1、 一、實驗目的一、實驗目的1 1. .學習并掌握莢膜染色法學習并掌握莢膜染色法。2.2.熟悉并掌握光學顯微鏡的使用方法。熟悉并掌握光學顯微鏡的使用方法。二、原理二、原理 某些細菌生長到一定階段，在一定條件下某些細菌生長到一定階段，在一定條件下會向細胞壁外分泌一層粘性的多糖類物質會向細胞壁外分泌一層粘性的多糖類物質莢膜。莢膜含水分多，疏松且較薄，受熱莢膜。莢膜含水分多，疏松且較薄，受熱易失水變形。莢膜不易染色，故常用襯托染易失水變形。莢膜不易染色，故常用襯托染色法，即將菌體著色，而將不著色的透明莢色法，即將菌體著色，而將不著色的透明莢膜襯托出來。膜襯托出來。 三、實驗器材三、實驗器材1.1. 菌

2、種：菌種：野油菜黃單胞菌野油菜黃單胞菌 （xanthomona campestris）2.2.染料：染料：草酸銨結晶紫草酸銨結晶紫3.3.器材：載玻片、接種棒、酒精燈器材：載玻片、接種棒、酒精燈 擦鏡紙、顯微鏡擦鏡紙、顯微鏡1.1. 涂片：在潔凈無油膩的玻片中央放一小滴蒸餾水（或用接種涂片：在潔凈無油膩的玻片中央放一小滴蒸餾水（或用接種環挑環挑1-21-2滴水），用無菌的接種環挑取少量菌種與水滴滴水），用無菌的接種環挑取少量菌種與水滴充分混充分混勻勻，涂成極薄的菌膜，涂成極薄的菌膜，涂布面積約涂布面積約1cm1cm2 2 。2.2. 干燥：涂片在室溫下使其自然干燥，也可以小心地在酒精燈干燥：涂

3、片在室溫下使其自然干燥，也可以小心地在酒精燈上高處微微加熱，使水分蒸發，上高處微微加熱，使水分蒸發，但切勿緊靠火焰或加熱時間但切勿緊靠火焰或加熱時間過長，以防標本烤枯而變形過長，以防標本烤枯而變形。 3.3. 固定：手執玻片一端，固定：手執玻片一端，有菌膜的一面朝上有菌膜的一面朝上，通過微火三次（，通過微火三次（手指觸摸反面不燙手為宜），待玻片冷卻后，再加染色液。手指觸摸反面不燙手為宜），待玻片冷卻后，再加染色液。4.4. 染色：玻片置于玻片擱架上，加適量（以蓋滿菌膜為度）草染色：玻片置于玻片擱架上，加適量（以蓋滿菌膜為度）草酸銨結晶紫（或石炭酸復紅染液）于菌膜部位，酸銨結晶紫（或石炭酸復紅染

4、液）于菌膜部位，染色染色1-2min1-2min。5.5. 水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭（或洗瓶）下用水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭（或洗瓶）下用小股水流小股水流沖洗沖洗，直至洗下的水呈無色為止。，直至洗下的水呈無色為止。 6.6. 干燥：自然干燥或用吸水紙吸去涂片上的水，干燥：自然干燥或用吸水紙吸去涂片上的水，用吸水紙時切用吸水紙時切勿將菌體擦掉勿將菌體擦掉。 7.7. 鏡檢：用高倍鏡和油鏡觀察并繪細菌形態并繪圖于記錄表中鏡檢：用高倍鏡和油鏡觀察并繪細菌形態并繪圖于記錄表中四、實驗步驟四、實驗步驟五、實驗報告五、實驗報告 繪圖說明你所觀察到的細菌菌體和莢膜的繪圖說明你所觀察到的細菌菌體和莢

5、膜的形態。形態。 菌種菌種放大倍數放大倍數 顏色顏色 形態形態 莢膜莢膜 菌體菌體野油菜黃單野油菜黃單胞菌胞菌 10001.1. 通過莢膜染色法染色后，為什么被包在通過莢膜染色法染色后，為什么被包在莢膜里面的菌體著色而莢膜不著色？莢膜里面的菌體著色而莢膜不著色？六、思考題六、思考題 一、實驗目的一、實驗目的1 1. .掌握芽孢涂片及芽孢染色的原理和步驟。掌握芽孢涂片及芽孢染色的原理和步驟。2.2.熟悉并掌握光學顯微鏡的使用方法。熟悉并掌握光學顯微鏡的使用方法。二、實驗原理二、實驗原理 芽孢是芽孢桿菌屬和梭菌屬生長到一定階芽孢是芽孢桿菌屬和梭菌屬生長到一定階段形成的一種抗逆性很強的休眠體結構，通

6、段形成的一種抗逆性很強的休眠體結構，通常為圓形或橢圓形。常為圓形或橢圓形。 每一營養細胞內僅生每一營養細胞內僅生成一個芽孢，它在適宜成一個芽孢，它在適宜的條件下可以重新轉變的條件下可以重新轉變成為營養態細胞。成為營養態細胞。 芽孢壁厚、透性低，著色、脫色均較困難。芽孢壁厚、透性低，著色、脫色均較困難。因此，用著色力強的染色劑（如孔雀石綠）在因此，用著色力強的染色劑（如孔雀石綠）在加熱條件下進行染色時，染料不僅可以進入菌加熱條件下進行染色時，染料不僅可以進入菌體，而且也可以進入芽孢，進入菌體的染料可體，而且也可以進入芽孢，進入菌體的染料可經水洗脫色，而進入芽孢的染色的染料則難以經水洗脫色，而進入

7、芽孢的染色的染料則難以透出，若再用復染液（如沙黃水溶液）染色后，透出，若再用復染液（如沙黃水溶液）染色后，芽孢仍然保留初染劑的顏色，而菌體被染成復芽孢仍然保留初染劑的顏色，而菌體被染成復染劑的顏色，即菌體和芽孢分別染成紅色和綠染劑的顏色，即菌體和芽孢分別染成紅色和綠色易于區分。色易于區分。三、實驗器材三、實驗器材1.1.菌種：枯草芽孢桿菌菌種：枯草芽孢桿菌 （bacillus subtilis）2.2.染料：孔雀石綠染液、沙黃水溶液染料：孔雀石綠染液、沙黃水溶液3.3.器材：載玻片、接種棒、酒精燈器材：載玻片、接種棒、酒精燈 擦鏡紙、顯微鏡擦鏡紙、顯微鏡1.1. 將培養將培養24h24h左右的

8、枯草芽孢桿菌涂片、干燥和固左右的枯草芽孢桿菌涂片、干燥和固定。定。2.2. 滴加滴加3-53-5滴孔雀石綠染液于已固定的涂片上。滴孔雀石綠染液于已固定的涂片上。3.3. 用木夾夾住載玻片于火焰上加熱，使染液冒蒸汽用木夾夾住載玻片于火焰上加熱，使染液冒蒸汽 但勿沸騰，切忌將染液蒸干，必要時可添加少許但勿沸騰，切忌將染液蒸干，必要時可添加少許染液。染液。加熱時間從染液冒蒸汽時開時計算約加熱時間從染液冒蒸汽時開時計算約5min5min。4.4. 傾去染液，待玻片冷卻后，水洗至孔雀石綠不再傾去染液，待玻片冷卻后，水洗至孔雀石綠不再褪色為止。褪色為止。5.5. 用沙黃水溶液復染用沙黃水溶液復染1min1

9、min，水洗。，水洗。6.6. 用吸水紙吸去涂片上的水用吸水紙吸去涂片上的水，置油鏡觀察，芽孢呈，置油鏡觀察，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。綠色，菌體呈紅色。四、實驗步驟四、實驗步驟染色結果染色結果染色結果染色結果五、實驗完畢后的處理五、實驗完畢后的處理 1.1.將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈，將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈， a.a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。 b.b.用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦2-32-3次。次。 c.c.再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦2-32-3次。次。 2.2.看后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈。看后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈。六、實驗報告六、實驗報告 注意你在油鏡下觀察到的經過染色的芽孢的形態，注意你在油鏡下觀察到的經過染色的芽孢的形態，大小和芽孢在菌體中的位置并繪制游離芽孢形態大小和芽孢在菌體中的位置并繪制游離芽孢形態圖。圖。 菌種菌種放大倍數放大倍數 顏色顏色 形態形態 芽孢芽孢 菌體菌