1、凝集反響凝集反響安陽工學院安陽工學院10生物技術生物技術 Page 2凝集反響凝集反響agglutinationn是指顆粒性抗原，例如細菌、紅細胞、螺旋體、細胞性抗原，或可溶性抗原或抗體與載體顆粒結合成致敏顆粒后，與相應的抗體或抗原在適量的電解質存在的條件下，經一定時間后凝聚成肉眼可見的凝集景象。Page 3凝集反響的類型凝集反響的類型 根據凝集反響中抗原的性質，反響的根據凝集反響中抗原的性質，反響的方式分為：方式分為：直接凝集反響直接凝集反響間接凝集反響間接凝集反響間接凝集抑制反響間接凝集抑制反響協同凝集反響協同凝集反響Page 4 直接凝集實驗：玻片凝集實驗：ABO血型試管凝集實驗：外斐實

2、驗，肥達實驗間接凝集實驗：正向間接凝集實驗 反向間接凝集實驗間接凝集抑制實驗 協同凝集實驗簡介血凝實驗 膠乳凝集實驗明膠凝集實驗Page 5凝集反響的特點凝集反響的特點n顆粒性抗原n致敏顆粒n可溶性抗原或抗體與載體顆粒結合n電解質的存在n肉眼可見的凝集景象Page 6凝集反響的發生分兩階段：抗原抗體的特異結合出現可見的顆粒凝集Page 7 Page 8直接凝集反響n 細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒抗原，在適當電解質參與下可直接與相應抗體結合出現凝集，稱為直接凝集反響。參與反響的顆粒性抗原稱為凝集原agglutinogen，抗體稱為凝集素agglutinin 。n 常見的方法有玻片法和試管法Page

3、 9玻片凝集實驗ABO血型鑒定 玻片凝集實驗為定性實驗，普通用知抗體作為診斷血清，與受檢顆粒抗原，如菌液或紅細胞抗原各加一滴在玻片上，混勻，數分鐘后即可用肉眼察看凝集結果，出現凝集顆粒的為陽性。此法簡便，快速，適用于從病人標本中分別得到的菌種的診斷或分型，也可用于紅細胞ABO血型的鑒定。 Page 10 【實驗原理】人類ABO血型抗原主要有A和B兩種，根據紅細胞外表這兩種抗原的有無可把血型分為四種。據此，將抗A和抗B抗體分別與待測紅細胞混合，抗A或和抗B抗體與紅細胞外表上的相應抗原結合而引起紅細胞凝集，據其凝集情況便可斷定出受試者的血型。紅細胞外表Ag血清中AbA型A抗BB型B抗AAB型A、B

4、、O型、抗A、抗BPage 11 【實驗資料】1ABO規范血清：抗A分型試劑和抗B分型試劑各1支。21ml生理鹽水的試管1支 3. 一次性采血針1枚、白瓷板1塊、一次性毛細吸管1支、75酒精棉球和滅菌干棉球Page 12 【實驗方法】 1.用酒精棉簽消毒被檢者手指尖端，以采血針刺破皮膚，稍加擠壓，使血液流出。滴1至2滴血液于含有生理鹽水的試管內，搖勻，制成血球懸液。用干棉球止血。 2取干凈載玻片1塊，將抗A、B分型試劑分別加1滴于白瓷板的兩個圓孔內。 3. 用毛細吸管汲取血球懸液，在白瓷板的兩個圓孔內各加一滴,并充分混勻，放置510分鐘。 4.察看紅細胞有無凝集發生。如有凝集，可見紅細胞凝集成

5、塊；無凝集，紅細胞呈均勻分散。 5.記錄凝集情況，斷定受檢者的血型。Page 13試管凝集實驗試管凝集實驗n 多用于半定量實驗，原那么上是用定量抗原懸液與一系列倍比稀釋的受檢血清混合，在保溫靜置后察看結果，以斷定受檢血清中有無相應抗體及其效價。n 常有肥達實驗，外-斐實驗，交叉配血實驗等。Page 14 間接凝集反響間接凝集反響將可溶性抗原或抗體先吸附于適當將可溶性抗原或抗體先吸附于適當大小的顆粒性載體外表這種載體與大小的顆粒性載體外表這種載體與免疫無關，然后與相應抗體或抗原免疫無關，然后與相應抗體或抗原結合，在適量的電解質存在下，出現結合，在適量的電解質存在下，出現特異性凝集景象，稱為間接凝

6、集反響。特異性凝集景象，稱為間接凝集反響。根據載體的不同可將間接凝集反響根據載體的不同可將間接凝集反響分為：間接血細胞凝集實驗、間接乳分為：間接血細胞凝集實驗、間接乳膠凝集實驗及間接乳膠凝集抑制實膠凝集實驗及間接乳膠凝集抑制實驗和金黃色葡萄球菌協同凝集實驗驗和金黃色葡萄球菌協同凝集實驗等。等。Page 15載體的種類及處置方法載體的種類及處置方法n 常用載體有：紅細胞O型人紅細胞，綿羊紅細胞、聚苯乙烯膠乳顆粒、明膠顆粒、離子交換樹脂、活性炭、火棉膠等。n 處置方法：顆粒外表的處置醛化、鞣化、化學處置Page 16間接凝集反響的類型間接凝集反響的類型1. 正向間接凝集反響2. 反向間接凝集反響3

7、. 間接凝集抑制反響4. 協同凝集反響 Page 17血凝實驗血凝實驗n 可在微量滴定板或試管中進展，將標本倍比稀釋，普通為1:64，同時設不含標本的稀釋液對照孔。在含稀釋標本1滴的板孔或試管中，參與0.5致敏紅細胞懸液1滴，充分混勻，置室溫12小時，即可察看結果。凡紅細胞堆積于孔底，集中呈一圓點的為不凝集。如紅細胞凝集，那么分布于孔底周圍。根據紅細胞凝集的程度判別陽性反響的強弱，以凝集的孔為滴度終點。Page 18血凝反響強度表示圖血凝反響強度表示圖Page 191 1正向間接凝集反響正向間接凝集反響n 用抗原致敏載體以檢測標本中的相應抗體Page 202 2反向間接凝集反響反向間接凝集反響

8、n 用特異性抗體致敏載體以檢測標本中的相應抗原。Page 213 3間接凝集抑制反響間接凝集抑制反響n 診斷試劑為抗原致敏的顆粒載體和相應的抗體，用于檢測標本中能否存在與致敏抗原一樣的抗原。檢測方法為將標本先與抗體試劑作用，然后再參與致敏的載體，假設出現凝集景象，闡明標本中不存在一樣抗原，抗體試劑未被結合，因此仍與載體上的抗原起作用。如標本中存在一樣抗原，那么凝集反響被抑制。Page 22間接凝集抑制反響原理表示圖Page 234 4協同凝集反響協同凝集反響n 協同凝集反響與間接凝集反響的原理相類似，但所用載體既非天然的紅細胞，也非人工合成的聚合物顆粒，而是一種金黃色葡萄球菌。它的菌體細胞壁中

9、含有A蛋白SPA具有與IgG的Fc段結合的特性，因此當這種葡萄球菌與IgG抗體銜接時，就成為抗體致敏的顆粒載體。如與相應抗原接觸，即出現反向間接凝集反響。協同凝集反響也適用于細菌的直接檢測。Page 24間接凝集反響的運用間接凝集反響的運用n間接凝集反響具有快速、敏感、操作簡便、無需特殊的實驗設備等特點，而且能用于抗原或抗體的測定，因此在臨床檢驗中廣為運用。Page 25一抗原的檢測一抗原的檢測n 反向間接凝集實驗可用于檢測病原體的可溶性抗原，也可用于檢測各種蛋白質成分。n 間接凝集反響的敏感度雖較沉淀反響高，但低于新開展的各種標志免疫測定。n 例如檢測乙型肝炎外表抗原HBsAg的間接血凝實驗敏感度普通在25ng/ml，對獻血員的篩檢已不符合要求。Page 26二抗體的檢測二抗體的