1、菊花的組織培養(yǎng)菊花的組織培養(yǎng)課題背景課題背景植物細(xì)胞或組織，發(fā)育成完植物細(xì)胞或組織，發(fā)育成完整植株，需要什么條件？整植株，需要什么條件？什么叫植物細(xì)胞的全能性什么叫植物細(xì)胞的全能性？（1 1）概念）概念：具有某種生物全部遺傳信息具有某種生物全部遺傳信息的的任何一個細(xì)胞任何一個細(xì)胞，具有發(fā)育成完整個體的潛能。具有發(fā)育成完整個體的潛能。 . .植物細(xì)胞全能性表現(xiàn)的條件：植物細(xì)胞全能性表現(xiàn)的條件：離體、適宜營養(yǎng)、一定比例的激素、離體、適宜營養(yǎng)、一定比例的激素、無菌條件、適宜溫度、光照無菌條件、適宜溫度、光照當(dāng)植物細(xì)胞，脫離了原來所在的植物體的器官或組織，而處當(dāng)植物細(xì)胞，脫離了原來所在的植物體的器官或

2、組織，而處于于離體狀態(tài)離體狀態(tài)時，在一定的時，在一定的營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)、激素激素和和其它外界條件其它外界條件的作的作用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整植株完整植株。. .植物細(xì)胞具有全能性植物細(xì)胞具有全能性（3 3）（2 2）原因）原因：細(xì)胞內(nèi)，含有：細(xì)胞內(nèi)，含有某種生物全部遺傳信息某種生物全部遺傳信息植物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)為什植物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)為什么一定需要離體條件？么一定需要離體條件？（一）植物組織培養(yǎng)的過程：（一）植物組織培養(yǎng)的過程：生物的全部遺傳信息，仍具有發(fā)生物的全部遺傳信息，仍具有發(fā)育成完整新個體的育成完整新個體的。離體的植物離體的植物組織或細(xì)胞組

3、織或細(xì)胞外植體外植體有絲分裂有絲分裂脫分化脫分化愈傷愈傷組織組織長出叢芽長出叢芽生根生根移栽成活移栽成活長成植株長成植株再分化再分化（二）影響植物組織培養(yǎng)的因素：（二）影響植物組織培養(yǎng)的因素：菊花組織培養(yǎng)的實驗操作程序1.1.配制各種母液配制各種母液大量元素：濃縮大量元素：濃縮1010倍；倍；微量元素：濃縮微量元素：濃縮100100倍；倍；二者均常溫保存二者均常溫保存激素、維生素類激素、維生素類用量少的有機物用量少的有機物按按1mg/mL1mg/mL配成母液配成母液（1 1）一般要求）一般要求（2 2）配制母液的意義：）配制母液的意義： 減少工作量；減少工作量； 減少微量試劑稱量所減少微量試劑

4、稱量所造成的誤差造成的誤差 （3 3）配制母液流程：）配制母液流程：稱量稱量溶解溶解混合混合定容定容標(biāo)記標(biāo)記保存（保存（4 4O OC C）（2 2）配制母液的意義：）配制母液的意義： 減少工作量；減少工作量； 減少微量試劑稱量所造成的誤差減少微量試劑稱量所造成的誤差 微量元素微量元素 大量元素大量元素有機物有機物鐵鹽鐵鹽2.2.配制培養(yǎng)基，高壓蒸汽滅菌配制培養(yǎng)基，高壓蒸汽滅菌 依次加入大量元素、微量元素、有機物、激素依次加入大量元素、微量元素、有機物、激素母液母液根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計算計算用量用量將稱好的將稱好的瓊脂瓊脂加入加入800mL800mL蒸餾水，加熱，

5、蒸餾水，加熱，熔化熔化瓊脂瓊脂加入加入30g30g蔗糖蔗糖，攪拌均勻，攪拌均勻加蒸餾水加蒸餾水定容定容到到1000mL1000mL調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pHpH 分裝分裝到錐形瓶中到錐形瓶中（每瓶（每瓶50mL50mL100mL100mL）高壓蒸汽高壓蒸汽滅菌滅菌立式高壓滅菌鍋立式高壓滅菌鍋要兼顧要兼顧藥劑的消毒效果和外植體的耐受力藥劑的消毒效果和外植體的耐受力幼葉、幼莖（枝）、花瓣、嫩芽等生長旺盛的幼幼葉、幼莖（枝）、花瓣、嫩芽等生長旺盛的幼嫩組織嫩組織 花藥（花粉）花藥（花粉）進行消毒進行消毒外植體外植體消毒液要完全消毒液要完全浸沒外植體浸沒外植體 消毒液：消毒液：70%70%酒精、酒精、0.1%HgC

6、l0.1%HgCl、 10%10%次氯酸鈉次氯酸鈉消毒時間依消毒時間依據(jù)材料而定據(jù)材料而定外植體外植體啟動超凈工作啟動超凈工作臺臺，如打開吹風(fēng)和照明燈，如打開吹風(fēng)和照明燈開關(guān)等等。開關(guān)等等。做好接種準(zhǔn)備工作做好接種準(zhǔn)備工作在等待外植體消毒的同時，做好接種準(zhǔn)備工作：在等待外植體消毒的同時，做好接種準(zhǔn)備工作：用酒精進行用酒精進行桌面消毒。桌面消毒。用酒精棉球?qū)τ镁凭耷驅(qū)ε囵B(yǎng)基和培養(yǎng)培養(yǎng)基和培養(yǎng)基瓶口進行消基瓶口進行消毒。毒。準(zhǔn)備無菌紙準(zhǔn)備無菌紙點燃酒精燈點燃酒精燈灼燒接種工具時，要注意安全灼燒接種工具時，要注意安全瓶外壁貼上標(biāo)簽：植物名稱、接種日期、姓名等瓶外壁貼上標(biāo)簽：植物名稱、接種日期、姓名

7、等接種后，在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動灼燒瓶口，加蓋接種后，在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動灼燒瓶口，加蓋貼標(biāo)簽：貼標(biāo)簽：植物名稱植物名稱接種日期接種日期姓名等姓名等愈傷組織開始分化愈傷組織開始分化愈傷組織愈傷組織培養(yǎng)室里培養(yǎng)箱中的培養(yǎng)培養(yǎng)室里培養(yǎng)箱中的培養(yǎng)切割、分瓶擴大繁殖切割、分瓶擴大繁殖珍珠巖珍珠巖：是一種火山噴發(fā)的酸性熔巖，是一種火山噴發(fā)的酸性熔巖，經(jīng)急劇冷卻經(jīng)急劇冷卻而成的玻璃質(zhì)巖石，有弧形或圓形裂隙，而成的玻璃質(zhì)巖石，有弧形或圓形裂隙，如珍珠的結(jié)構(gòu)，所以被命名為珍珠巖。如珍珠的結(jié)構(gòu)，所以被命名為珍珠巖。是一種天然、無毒，在高溫作用下會膨是一種天然、無毒，在高溫作用下會膨脹比較少見的礦物質(zhì)。屬于硅酸鹽。脹比

8、較少見的礦物質(zhì)。屬于硅酸鹽。 蛭蛭 石：石：六、煉苗、移栽六、煉苗、移栽1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈、接種的無菌操作（酒精、酒精燈灼燒）灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時間。、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時間。在整個操作過程中，在整個操作過程中， 是如何來實現(xiàn)是如何來實現(xiàn)無菌無菌環(huán)境的？環(huán)境的？2.外植體的生理狀態(tài)外植體的生理狀態(tài)是成功進行組織培養(yǎng)的重要條是成功進行組織培養(yǎng)的重要條件之一。件之一。 生長旺盛的嫩枝生理狀況好生

9、長旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導(dǎo)，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。脫分化和再分化。1. 1. 植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料，植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料，體積小、抗體積小、抗性差，對培養(yǎng)條件的要求性差，對培養(yǎng)條件的要求較高較高。用于植物組織培養(yǎng)。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，同樣的培養(yǎng)基，同樣適合于某些微生物的生長適合于某些微生物的生長，如一些，如一些細(xì)菌、真菌等的生長。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的細(xì)菌、真菌等的生長。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會導(dǎo)致實驗前功盡棄，因此要進行嚴(yán)格的污染，就會導(dǎo)致實驗前功盡棄，因此要進行嚴(yán)格的無菌操作。無菌操作。因為，花卉組織培養(yǎng)是在實驗室中進行，因為，花卉組織培養(yǎng)是在實驗

10、室中進行，條件是可控的。條件是可控的。此時的組織或細(xì)胞為離體的，即細(xì)胞所生活的環(huán)境此時的組織或細(xì)胞為離體的，即細(xì)胞所生活的環(huán)境為液體有機物營養(yǎng)環(huán)境，而不是能體現(xiàn)其整個植物為液體有機物營養(yǎng)環(huán)境，而不是能體現(xiàn)其整個植物體的光能自養(yǎng)體的光能自養(yǎng)在培養(yǎng)過程中，是脫分化、再分化的過程，隨著芽在培養(yǎng)過程中，是脫分化、再分化的過程，隨著芽和根的形成，就具有了自養(yǎng)的能力，是由細(xì)胞到一和根的形成，就具有了自養(yǎng)的能力，是由細(xì)胞到一個個體的演變過程個個體的演變過程1、高等植物是光能自養(yǎng)型生物，為什么在植物組、高等植物是光能自養(yǎng)型生物，為什么在植物組織培養(yǎng)過程中還需要提供有機物培養(yǎng)基？織培養(yǎng)過程中還需要提供有機物培養(yǎng)

11、基？2、培養(yǎng)過程中為什么需要進行光照、培養(yǎng)過程中為什么需要進行光照思思 考考1、外植體帶菌、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底器具滅菌不徹底3、接種操作時帶入、接種操作時帶入4、環(huán)境不清潔、環(huán)境不清潔結(jié)合錄像結(jié)合錄像外植體滅菌與接種操作外植體滅菌與接種操作，談?wù)劷M織培養(yǎng)污染的主，談?wù)劷M織培養(yǎng)污染的主要途徑及怎樣預(yù)防污染？要途徑及怎樣預(yù)防污染？菊花的組織培養(yǎng)JLSSYJLSSYBYHBYH 菊花是菊科菊屬的多年生宿根草本植物,是我國的傳統(tǒng)名花和世界四大切花之一 長期以來菊花采用分株、扦插等無性繁殖方法進行繁殖 但是傳統(tǒng)的繁殖方法易受環(huán)境影響,繁殖周期長,隨著市場需 求的急劇增

12、加,已經(jīng)不能滿足市場日益發(fā)展的需要。 植物組織培養(yǎng)具有增殖效率高、繁殖速度快的特點,可以用較短的時間和較少的空間生產(chǎn)出大量的試管苗扦插扦插嫁接嫁接壓條壓條 同常規(guī)的無性繁殖方法相比，組織培養(yǎng)快速繁殖法主要具有以下優(yōu)點：（1 1）快速。）快速。采用常規(guī)的方法如分株法，一棵花卉一年一般只能生產(chǎn)幾株或幾十株，但用組織培養(yǎng)的方法則每年可以繁殖出幾萬甚至數(shù)百萬的小植株。（2 2）周年生產(chǎn)。）周年生產(chǎn)。花卉組織培養(yǎng)快速繁殖是在實驗室中進行，因條件可控，所以不受季節(jié)限制，可以全年進行連續(xù)生產(chǎn)。而常規(guī)的無性繁殖則受季節(jié)限制，只能在花卉生長季節(jié)進行繁殖。（3 3）經(jīng)濟效益高。）經(jīng)濟效益高。花卉組織培養(yǎng)快速繁殖所

13、需要的空間小，在一個200平方米的培養(yǎng)室內(nèi)一年可生產(chǎn)試管苗上百萬株。如按每株1元計算，每年產(chǎn)值上百萬元。（4 4）以組織培養(yǎng)繁殖的種苗與母株有著相同的遺傳基因。）以組織培養(yǎng)繁殖的種苗與母株有著相同的遺傳基因。所以使用這項技術(shù)可讓優(yōu)良的品種不斷地延續(xù)。組織培養(yǎng)與常規(guī)繁殖相比優(yōu)點眾多組織培養(yǎng)與常規(guī)繁殖相比優(yōu)點眾多植物組織培養(yǎng)過程示意圖植物組織培養(yǎng)過程示意圖 2、上面的示意圖中還有什么地方不夠完善的？、上面的示意圖中還有什么地方不夠完善的？沒有進行滅菌處理，試管也沒有做密封等。沒有進行滅菌處理，試管也沒有做密封等。專題專題3 課題課題1 菊花的組織培養(yǎng)菊花的組織培養(yǎng)試評價下列操作正確與否試評價下列操

14、作正確與否本課題內(nèi)容小結(jié)本課題內(nèi)容小結(jié)菊花組織培養(yǎng)基礎(chǔ)知識基礎(chǔ)知識實驗操作實驗操作植物體的植物體的組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)影響組織培影響組織培養(yǎng)的因素養(yǎng)的因素細(xì)胞分化細(xì)胞分化細(xì)胞全能性細(xì)胞全能性組織培養(yǎng)過程組織培養(yǎng)過程營養(yǎng)營養(yǎng)激素激素環(huán)境條件環(huán)境條件MS固體培養(yǎng)基制備固體培養(yǎng)基制備外植體消毒外植體消毒接種接種培養(yǎng)培養(yǎng)移栽移栽栽培栽培作業(yè)：作業(yè)：P361、在植物組織培養(yǎng)過程中，為什么要進行一系、在植物組織培養(yǎng)過程中，為什么要進行一系列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作。列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作。2、在選取菊花莖段是，為什么要選取生長旺盛、在選取菊花莖段是，為什么要選取生長旺盛的嫩枝？的嫩枝？三、接種

15、外植體三、接種外植體1.前期準(zhǔn)備前期準(zhǔn)備啟動超凈工啟動超凈工作臺（打開作臺（打開吹風(fēng)和照明吹風(fēng)和照明燈開關(guān)）燈開關(guān)）在等待外植體在等待外植體消毒的同時，消毒的同時，做后面的準(zhǔn)備做后面的準(zhǔn)備工作工作如點燃如點燃酒精燈、用酒酒精燈、用酒精棉進行培養(yǎng)精棉進行培養(yǎng)基和培養(yǎng)基瓶基和培養(yǎng)基瓶口的消毒、桌口的消毒、桌面的酒精消毒、面的酒精消毒、準(zhǔn)備無菌紙等。準(zhǔn)備無菌紙等。倒掉消毒液倒掉消毒液用無菌水反復(fù)沖洗多次用無菌水反復(fù)沖洗多次灼燒接種工具，注意安全灼燒接種工具，注意安全2.2.在酒精燈旁操作進行外植體切割和接種在酒精燈旁操作進行外植體切割和接種在無菌紙上切割外植體在無菌紙上切割外植體灼燒瓶口和鑷子灼燒瓶

16、口和鑷子用鑷子夾取外植體，迅速接種于培養(yǎng)基中，盡量使切口接觸用鑷子夾取外植體，迅速接種于培養(yǎng)基中，盡量使切口接觸培養(yǎng)基（幼嫩和細(xì)胞可充分接觸營養(yǎng)物質(zhì)，該細(xì)胞細(xì)胞沒有細(xì)培養(yǎng)基（幼嫩和細(xì)胞可充分接觸營養(yǎng)物質(zhì)，該細(xì)胞細(xì)胞沒有細(xì)胞外的保護層）胞外的保護層）1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精、接種的無菌操作（酒精、酒精燈燈灼燒）灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時間。段時間。3、在整個操作過程中，是如何來實現(xiàn)無菌環(huán)境的？、在整個操作過程中，是如何來實現(xiàn)無菌環(huán)境的？【實驗?zāi)康摹俊緦嶒災(zāi)康摹?1.知道組織培養(yǎng)技術(shù)的基本原理知道組織培養(yǎng)技術(shù)的基本原理 2.嘗試植物組織培養(yǎng)技術(shù)的基本環(huán)節(jié)（培養(yǎng)基的配制嘗試植物組織培養(yǎng)技術(shù)的基本環(huán)節(jié)（培養(yǎng)基的配制及滅菌、外植體的選擇和消毒、接種的技術(shù)性操作）及滅菌、外植體的選擇和消毒、接種的技術(shù)性操作） 3.探究植物激素在植物組織