1、殘留溶劑殘留溶劑gcgc檢查方法的設計與驗證檢查方法的設計與驗證毛細管檢查方法毛細管檢查方法高青高青北京市藥品檢驗所北京市藥品檢驗所一、檢測器檢測器二、二、溶媒溶媒三、三、供試品溶液的配制供試品溶液的配制四、四、頂空瓶中樣品體積頂空瓶中樣品體積五、五、色譜柱色譜柱六、六、溫度溫度七、七、進樣方式進樣方式八、八、提高靈敏度提高靈敏度九、提高分離度九、提高分離度十、十、未知峰歸屬未知峰歸屬十一、十一、方法驗證方法驗證一、檢測器一、檢測器fidfid（火焰電離）、（火焰電離）、 npdnpd（熱表面電離）和（熱表面電離）和ecdecd（化學電離）（化學電離） ，應用范圍分別為有機物、，應用范圍分別為

2、有機物、氮氮/ /磷化合物、電負性物質（鹵代烴）。磷化合物、電負性物質（鹵代烴）。多數情況下，三氯甲烷、多數情況下，三氯甲烷、dmfdmf、dmsodmso均用均用fidfid檢測，但需采取一些措施提高檢測靈敏度檢測，但需采取一些措施提高檢測靈敏度。四氯化碳則必須用ecd檢測器。以下三點注意：fidfid質量型檢測器，對有機物均有響應，只質量型檢測器，對有機物均有響應，只是對難電離的鹵代烴和氮是對難電離的鹵代烴和氮/ /磷化合物靈敏度比磷化合物靈敏度比ecdecd、npdnpd檢測器低很多。檢測器低很多。ecdecd半選擇性的檢測器，對多種類型化合物半選擇性的檢測器，對多種類型化合物均有響應。

3、如果含有其他非鹵代烴溶劑，應均有響應。如果含有其他非鹵代烴溶劑，應進行系統適用性試驗考察分離度。進行系統適用性試驗考察分離度。如果采用如果采用fidfid檢測器，同時又采用填充柱測定檢測器，同時又采用填充柱測定三氯甲烷，靈敏度達不到限度要求。三氯甲烷，靈敏度達不到限度要求。二、溶媒二、溶媒選擇原則：選擇原則：溶解樣品溶解樣品，并對色譜柱無損壞，并對色譜柱無損壞l例如直接進樣不能含例如直接進樣不能含gcgc不能分析的無機鹽不能分析的無機鹽 頂空進樣：首選水，其次首選水，其次dmfdmf、dmsodmso、不揮發酸堿溶液，不可、不揮發酸堿溶液，不可使用鹽酸溶液和氨水，可選擇在使用鹽酸溶液和氨水，可

4、選擇在80809090c c加熱能加熱能溶解樣品的試劑。溶解樣品的試劑。溫度太高爆瓶溫度太高爆瓶如待查成分為苯、甲苯、三氯甲烷等水溶性不好的如待查成分為苯、甲苯、三氯甲烷等水溶性不好的溶劑，可采用混合液，即先用少量乙醇或甲醇溶解溶劑，可采用混合液，即先用少量乙醇或甲醇溶解待查溶劑再用水稀釋。待查溶劑再用水稀釋。當待測溶劑在有機相中的分配系數明顯大于水相當待測溶劑在有機相中的分配系數明顯大于水相（例如三氯甲烷），對頂空進樣來說采用有機相如（例如三氯甲烷），對頂空進樣來說采用有機相如dmfdmf為溶劑不是很好的選擇（為溶劑不是很好的選擇（k k大，靈敏度低）；如大，靈敏度低）；如果樣品也只能在有機

5、相中溶解，建議采用混合液。果樣品也只能在有機相中溶解，建議采用混合液。直接進樣：直接進樣：水、合適的有機溶媒或混合液。對于非極性水、合適的有機溶媒或混合液。對于非極性色譜柱，水對柱有影響，會縮短柱的使用壽色譜柱，水對柱有影響，會縮短柱的使用壽命。命。助溶方式：有報道加有報道加5%sds5%sds助溶。助溶。頂空小平加蓋后可超聲加熱助溶頂空小平加蓋后可超聲加熱助溶三、供試品溶液的配制三、供試品溶液的配制不可超聲或加熱助溶不可超聲或加熱助溶 ，以免殘留溶以免殘留溶劑揮發；如果頂空進樣，樣品置頂空瓶劑揮發；如果頂空進樣，樣品置頂空瓶封蓋之后可以超聲或加熱溶解。封蓋之后可以超聲或加熱溶解。大顆粒樣品不

6、可以研磨取樣，只能取原大顆粒樣品不可以研磨取樣，只能取原態樣品（或冷凍粉碎）。態樣品（或冷凍粉碎）。頂空進樣方式要求對照品配制與供試品頂空進樣方式要求對照品配制與供試品配制方法應絕對一致，否則頂空瓶中氣配制方法應絕對一致，否則頂空瓶中氣液平衡狀態有差異（基質效應）。液平衡狀態有差異（基質效應）。對照品配制最好采用標準加入法。對照品配制最好采用標準加入法。四、頂空瓶中樣品體積四、頂空瓶中樣品體積頂空樣品瓶中的樣品體積（vs）對分析結果影響很大，因為它直接決定了相比。cgco/（k）其中vg/vs，kcs/cg，當k時，樣品體積改變對靈敏度影響很小。 當k時，影響很大。例如，分析水中的二氧六環和環

7、己烷（三氯甲烷），60c平衡，兩者的k分別為642、0.04。當樣品體積由1ml增加至5ml，二氧六環的峰面積只提高了1.3，而環己烷卻提高了452。根據實際經驗來說，20ml頂空瓶樣品裝量為5ml比較適當。五、色譜柱五、色譜柱殘留溶劑檢查大多需要較高的分離度和檢測殘留溶劑檢查大多需要較高的分離度和檢測靈敏度，通常采用毛細管色譜柱。靈敏度，通常采用毛細管色譜柱。填充柱口填充柱口徑大，造成溶劑峰擴散，檢測靈敏度低。徑大，造成溶劑峰擴散，檢測靈敏度低。實踐證明，使用非極性至中等極性色譜柱，實踐證明，使用非極性至中等極性色譜柱，配合適當柱溫梯度可分離大部分有機溶劑。配合適當柱溫梯度可分離大部分有機溶

8、劑。通常當待查溶劑數目僅兩、三種時，可用極通常當待查溶劑數目僅兩、三種時，可用極性較強的色譜柱，出峰快，分析時間短；當性較強的色譜柱，出峰快，分析時間短；當溶劑數目較多時，還是優選非極性至中等極溶劑數目較多時，還是優選非極性至中等極性柱分離較好。性柱分離較好。非極性柱弱極性柱中低極性柱中等極性柱商品名dm-1, db-1, hp-1, spb-1, bp-1, se-30,rtx-1, zb-1, at-1,cp-sil5cb等dm-5, db-5,hp-5, spb-5, bp-5, se-52,rtx-5, zb-5, pe-5,se-54,cp-sil8cb等dm-35, db-35,

9、hp-35,spb-35, bp-35, rtx-35, zb-35, 等dm-1701, hp-1701,spb-7, zb-1701,rtx-1701, cp-sil19cb等化學成分100二甲基聚硅氧烷5%苯基-甲基聚硅氧烷35%苯基65%甲基聚硅氧烷14%氰苯基86%甲基聚硅氧烷中等/強極性極性柱極性柱商品名 db-225, hp-225,sp-225, bp-225,db-23，rtx-225,at-225, ov225等db-wax, hp-innowax,db-waxetr,cp-wax,zb-waxdb-ffap, hp-ffap,cp- ffap，ov-3501等化學成分 5

10、0氰丙基甲基聚硅氧烷聚乙二醇（peg）硝基對苯二酸改性的聚乙二醇六、溫度六、溫度色譜柱：初溫應接近樣品中最輕組分的沸點，色譜柱：初溫應接近樣品中最輕組分的沸點，而終溫則取決于最重組分的沸點，升溫速率而終溫則取決于最重組分的沸點，升溫速率則要依樣品的復雜程度。則要依樣品的復雜程度。進樣口：一般接近沸點最高的組分，但要低進樣口：一般接近沸點最高的組分，但要低于易分解組分的分解溫度。常用的條件是于易分解組分的分解溫度。常用的條件是250250c c。檢測器：原則是避免流出色譜柱的組分冷凝。檢測器：原則是避免流出色譜柱的組分冷凝。fidfid檢測器通常設置為檢測器通常設置為300300c c。頂空瓶平

11、衡溫度：溫度越高，蒸汽壓越高，頂空氣頂空瓶平衡溫度：溫度越高，蒸汽壓越高，頂空氣體的濃度越高，分析靈敏度越高。待測組分的沸點體的濃度越高，分析靈敏度越高。待測組分的沸點越低，對溫度越敏感。但溫度的改變只影響分配系越低，對溫度越敏感。但溫度的改變只影響分配系數數k k，并不影響相比，并不影響相比。例如水溶液中的甲醇、甲乙酮、甲苯、正己烷例如水溶液中的甲醇、甲乙酮、甲苯、正己烷和四氯乙烯，和四氯乙烯，8080c c平衡溫度與平衡溫度與4040c c平衡溫度相比，平衡溫度相比，甲醇在頂空氣體中的濃度增加甲醇在頂空氣體中的濃度增加5.155.15倍，甲乙酮濃度倍，甲乙酮濃度增加增加2.612.61倍，

12、甲苯只增加倍，甲苯只增加25%25%，而正己烷和四氯乙，而正己烷和四氯乙烯，分別增加烯，分別增加2.6%2.6%和和10.4%10.4%。實際工作中往往是在滿足靈敏度的條件下，選實際工作中往往是在滿足靈敏度的條件下，選擇較低的平衡溫度。過高的溫度可能導致某些組分擇較低的平衡溫度。過高的溫度可能導致某些組分的分解和氧化。一般采用高沸點溶劑時，樣品比較的分解和氧化。一般采用高沸點溶劑時，樣品比較穩定的情況下，推薦穩定的情況下，推薦8080c c左右的平衡溫度。左右的平衡溫度。七、進樣方式七、進樣方式作為殘留溶劑檢查，頂空進樣有許多優越性，作為殘留溶劑檢查，頂空進樣有許多優越性，不需要對樣品進行特殊

13、處理，不用擔心樣品不需要對樣品進行特殊處理，不用擔心樣品中不揮發組分對中不揮發組分對gcgc分析的影響。直接進樣對分析的影響。直接進樣對儀器要求低，由于部分實驗室不具備頂空進儀器要求低，由于部分實驗室不具備頂空進樣器，該方法的應用也具普遍性。樣器，該方法的應用也具普遍性。進樣方式選擇需注意的幾點：進樣方式選擇需注意的幾點： 對于待測溶劑在溶解樣品的溶劑中溶解度小對于待測溶劑在溶解樣品的溶劑中溶解度小（分配系數小）的情況下，例如三氯甲烷在（分配系數小）的情況下，例如三氯甲烷在水溶液中，采用頂空進樣方式測得的靈敏度水溶液中，采用頂空進樣方式測得的靈敏度將大于直接進樣；反之，例如甲醇與水互溶將大于直

14、接進樣；反之，例如甲醇與水互溶性好，直接進樣的靈敏度將大于頂空進樣。性好，直接進樣的靈敏度將大于頂空進樣。測定二氯甲烷、三氯甲烷等鹵代烴時，如果測定二氯甲烷、三氯甲烷等鹵代烴時，如果溶劑為水，直接進樣容易造成溶劑為水，直接進樣容易造成fidfid檢測器滅火，檢測器滅火，此時優選頂空進樣。此時優選頂空進樣。無論是采用細口徑或粗口徑，均可選擇無論是采用細口徑或粗口徑，均可選擇不分流進樣，提高靈敏度。當然，采用不分流進樣，提高靈敏度。當然，采用不分流進樣也要考慮溶媒性質，揮發性不分流進樣也要考慮溶媒性質，揮發性太大的溶媒對色譜柱污染較大。太大的溶媒對色譜柱污染較大。直接進樣要考慮樣品性質。直接進樣要

15、考慮樣品性質。頂空進樣體積可達到頂空進樣體積可達到2ml2ml氣體，而直接氣體，而直接進樣只能進樣只能1 1至至3ul3ul液體。液體。 八、提高靈敏度對于限度要求很嚴格的溶劑，或貴重樣品對于限度要求很嚴格的溶劑，或貴重樣品取樣量有限制時，取樣量有限制時，或檢測器對該溶劑靈敏度或檢測器對該溶劑靈敏度低的情況下，低的情況下，采取一些措施提高靈敏度是采取一些措施提高靈敏度是方法成敗的關鍵。方法成敗的關鍵。溶劑溶劑溫度溫度不分流進樣不分流進樣頂空瓶體積頂空瓶體積利用鹽析作用，即在水溶液中加入無機鹽利用鹽析作用，即在水溶液中加入無機鹽（硫酸鈉）來改變揮發性組分的分配系數。（硫酸鈉）來改變揮發性組分的分

16、配系數。常用高濃度，甚至用飽和濃度。鹽析作用對常用高濃度，甚至用飽和濃度。鹽析作用對極性組分的影響遠大于對非極性組分的影響。極性組分的影響遠大于對非極性組分的影響。例如在水溶液樣品溶劑中加入例如在水溶液樣品溶劑中加入0.01mol/l0.01mol/l氯化鈉溶液可使甲醇、乙醇靈敏度氯化鈉溶液可使甲醇、乙醇靈敏度提高提高5 5倍（這種方法不常用）。倍（這種方法不常用）。在有機溶液中加入水，可以減少有機物在有在有機溶液中加入水，可以減少有機物在有機相中的溶解度，增大其在頂空氣體中的含機相中的溶解度，增大其在頂空氣體中的含量（常用）。量（常用）。例如采用例如采用fidfid檢測器測定三氯甲烷，檢測器

17、測定三氯甲烷，dmfdmf為溶媒，頂空進樣為溶媒，頂空進樣1ml1ml氣體，分流比氣體，分流比5 5：1 1，限，限度濃度的對照品溶液檢不出峰。度濃度的對照品溶液檢不出峰。改為：水為溶媒，三氯甲烷用少量乙醇改為：水為溶媒，三氯甲烷用少量乙醇溶解，水稀釋至刻度，頂空進樣溶解，水稀釋至刻度，頂空進樣2ml2ml氣體，不氣體，不分流進樣，結果限度濃度的對照品溶液可檢分流進樣，結果限度濃度的對照品溶液可檢出很明顯的色譜峰，靈敏度可達到限度的出很明顯的色譜峰，靈敏度可達到限度的五十分之一。五十分之一。九、改善分離度v程序升溫程序升溫v增大分流比增大分流比十、未知峰歸屬對于供試品色譜圖中出現的未知峰，應進

18、行對于供試品色譜圖中出現的未知峰，應進行確認。首先分析是否為樣品裂解峰，其次核確認。首先分析是否為樣品裂解峰，其次核實是否為應控制溶劑，可采用雙柱定性方式。實是否為應控制溶劑，可采用雙柱定性方式。十一、方法驗證方法的線性范圍主要由檢測器的特性方法的線性范圍主要由檢測器的特性決定決定檢測限由檢測器、方法決定檢測限由檢測器、方法決定回收率加樣回收率回收率加樣回收率重復性、中間精密度和重現性重復性、中間精密度和重現性藥檢所殘留溶劑方法復核內容、藥檢所殘留溶劑方法復核內容、常見問題及處理常見問題及處理一、復核內容一、復核內容靈敏度靈敏度用申報方法檢驗所提供樣品，比較結果用申報方法檢驗所提供樣品，比較結

19、果二、常見問題及處理措施二、常見問題及處理措施靈敏度低，限度溶液不出峰靈敏度低，限度溶液不出峰（源于檢測器或（源于檢測器或方法）方法）分離度不好；樣品出峰并與溶劑峰不能達到分離度不好；樣品出峰并與溶劑峰不能達到基線分離；圖譜基線不好雜峰多基線分離；圖譜基線不好雜峰多（柱溫、色（柱溫、色譜柱或進樣方式）譜柱或進樣方式）溶媒不合適溶媒不合適供試品配制方法不當供試品配制方法不當較大未知峰應進行歸屬較大未知峰應進行歸屬復核結果不合格復核結果不合格方法評價方法評價一、首先關注待測溶劑有哪些？一、首先關注待測溶劑有哪些？是否有下述三類溶劑：是否有下述三類溶劑：鹵代烴（三氯甲烷、四氯化碳）鹵代烴（三氯甲烷、

20、四氯化碳）氮氮/ /磷化合物（磷化合物（dmsodmso、dmfdmf）限度小的溶劑（苯、四氫呋喃等限度小于限度小的溶劑（苯、四氫呋喃等限度小于0.0x0.0x）如果有上述物質應警惕方法的靈敏度是否能達如果有上述物質應警惕方法的靈敏度是否能達到檢測限度要求。到檢測限度要求。二、是否使用了專屬檢測器？二、是否使用了專屬檢測器？fidfid：有機物：有機物ecdecd：鹵代烴（三氯甲烷、四氯化碳等）：鹵代烴（三氯甲烷、四氯化碳等）npdnpd：氮：氮/ /磷化合物（磷化合物（dmfdmf、dmsodmso等）等） 同時具備上述三種檢測器的實驗室不多。請注意同時具備上述三種檢測器的實驗室不多。請注意下述三點：下述三點：四氯化碳必須用四氯化碳必須用ecdecd！不可用不可用fid fid 填充柱檢查前述三類物質，靈敏度低填充柱檢查前述三類物質，靈敏度低使用使用ecdecd進行分離度試驗應考慮非鹵代烴！進行分離度試驗應考慮非鹵代烴！三、溶媒三、溶媒根據原料溶解性，溶媒是否能溶解樣品？根據原料溶解性，溶媒是否能溶解樣品？ 水、水、dmfdmf、dmsodmso、不揮發酸堿溶液，不可使用鹽酸、不揮發酸堿溶液，不可使用鹽酸液和氨水，頂空進樣可選擇在液和氨水，頂空進樣可選擇在80908090