體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法 穿刺接種法穿刺接種法 :用于觀察細(xì)菌動力用于觀察細(xì)菌動力 斜面接種法斜面接種法 傾

9、注培養(yǎng)法傾注培養(yǎng)法:用于細(xì)菌計數(shù)用于細(xì)菌計數(shù)分區(qū)劃線法分區(qū)劃線法第一區(qū)劃線第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)連續(xù)劃線法連續(xù)劃線法細(xì)菌培養(yǎng)法細(xì)菌培養(yǎng)法 一般培養(yǎng)（需氧培養(yǎng)）：一般培養(yǎng)（需氧培養(yǎng)）：培養(yǎng)溫度：培養(yǎng)溫度：35（采用恒溫培養(yǎng)箱）（采用恒溫培養(yǎng)箱）培養(yǎng)時間：培養(yǎng)時間：1824h 二氧化碳培養(yǎng)法：燭缸法、二氧化碳培二氧化碳培養(yǎng)法：燭缸法、二氧化碳培養(yǎng)箱養(yǎng)箱 厭氧培養(yǎng)法：厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭厭氧培養(yǎng)法：厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸鹽法等氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸鹽法等細(xì)菌在細(xì)菌在固體固體培養(yǎng)基中

10、的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象 菌落菌落定義：指單個細(xì)菌在平板培養(yǎng)基上生長繁殖，形定義：指單個細(xì)菌在平板培養(yǎng)基上生長繁殖，形成單一肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)。成單一肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)。菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤度、黏度、溶血性明度、濕潤度、黏度、溶血性菌落類型：光滑型（菌落類型：光滑型（s）、粗糙型（）、粗糙型（r）、黏液型）、黏液型（m） 菌苔：指多個菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物。菌苔：指多個菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物。細(xì)菌在細(xì)菌在液體液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象 混濁混濁 沉淀：多見于鏈狀排列的細(xì)菌沉淀：多見于鏈狀排列的細(xì)菌 菌膜：多見于厭氧菌菌膜：多見于厭氧菌細(xì)菌在細(xì)菌在半固體半固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象 有鞭毛細(xì)菌：在培養(yǎng)基中沿穿刺線并向有鞭毛細(xì)菌：在培養(yǎng)基中沿穿刺線并向外擴(kuò)散生長，