1、叮叮小文庫植物細胞工程重點，老師上課時指點的。題型為：名詞解釋，填空，單選，判斷，簡答。0. 緒論1 細胞工程（ cell engineering ）： 應用細胞生物學和分子生物學方法，借助工程學的試驗 方法或技術，在細胞水平上改造生物遺傳特性和生物學特性，已獲得特定的細胞、細 胞產品或新生物體的有關理論和技術方法的學科。細胞工程的核心技術：細胞培養與繁殖。目的：獲得新形狀，新個體，新物質。2 為什么細胞工程是現代生物技術的橋梁和紐扣？細胞工程把蛋白質工程， 基因工程， 生物制藥等學科和代謝工程， 動植物改良，組織工 程等學科聯系在一起。3 細胞工程研究范疇： 細胞工程研究范疇涉及細胞，組織，

2、器官，胚胎的培養，細胞融合和亞細胞操作技術。4 細胞工程與相關學科的關系（1）細胞工程的建立依賴于相關學科理論的發展；（2）細胞工程為生物學研究提供了新的實驗體系，從而又促進了生物科學的迅速發展；（3）細胞工程必須與其他的生物技術相結合才能更好的發揮作用。5 細胞工程的應用和意義：（1）改善農業生產技術：動植物品種改良與繁殖；（2）保護生態環境：生物工業避免化學工業污染；名貴藥物的細胞生產保護自然資源；（3）生物醫藥、生物材料的開發與應用：以生物技術為依托的新型產業具有極大的商業潛 力，也是本世紀各國幾句競爭的領域之一。6 本章小結現代生物技術是一個綜合技術體系；細胞工程在現代生物技術中起著橋

3、梁和紐帶作用； 細胞工程的產生和發展依賴于生物科學相關領域的理論和技術發展； 細胞工程技術在現代農業、醫學以及工業生產中具有廣泛的應用前景。1. 第一章1 基本實驗室包括：準備室，無菌室，培養室。2滅菌（1）接種室滅菌：紫外燈照射 （無菌室、超凈臺）；熏蒸滅菌（無菌室）；噴霧消毒（超凈臺； 無菌室）。（2 ）接種工具、容器的滅菌：干熱滅菌或濕熱滅菌。在無菌操作時，把鑷子、剪刀、解剖刀等浸入95%勺酒精中，使用之前取出在酒精燈火焰上灼燒滅菌。冷卻后，立即使用。（3 ）培 養基： 一般用高溫蒸汽滅菌。（4）不耐熱類物質的滅菌。過濾除菌：某些激素（如天然生長素IAA、玉米素ZT、赤霉素GA等）、維生

4、素、抗生素等不耐熱或射線照射的物質。3培養基基本成分：水，無機鹽（大量元素和微量元素）；有機成分，激素和其他。培養基其他成分：瓊脂糖，活性炭，附加復合成分（碳水化合物，維生素，肌醇，天然復合物）。（注：加粗字體部分的答案不確定是否如此）4常用的植物激素：生長素（ Auxins ）;細胞分裂素（Cytokinins ）;赤霉素（GA）。生長素/細胞分裂素。高：有利于根的形成和愈傷組織的形成；適中：有利于根芽的分化； 低：有利于芽的形成5常用培養基:MS培養基，Vhite培 養基， B5培 養基，N6培 養基。 其中,N6培 養基是 中國人朱至靑發明的培養基6植物離體培養類型：組織培養，器官培養，

5、細胞培養。7外植體取材原則。根據培養需求選擇植物部位；多年生植物注意樹齡和季節；在不影響培養目的的前提下盡可能選擇自然繁殖器官作為外植體。8外植體滅菌：外植體-清洗整理-殺菌劑滅菌-無菌水清洗。外植體無菌處理：組織清洗 -70%酒精浸1030s-滅菌劑處理-無菌水涮洗。（此步驟應在超 凈臺上完成）（住：這兩個知識點好像說的是同一個意思，大家自己看著辦）9本章小結。細胞工程的核心是無菌操作和培養；實驗室建立在滿足技術要求的同時要經濟高效和實用；設備配置應根據工作性質而定；培養基是細胞生長的必需營養，根據細胞類型確定適宜配方；適宜的外植體是培養的前提，光照、溫度是植物離體培養的基本條件。2. 第二

6、章1細胞全能性：一個細胞所具有的產生完整生物個體的固有能力稱之為細胞的全能性。脫分化：培養條件下使已分化的細胞回復到原始無分化狀態或分生細胞狀態的過程。再分化：離體條件下，脫分化后具有分生能力的細胞，再經過細胞分化， 重新形成各類組織和器官、形成新個體的過程。愈傷組織：由外植體組織增生的細胞產生的一團不定型的疏散排列的薄壁細胞。2離體培養條件下，細胞全能性的表達是通過細胞脫分化和再分化實現的。3細胞的脫分化分為 3個階段：啟動階段：液體蛋白體出現是脫分化的標志；演變階段：細胞核向中央移動，質體演變成原生質體；終結階段：細胞回復到分生細胞狀態，細胞分裂即將開始。4細胞脫分化調控的實質就是 G0期

7、細胞回復到分裂周期的調控過程。5器官發生方式：先芽后根，先根后芽，芽根同時。6器官發生過程。經過愈傷組織的器官發生：愈傷組織的形成；生長中心的形成；器官原基及器官形成。不經過愈傷組織的器官發生：細胞第一次平周分裂；生長中心形成；原初分生組織；芽原基形成。7本章小結。細胞全能性是細胞工程的基本理論基礎；細胞全能性的表達能力與細胞分化程度有關；離體培養下細胞全能性表達是通過細胞分化和再分化實現的；器官發生和體細胞胚胎發生是植物細胞再生個體的基本途徑；植物細胞離體再生能力是受遺傳調控和培養條件的雙重調節。3. 第三章1細胞工程技術的雙重性：遺傳穩定性，變異性。2本章小結細胞工程技術對培養細胞具有遺傳

8、穩定性和變異性的雙重影響體細胞變異在培養類型中具有普遍性，在變異形狀上具有局限性體細胞變異可自發產生，也可以通過理化因子誘導產生體細胞變異包括染色體數量和結構變異，但大多數可利用變異多為基因突變利用體細胞變異可以直接培育品種也可作為生物學相關研究的基礎材料4. 第四章1廣義的組織培養依 explant不同，可分為：器官培養，莖尖分生組織培養， 愈傷組織培養， 細胞培養，原生質體培養。2植物脫毒的基本原理和流程。基本原理：病毒在植物體內的分布具有不均勻性。基本流程：（1）母體植株的選擇和預處理；（2）莖尖分生組織培養再生植株；（3 ）脫毒效果 檢測；（4）脫毒苗的保存與繁殖。3脫毒植物的鑒定方法

9、： 直觀鑒定，指示植物鑒定，抗血清反應鑒定，電鏡技術鑒定。4離體無性繁殖（快繁）：人工控制的無菌環境下，使植物在培養基上繁殖的技術，跟常規繁殖技術相比是一種微型操作過程，有時稱之為微繁。5離體無性繁殖的操作過程：外植體選擇；外植體培養；植物再生育增殖；生根培養。6花藥培養屬于器官培養范疇，花粉培養也稱小孢子培養，屬于細胞培養范疇。7花藥培養：把發育到一定階段的花藥接種在人工培養基上，使其發育和分化成為植株的過程。花粉培養（小孢子培養）：從花藥中分離出花粉粒，使之成為分散的或游離狀態 ，通過培養使花 粉粒脫分化,進而發育成完整植株的過程。8花藥或花粉培養在作物育種中的作用：（1 ）縮短育種年限；

10、（2）提高了目標基因型的選擇效率；（3）誘變育種中的作用；（4）利于篩選隱性突變體，提高誘變效率，（5）利于獲得優良植株，（6 ）應用于遠緣雜交，克服不育性。9胚胎培養：胚胎培養是將植物的胚胎與母體分離，培養在已知化學成分的培養基獲得再生植株的培養過程。幼胚培養：對發育早期的胚進行培養。幼胚培養的方法：1、材料的選擇與滅菌：確定授粉后天數與胚胎發育的相應關系，對于遠緣雜種胚，要在其夭折前培養。2、幼胚的分離及培養。（1）分離：先取出胚珠，剝離珠被，取出完整的幼胚，后培養。（2）培養：胚離體培養發育時期分為異養期和自養期。在心形期 轉入自養生長。對于難培養的幼胚，可利用胚乳看護培養。-5叮叮小文

11、庫10植物胚乳的發育特性。植物胚乳可以分為兩大類：被子植物胚乳和裸子植物胚乳。被子植物胚乳是雙受精的產物，它由二個極核和一個雄配子融合形成，所以，在染色體倍性上它屬于三倍體組織。裸子植物很特殊，它的胚乳在受精前就已形成。裸子植物的胚乳為配子體的一部分，由大孢子直接分裂發育而成，因此它是單倍體組織。胚乳按發育初期是否形成細胞壁可分為三種類型：核型胚乳：胚乳最初發育經過一段游離核階段，絕大多數被子植物的胚乳屬于核型胚乳。游離核階段時間長短因植物不同而異。細胞型胚乳：和核型胚乳不同，細胞型胚乳的發育不經過游離核階段而按正常的細胞分裂方 式進行。胚乳初生核第一次分裂后即形成兩個子細胞，以后每次分裂都形

12、成細胞壁。沼生目型胚乳：沼生目型胚乳是核型與細胞型之間的中間型。初生胚乳核第一次分裂為細胞型，以后兩個細胞中的核進行游離核分裂。單子葉植物的某些類群。11本章小結植物脫毒快繁是無性植物種苗生產的最有效技術植物花胚是創造單倍體的有效途徑，被子植物胚乳培養可獲得三倍體外植體選擇是植物組織培養的基本環節，根據不同培養目的確定取材原則培養物增殖方式和植株再生途徑直接影響遺傳穩定性，應根據培養類型和目的慎重選擇5. 第五章（細胞懸浮培養是重點）1懸浮培養：懸浮培養是指將單個游離細胞或小細胞團在液體培養基中進行培養增殖的技術。2由愈傷組織誘導進行懸浮培養的過程（由組織器官經愈傷組織分離單細胞）。（1）誘導

13、產生愈傷組織；（2）愈傷組織反復繼代，使組織不斷增殖，提高愈傷組織松散性；（3）將愈傷組織在液體培養基中培養，建立懸浮培養物。3進行細胞懸浮培養時， 幼胚、胚軸、子葉是最常使用的外植體。4一個成功的懸浮細胞培養體系必須滿足三個條件：懸浮培養物分散性良好，均一性好，細胞生長迅速。（這道題很重要，你懂的5細胞同步化：細胞同步化是指統一懸浮培養體系的所有細胞都同時通過細胞周期的某個特定時期。6獲得同步化細胞的方法：饑餓法，抑制劑法，分選法，低溫處理。7單細胞培養的方法。平板培養法：將一定密度的懸浮細胞與融化的瓊脂培養基均勻混合后平鋪一薄層在培養皿底上的培養法；看護培養:操作方法是在固體培養基上置入一

14、塊活躍生長的愈傷組織，再在愈傷組織上放一小片濾紙，待濾紙濕潤后將細胞接種到濾紙上。當培養細胞長出微小細胞團以后，將其直接轉置瓊脂培養基上讓其迅速生長；微室培養:對單細胞活體連續觀察。這一方法同樣也可用于原生質體培養觀察細胞壁的再生與細胞分裂過程；雙層濾紙植板培養:Horsch等（1980）將平板培養與飼養層培養技術相結合，建立了雙層 濾紙植板培養方法。8本章小結細胞規模化培養有可能成為新型生化工業的重要途徑，細胞懸浮培養是細胞規模化培養的基礎各種單細胞培養技術是細胞克隆的基礎技術，也適用于植物花粉培養和原生質體培養 高等生物細胞規模化培養體系的建立必須與生物反應器的研制相匹配根據目的產物建立包

15、括培養基、種細胞、培養方式等在內的一系列配套技術是商業化的前提6. 第六章1原生質體：指除去細胞壁的細胞或是說一個被質膜所包圍的裸露細胞。2本章小結原生質體是植物除去細胞壁后的裸露細胞，是進行各種細胞操作的理想系統原生質體的分離和純化是原生質體操作和培養的前提分離的原生質體活性受供體材料和分離條件的影響原生質體屬于細胞工程精細技術，培養技術的成熟程度將直接影響體系的應用性細胞原生質體操作因具有眾多的優點而成為未來研究的熱點7. 第七章1體細胞雜交：兩個離體細胞通過一定誘導技術使質膜接觸而融合在一起隨后導致兩個細胞核物質融合的技術。植物體細胞雜交則是指除去細胞壁的原生質體融合。2根據融合時細胞的

16、完整程度，原生質體融合可分為兩大類：對稱融合(asymmetric fusion )即兩個完整的細胞原生質體融合。非對稱融合(symmetric fusion )利用物理或化學方法使某親本的核或細胞質失活后再進行融合。3. 原生質體融合的方法。PEG融合優點：融合成本低，勿需特殊設備；融合子產生的異核率較高；融合過程不受物種限制。缺點：融合過程繁瑣，PEG可能對細胞有毒害。電融合與PEG融合比較起來，電融合有三大優點：不存在對細胞的毒害問題；融合效率 高；融合技術操作簡便。4體細胞雜種的運用獲得新物種；獲得新種質和新品種；轉移細胞質基因控制形狀。5 影 響 原 生 質 體 融 合 的 因 素原

17、生質體質量對細胞的融合起著至關重要的作用，高質量的原生質體是細胞融合的首要條件；融合方法；融合參數，包括各種融合液都應選擇適當。6本章小結植物體細胞雜交即原生質體融合，是獲得胞質雜種的理想途徑體細胞雜交在遠緣育種和新物種、新資源創造中具有深遠意義原生質體融合技術主要有 PEG融合和電融合雜種的成功培養是建立在原生質體培養技術上的，選擇和鑒定是獲得細胞雜種的關鍵提高融合效率和培養重復性是該技術研究的重點細胞雜種是體細胞遺傳研究的良好體系8. 第八章1人工種子：任何一種繁殖體，無論是在涂膜膠囊中包裹的、裸露的或經過干燥的，只要能夠發育成完整的植株，均可稱之為人工種子。2人工種子的類型。根據包被的需

18、要程度可分為三類：裸露的或休眠的繁殖體、人工種皮包被的繁殖體、水凝膠包埋再包被人工種皮的繁殖體。7叮叮小文庫根據繁殖體的類型可分為兩類：體細胞胚人工種子、非體細胞胚人工種子。3人工種子的生產流程。繁殖體的人工誘導與生產增殖；繁殖體的篩選和預處理；人工種子的包埋。4本章小結人工種子是在實驗室人工控制條件下生產的繁殖體，其應用具有眾多生物學意義和社會意義人工種子繁殖體包括體細胞胚、微型變態器官和微芽，根據植物種類不同可適當選擇人工種子應用的基本條件是繁殖體的工廠化生產和配套技術的成熟無性繁殖的植物種子有望最先得以應用9. 第九章（了解即可）1本章小結生物細胞的低溫凍存是防止生物種質滅絕的重要途徑低

19、溫凍存技術的應用取決于凍存技術和再培養技術的成熟程度根據細胞類型選擇凍存和解凍方法是再培養成功的前提凍存和恢復過程中的遺傳變異值得關注各位，這是植物細胞工程平時的小測題目，答案是我自己填上去的，可以參考下一、名詞解釋：細胞工程：應用細胞生物學和分子生物學方法，借助工程學的試驗方法或技術，在細胞水平上改造生物遺傳特性和生物學特性，已獲得特定的細胞、細胞產品或新生物體的有關理論和技術方法的學科細胞脫分化：培養條件下使一個已經分化的細胞回復到原始無分化狀態或者分生細胞狀態的過程就是細胞脫分化體細胞無性系：把由任何形式的細胞培養所產生的植株統稱為體細胞無性系懸浮培養：是指將單個游離細胞或小細胞團在液體

20、培養基中進行培養增殖的技術花粉培養：從花藥中分離出花粉粒，使之成為分散的或游離狀態，通過培養使花粉粒脫分化 , 進而發育成完整植株的過程 .外植體：指用于離體培養的活的植物組織和器官等材料，它是植物離體培養的基礎材料極性：指植物的器官、組織甚至單個細胞在不同軸向上存在著某種形態結構及生理生化上的梯度差異植物原生質體：指除去細胞壁的細胞或是說一個被質膜所包圍的裸露細胞。植物體細胞雜交：兩個離體細胞通過一定誘導技術使質膜接觸而融合在一起隨后導致兩個細 胞核物質融合的技術。植物體細胞雜交則是指除去細胞壁的原生質體融合細胞同步化：是指統一懸浮培養體系的所有細胞都同時通過細胞周期的某個特定時期種質資源低

21、溫保存： 是指將植物的細胞或組織經過防凍處理后，在-80 C以下的超低溫下保存的方法。一、填空題：1、 離體培養中器官發生的方式有：先芽后根、先根后芽、在愈傷組織的不同部位形成 芽和根 。2、 細胞工程技術的雙重性：遺傳穩定性、變異性3、花粉原生質體的具有 單倍體、原生質體雙重優點。4、 原生質體融合的種類：對稱融合、非對稱融合 。三、問答：1、什么是細胞全能性？其內在含義有哪些？一個細胞所具有的產生完整生物個體的固有能力稱之為細胞的全能性。內在含義：細胞全能性的相對性(1 )不是所有基因型的所有細胞在任何條件下都具有良好的培養反應(2 )即使對于植物細胞而言，細胞全能性也并不意味著任何細胞均

22、可以直接產生植物個體(3 )動、植物細胞全能性的表現程度存在明顯的差異2、什么是體細胞胚？其內含包括哪些方面？概念：離體培養下沒有受精過程，但經過了胚胎發生過程形成的胚的類似物(不管培養的細胞是體細胞還是生殖細胞)，統稱為體細胞胚或胚狀體。內含有：(1) 體細胞胚是離體培養的產物，只限于離體范圍使用，以區別于無融合生殖胚(2) 體細胞胚起源于非合子細胞，以區別于合子胚(3) 體細胞胚形成經過了胚胎發育過程，以區別與離體培養器官發生形成個體的途徑3、植物脫毒原理以及基本流程? 原理：病毒在植物體內的分布具有不均勻性基本流程：（1）母體植株的選擇和預處理（2）莖尖分生組織培養再生植株（3）脫毒效果

23、檢測（4）脫毒苗的保存與繁殖4、人工種子的概念和類型？概念：人工種子又稱合成種子或體細胞種子，任何一種繁殖體，無論是在涂膜膠囊中包裹的、裸露的或經過干燥的，只要能夠發育成完整的植株，均可稱之為人工種子。類型：人工種子根據包被情況和繁殖體類型有兩種分類方法（1）根據包被的需要程度可分為三類：裸露的或休眠的繁殖體、人工種皮包被的繁殖體、水凝膠包埋再包被人工種皮的繁殖體（2）根據繁殖體的類型可分為兩類：體細胞胚人工種子、非體細胞胚人工種子5、 金屬制品、玻璃器皿、活性物質、溶液分別采用何種滅菌的方法？（不好意思，這題的 答案不是很確定）金屬制品：使用前可采用干熱滅菌；使用過程中的滅菌通常是將其浸泡在

24、70%酒精中，再以火焰將酒精燒去，待冷卻后使用。玻璃器皿：干熱滅菌：160-180 C ,1.5-2.0h ;濕熱滅菌：121 C , 20-30min活性物質：不耐熱類物質：過濾滅菌：某些激素（如天然生長素IAA、玉米素ZT、赤霉素GA等）、維生素、抗生素等不耐熱或射線照射的物質。溶液：不穩定的藥品溶液：過濾滅菌。穩定的溶液：高壓蒸汽滅菌一、 填空題20”1、 培養基的固化劑有瓊脂、 、等。2、 植物細胞工程是一門以 條件下的植物組織和細胞的和。11叮叮小文庫3、 時變異幅度大的品系，可以從這些群體中選擇，進行，生產出的大量種苗。4、 是區別于和的一種特殊的誘變方法。5、 技術用于克服遠源雜交不親和，技術用于得到雜合細胞，技術只可用于品種復壯。6、 組培中污染的原因主要有：、設備和設備、等原因。二、判斷題10”1、植物組織培養是植物細胞工程的同義詞或近義詞2、培養基不凝固可能是缺鈣。3、MS培養基沒有加入氯化鈣，但是加入了碘化鉀。4、由不定胚誘導出愈傷組織是脫分化而不是再分化。5、植物組織培養中出現的突變有一些只是表型上的變異。6、在植物組織培養的滅菌與處理中，熱療法是具有普遍效果的方 法。7、