1、DOC格式論文，方便您的復制修改刪減乳潔安膠囊水提醇沉工藝研究（作者：單位：郵編：）作者：王燕燕，張怡，馮蕓，劉紅兵【摘要】目的正交實驗法優選乳潔安膠囊的提取工藝。方法以浸膏得率，橙皮苷含量作為指標，采用L9（34）正交表優選乳潔安膠囊制備過程中水提醇沉工藝。結果乳潔安膠囊最佳水提工藝為藥材 10倍量水提取兩次，1 h/次;最佳醇沉工藝為濃縮藥液相對密度 1.20， 含醇量為70%。結論該水提醇沉工藝科學、合理。【關鍵詞】 乳潔安膠囊正交實驗水提醇沉橙皮苷乳潔安膠囊是三峽大學第一臨床醫學院根據中醫辨證理論研制 的一種純中藥復方制劑，由丹參、當歸、陳皮、蒲公英等組成，具有 疏肝理氣，活血化淤和軟

2、堅散結之功效1 ，臨床上用于治療乳腺增 生等乳腺疾病多年，療效滿意。但原方為湯劑，臨床上使用不便，現 擬將其改作硬膠囊劑。本實驗采用正交實驗法對該膠囊劑的水提醇沉 工藝進行了研究24 。1儀器與材料1.1儀器德國KNAVER高效液相色譜儀（K-2501紫外檢測器， K-501溶劑輸液泵，Eurochrom色譜工作站）；KQ-100B型超聲波清 洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BP211D電子天平（Satorius）； DHG-9030A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海一恒科技有限公司）。1.2試藥橙皮苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，110721-200512）； 甲醇為色譜純；水為重蒸餾水，其余試

3、劑均為分析純。2方法與結果2.1水提工藝條件的優選2.1.1因素水平的確定對水提過程中的主要影響因素（加水量、煎煮次數和煎煮時間）進行考察，每個因素取3個水平，選用L9（34） 正交設計表安排實驗，通過測定出膏率和橙皮苷含量來確定最佳提取 工藝。表1水煎煮實驗因素水平（略）2.1.2實驗方法與浸膏得率的測定實驗方法：按處方中各藥材的比例，分別稱取丹參、當歸、 陳皮、蒲公英等藥材共9份，按表2安排正交實驗。將煎煮液過濾， 濃縮或稀釋定容于1 000 ml量瓶中，搖勻，取25 ml蒸干備用（用 于含量測定），余下的975 ml濃縮成浸膏，置真空干燥箱（80 C）中 減壓干燥。浸膏得率的測定：將減壓

4、干燥所得干浸膏稱重浸膏得率（%）=所得浸膏凈重取樣量X 100%2.1.3橙皮苷含量測定色譜條件：色譜柱為 AT.Chrom C18柱（4.6 mm X250 mm , 5 g）;流動相為甲醇-水（45 55）;流速1.0 ml/min ;紫外檢 測波長288 nm ;柱溫25 C；進樣量20譏理論塔板數按橙皮苷峰 計算應不低于3 000 :57。對照品溶液的制備：取橙皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.404 0 mg/ml的標準對照溶液，備用。標準曲線的制備：分別精密量取橙皮苷標準對照溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml于10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。按上述色譜條件，

5、各進樣20譏記錄色譜峰面積。以色譜峰面積為縱坐標，橙皮苷濃度（mg/ml ）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程為：Y二593.53 X - 3.984 0 （r = 0.999 3 ）。結果表明：橙皮苷在 0.0404 0 0.202 0 mg/ml的濃度范圍內呈線性關系。供試品溶液的制備：分別取水煎煮正交實驗中制得的含量測定樣品（從1 000 ml中取得25 ml藥液）蒸干得浸膏，加甲醇20 ml， 超聲30 min，使充分溶解后，過濾到25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，備用 測定波長的選擇：分別取橙皮苷對照品溶液和流動相，置紫外分光光度計中，于200400 nm波長范圍內掃描，結果橙皮苷 在2

6、88 nm波長處有最大吸收，故選擇288 nm為測定波長。含量測定：分別取上述樣品20山進行測定，結果見表2。表2水提正交實驗結果及方差分析（略）2.1.4水提正交實驗結果及方差分析結果見表 2。以出膏率為指標，極差 R值顯示各因素影響作用主次為 CA B;在給定的水平條件下，各因素對出膏率的影響情況為C3 C2 C1，B3 B2 B1，A3 A2 A1。方差分析結果表明，加水量，煎煮時間和煎煮次數對出膏率均無顯著性影響，綜合節省時間和資源 的原則，單從出膏率的角度考慮，其優選工藝條件為A2B1C2。以橙皮苷含量為指標，極差R值大小顯示各因素影響作用 主次為AB C;在給定的水平條件下，各因素

7、對橙皮苷含量的影 響情況為 A3 A2 A1，B3 B2 B1，C3 C2 C1。方差分析結 果表明，加水量對橙皮苷含量有顯著性影響，而煎煮時間和煎煮次數對橙皮苷含量均無顯著性影響，綜合節省時間和資源的原則，單從橙 皮苷含量的角度考慮，其優選工藝條件為 A3B2C2。綜合分析：從橙皮苷含量結果分析表明，隨著加水量的增加，提取效果越來越好，但從出膏率結果分析來看，加水量并沒有顯 著性影響，收膏率增大幅度較小。為了縮短煎煮時間，節約能源，降 低成本，選擇A2B1C2為水煎煮優選工藝條件，因此擬定乳潔安膠 囊水煎煮提取的最佳工藝條件為取藥材加入10倍量水煎煮提取兩次，1 h/次。2.2醇沉工藝條件的

8、優選2.2.1因素水平的確定為了除去雜質并最大限度地保留有效成 分，減小服用劑量，在濃縮的水提液中加入適量乙醇以除去其中的淀 粉、樹膠等多糖類和蛋白質等雜質，選用L9（34）正交表對醇沉過程中的主要影響因素（加醇濃度和浸膏密度）進行考察，每個因素取 3個水平，通過測定出膏率和橙皮苷含量來確定最佳純化工藝。表3實驗因素水平2.2.2實驗方法與浸膏得率的測定實驗方法：按處方中各藥材的比例，分別稱取丹參、當歸、 陳皮、蒲公英等藥材共9份，按表3安排正交實驗。將煎煮液過濾， 濃縮至相對密度為1.25 （20 C），等分為3份；分別加水調節相對密 度為1.15，1.20和1.25 ；再各自等分為3等份，

9、編號為19,分別 置于250 ml錐形瓶中。在19號藥液中加入相應量的95%乙醇， 使藥液含醇量符合正交設計要求。 加乙醇時邊加邊攪拌，用封口膠封 住瓶口，靜置24 h。將19號藥液分別過濾，濃縮或稀釋至100 ml 量瓶中，量取25 ml于蒸發皿，水浴蒸干，用于測定橙皮苷含量。余下75 ml濃縮成浸膏，置真空干燥箱（80 C）中減壓干燥浸膏得率的測定：將減壓干燥所得干浸膏稱重，按下式計算浸膏得率。浸膏得率（%）=所得浸膏凈重取樣量X 100%223橙皮苷的含量測定供試品溶液的制備：分別取醇沉正交實驗中制得的含量測 定樣品（從1 000 ml中取得25 ml藥液）蒸干得浸膏，力口甲醇20 ml

10、, 超聲30 min，使充分溶解后，過濾到25 ml量瓶中，加甲醇至刻度， 備用。含量測定：分別取上述樣品20山按2.1.3 ”項下色譜條件 進行測定。結果見表4。2.4醇沉正交實驗結果及方差分析結果見表 4。表4醇沉正交 實驗設計表與直觀分析（略）以出膏率為指標，極差R值顯示各因素影響作用主次為 AB; 在給定的水平條件下，各因素對出膏率的影響情況為A1 A2 A3，B1 B2 B3。方差分析結果表明，B因素對出膏率無顯著性影響， 綜合節省時間和資源的原則，單從出膏率的角度考慮，其優選工藝條 件為A2B2以橙皮苷含量為指標，各因素的影響作用大小為AB;在給定的水平條件下，各因素對橙皮苷含量的

11、影響情況為A2 A3 A1 , B3 B2 B1。方差分析結果表明，A、B兩因素對橙皮苷含量 均無顯著的影響，綜合節省時間和資源的原則，單從橙皮苷含量的角 度考慮，其優選工藝條件為A2B2。綜合分析：從出膏率和橙皮苷含量結果分析表明，兩者優 選工藝條件為A2B2，因此擬定乳潔安膠囊醇沉的最佳工藝條件為合 并濾液濃縮至相對密度為1.20，加乙醇使含醇量達70%。2.3水提醇沉最佳工藝的驗證2.3.1水煎煮最佳工藝驗證按處方比例稱取當歸、丹參、陳皮、 蒲公英等藥材共3份，按水提正交實驗所選擇的最佳工藝條件進行3次重復實驗。分別測定浸膏得率和橙皮苷含量。結果見表5。表5水煎煮最佳工藝驗證（略）2.3

12、.2醇沉最佳工藝驗證將“2.3.1 ”項中所得3份煎煮液按醇沉 正交實驗所選擇的最佳工藝條件進行 3次重復實驗。分別測定浸膏得 率和橙皮苷含量。結果見表6。表6醇沉最佳工藝驗證（略）2.4乳潔安膠囊的制備2.4.1乳潔安膠囊的提取工藝按處方比例稱取藥材， 加入10倍 量水，浸泡30 min后開始加熱。加熱至微沸時開始計時，1 h后第一 次煎煮完畢，過濾，濾液備用。第 2次再加入10倍量水，煎煮1 h，過濾。合并兩次濾液，水浴上濃縮至相對密度為1.20，置1 000 ml具塞磨口瓶中，然后加入適量95%乙醇，加入乙醇的體積按下式計V=m X1 p XX1-x式中，V為加入95%乙醇的體積（ml）

13、;m為藥液質量（g）;p為95%乙醇的密度（g/ml）; x為藥液含醇量，根據優選為70%。加乙醇時邊加邊攪拌，加完后用封口膠封住瓶口，靜置24 h后用布氏漏斗進行抽濾，濾液減壓濃縮并于水浴上揮干，放入80 C 真空干燥箱干燥，所得干浸膏粉供制備膠囊。242乳潔安膠囊的制劑工藝乳潔安膠囊的處方組成：浸膏粉 270g，淀粉180g，硬脂酸鎂適量，制成 1000粒。乳潔安膠囊成型工藝優選：在進行成型工藝優選時，浸膏 粉碎過80目篩，將直接裝膠囊與制粒后裝膠囊進行對比。 結果顯示， 直接裝膠囊在檢查時存在裝量差異超限和極易吸濕潮解的問題，通過考察藥粉的流速和休止角，發現藥粉的流動性太差，休止角約 6

14、2 C， 裝量難于控制。為改善流動性，將浸膏干燥，研成細粉并過80目篩, 加入適量淀粉（藥粉：輔料二3 2）,混合均勻，以70%乙醇作為潤濕 劑，制粒（20目），于60 C干燥，整粒，加入硬脂酸鎂混勻，制成 膠囊，即得。膠囊型號的選擇：根據上述實驗所得數據及臨床處方用量折算，通過試裝膠囊，最終確定裝 1號膠囊乳潔安膠囊的制備工藝：將所得干浸膏粉研細，過篩，加入適量淀粉（藥粉：輔料二3 2），混合均勻，以70%乙醇作為潤濕劑, 制粒（20目），60C干燥，整粒，加入硬脂酸鎂混勻，制成膠囊，即 得。每粒膠囊重約0.45 g，每粒膠囊含浸膏粉約0.27 g。3討論為使藥材充分溶脹，故煎煮藥材前浸泡

15、30 min ;提取過程 中，為防止提取液濃度過大有效成分難以溶出，需要隨時補充水分。 藥材經由水煎煮后，在提取了有效成分的同時也溶解了大量的雜質 故對藥材水煎液進行醇沉處理，處理后的藥液除去了一部分如蛋白 質、糊化淀粉、粘液質等易溶于水而不溶于乙醇的雜質，但該方含糖 量大，浸膏吸濕性強，故采取二次干燥法，即中途將浸膏撬動，使其 干燥完全。以中藥浸膏為原料制備膠囊劑的關鍵是要改善粉粒的抗吸濕性與流動性，本處方由丹參，當歸，陳皮，蒲公英等組成。由于該 方提取的浸膏粉量較大，故加入的輔料量不能過大，實驗中通過考察 幾種常用輔料，最終確定選用淀粉作為添加劑。由于浸膏吸濕后黏性 很大，故用乙醇做潤濕劑

16、制粒，實驗過程發現選用95%乙醇制得的顆粒較好，能明顯改善藥粉的抗濕性，增加其流動性。粉末太細（ 80 目），則流動性差，生產中不易于分裝，容易造成產品裝量差異大， 制成20目的顆粒后，以上情況明顯改善。本工藝經中試、穩定性實 驗、質量檢測，結果證明該工藝合理可行。根據實驗結果以及實際生產，確定乳潔安膠囊制備最佳工藝為：藥材加入10倍量水煎煮提取兩次，1 h/次，合并濾液濃縮至 相對密度為1.20，加乙醇使含醇量達70%，靜置24 h，濾過，濾液 濃縮至稠浸膏，置真空干燥箱中干燥，干浸膏粉碎后與輔料混勻，加 入70%乙醇制粒，過20目篩，裝入1號膠囊，即得乳潔安膠囊。這 樣既保存了有效成分，減

17、少了藥粉體積，又保持了原方的治療效果。本實驗曾試圖采用HPLC法測定當歸中阿魏酸的含量作為指標，但由于阿魏酸化學性質較活潑，易發生氧化反應，故不宜作為 質量控制指標。實驗過程中曾用甲醇醋酸水（35 4 61 ）為流動 相8，未能達到基線分離且峰形不好；后經實驗摸索，最終選用甲 醇水（45 55），色譜峰峰形對稱性好，分離度好，理論塔板數較高。本實驗為乳潔安膠囊研究中的部分內容，有關橙皮苷含量 測定方法學研究將另文報道。【參考文獻】:1鄭虎占.中藥現代研究與應用M .北京：學苑出版社，1997: 87.:2向梅先，蘇漢文.正交實驗法優選牛黃清熱膠囊的提取工藝1:J.中藥材，2006，29 (2): 189.3魏琴，李平，李紅衛，等.正交試驗法優選保肝醒酒膠囊水煎工藝J.中國藥師，2007，10 (10): 967.:4 王巍杰