1、免疫學技術第九講免疫學技術第九講 pptppt課件課件(9)(9)2、分類：直接凝集反響、間接凝集反響、反向間接凝集反響、協同凝集反響等。3、用途：如血型鑒定、牛布病檢測、雞白痢診斷等。2、分類：單向瓊脂擴散、雙向瓊脂擴散、對流免疫電泳、火箭電泳等。3、用途：如炭疽、小鵝瘟診斷等。AscoliAgAb對流免疫電泳對流免疫電泳2、分類：1免疫熒光技術2免疫酶技術3放射免疫測定法4免疫印跡法5 免疫金標技術 6 免疫PCR小鼠脾臟免疫熒光圖像免疫酶技術免疫酶技術免疫酶組化免疫酶組化法法免疫酶測定免疫酶測定法法酶標記抗體法酶標記抗體法抗酶抗體法抗酶抗體法液相測定法液相測定法固相測定法固相測定法間接法

2、間接法雙抗體夾心法雙抗體夾心法競爭法競爭法免疫酶技術免疫酶技術4 4操作過程：操作過程：專題二：細胞免疫技術專題二：細胞免疫技術 1、概述：細胞免疫檢測主要包括T細胞及亞群的計數、T細胞活性測定、各種淋巴因子的檢測、K細胞、NK細胞活性試驗，以及皮膚過敏試驗等。 2、用途： 1測定疾病個體的細胞免疫狀態及水平； 2篩選免疫增強劑或免疫抑制藥物； 3測定淋巴因子活性等細胞免疫技術細胞免疫技術 3、分類： E花環試驗 淋巴細胞轉化試驗 白細胞移動抑制試驗 白細胞介素測定 酸性醋酸萘酯酶測定主要細胞免疫技術主要細胞免疫技術28 T細 胞 的 E玫 瑰 花 環 試 驗 一E玫瑰花環試驗 1、原理：人、

3、豬、牛、羊等的T細胞膜上的CD2是綿羊紅細胞受體，馬、豬的T細胞膜上的CD2是豚鼠紅細胞的受體。 2、用途：區分T淋巴細胞主要細胞免疫技術主要細胞免疫技術 二淋巴細胞轉化試驗 1、原理： PHA+T細胞有PHA受體 轉化 大的淋巴母細胞 顯微鏡觀察計算轉化率 轉化率=(過渡型細胞+母細胞)/200個淋巴細胞100% 2、用途：淋巴細胞計數，監測免疫機能 3、特點：簡便、準確性差形態學法形態學法30T細 胞 受 PHA作 用 轉 化 后 的 形 態 示 意 圖3H3H胸腺嘧啶核苷胸腺嘧啶核苷3H-T3H-T摻入法摻入法原理：原理： 試驗管試驗管 對照管對照管 PHA+T PHA+T細胞細胞+3H

4、-TdR PHA+T+3H-TdR PHA+T細胞細胞 轉化轉化 轉化轉化 淋巴母細胞淋巴母細胞 淋巴母細胞淋巴母細胞 摻入摻入3H-TdR3H-TdR 無無3H-TdR3H-TdR摻入摻入 液體閃爍儀測摻入液體閃爍儀測摻入 測測CPMCPM 3H-T 3H-T的脈沖數的脈沖數CPMCPM 計算轉化刺激指數計算轉化刺激指數SI=SI=試驗管試驗管CPM/CPM/對照管對照管CPMCPM特點：準確，需昂貴的閃爍儀特點：準確，需昂貴的閃爍儀原理：PHA、ConA+T細胞受體 轉化 分裂、增殖 脫氫酶 甲氮唑鹽MTT 甲簪formazan 酶標儀595nm測OD值特點：敏感、準確 MTT比色法主要細胞免疫技術主要細胞免疫技術 三酸性醋酸萘酯酶測定 1、原理：T淋巴細胞漿內含有的酸性醋酸萘酯酶，在弱酸性條件下，能使底物酸性醋酸萘酯水解成醋酸和萘酚，后者與六偶氮副品紅偶聯，生成不溶性的紅色沉淀物，沉積在T淋巴細胞胞漿內酯酶所在的部位，經甲基綠復染，反響呈現單一或散在的顆粒或斑塊，顯棕紅色。B淋巴細胞那么無此種反響。 2、用途：可作為鑒別T淋巴細胞的一種非特異性方法。 課堂總結課堂總