1、艾滋病、梅毒、乙肝 實驗室檢測技術 白志永 2015.12.30 艾滋病 抗體檢測及 樣品處理 實驗室 質量管理 生物安全 質量控制 梅毒 乙肝 檢測要點 艾滋病抗體檢測及樣品處理艾滋病抗體檢測及樣品處理 一、一、HIV抗體檢測篩查方法抗體檢測篩查方法 酶聯免疫吸附試驗（ELISA） 化學發光或免疫熒光試驗 快速檢測（RT） （建議配備合格的快速檢測試劑，灰區。） 二、二、 篩查程序篩查程序 初篩和復檢流程 （圖1） 三、篩查試驗結果的報三、篩查試驗結果的報告告 （建議用修改后附表3）（例） HIV抗體篩查試驗用附表1進行報告，陰性 反應報告為“HIV抗體陰性（-）”；陽性反 應報告為“HIV

2、抗體待復檢”。 四、四、 HIV感染產婦所生兒童感染產婦所生兒童 HIV抗體檢測策略及流程抗體檢測策略及流程 1 1、適用范圍、適用范圍 HIV感染產婦所生嬰幼兒；已滿18個月的 嬰幼兒，其母親HIV感染狀態不詳，兒童出 現HIV相關臨床表現，臨床懷疑HIV感染的 兒童。 2 2、檢測程序、檢測程序 五、樣品的處理五、樣品的處理 1 1樣品的保存樣品的保存 用于抗體和抗原檢測的血清或血漿樣品，短 期（1周）內進行檢測的可存放于28， 一周以上應存放于-20以下。 2.2.樣品的運送樣品的運送（例）（例） （1）應符合生物安全要求； (2)應采用三層容器對樣品進行包裝。 第一層容器第一層容器：直

3、接裝樣品，應防滲漏。樣品 應置于帶蓋的試管內。在試管的周圍應墊有 緩沖吸水材料，以免碰碎。 第二層容器：容納并保護第一層容器，可以 裝若干個第一層容器。要求不易破碎、帶蓋、 防滲漏、容器的材料要易于消毒處理。 第三層容器第三層容器：容納并保護第二層容器的運輸 用外層包裝箱。外面要貼上醒目的標簽、聯 系方式，還應易于消毒。 (3) 用于抗體檢測的血清和血漿樣品應在 凍存凍存條件下運送。 質量控制質量控制 一、一、 艾滋病抗體檢測的統計艾滋病抗體檢測的統計 學室內質量控制學室內質量控制 1 1、試劑盒內部對照、試劑盒內部對照 即試劑盒提供的陽性和陰性對照血清。用 于判斷實驗的有效性，不能作為室內質

4、控 品使用，內部對照結果無效，必須重新試 驗。 2 2、室內質控品、室內質控品 為非試劑盒組份的外部質控品，是為了監 控檢測的重復性而設置的，包括強陽性、 弱陽性和陰性質控血清。也可以只設置一 個弱陽性質控，以該試劑盒臨界值（Cut-off） 的23倍為宜。作用：判斷該批臨床樣品 檢測的有效性，每次實驗必須包含室內質每次實驗必須包含室內質 控品，控品，其結果無效，必須重新試驗。 二、二、 統計室內質控的主要表統計室內質控的主要表 示方法示方法建立質控圖建立質控圖 最常用的質控圖是Levey-Jennings質控圖， 下面以ELISA方法檢測HIV抗體為例，描述建 立質控圖步驟： 2 2、繪制質

5、控圖、繪制質控圖 （a）在常規條件下，對同一批血清連續 測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值， 求均數（ ）和標準差（s）, 超出2s或3s的數 據不應刪除。 （b）將均值（ ）和標準差（s）分別在質 控框架圖中標示出來。以S/CO值作縱座標 （Y軸），每一批次試驗作橫座標（x軸）， 繪制質控圖。 （c）從第21次起，將每次質控血清的檢 測結果依次點入該質控框架圖中，檢驗進入 質控狀態。 3 3、質控規則及其使用、質控規則及其使用 質控規則的使用應檢出隨機誤差和系統誤 差，目前有許多質控規則，常用的是12S和 13S規則。 （a）告警（12S）：當外部質控品的S/CO 值超出 +2s范圍

6、時，系統處于告警狀態，應 予注意，是否可以繼續檢測需要進一步觀 察。若將12S做失控標準，有較高的假失控 概率，所以一般不采用。 （b）失控（13S）：當外部質控品的S/CO 值超出 +3s范圍時，系統處于失控狀態，本 次實驗結果不能被接受，可能是系統誤差、 隨機誤差或外部質控品 穩定性下降所致。 （c）漂移：連續幾次（35次）外部質 控品的S/CO值都落在均值的一側則稱為漂 移，提示實驗條件發生了較大的變化。 （d）趨勢：連續幾次（57次）外部質 控品的S/CO值幾乎按一個方向分布時稱為 趨勢，通常由參數的緩慢改變引起。 艾滋病實驗室生物安全艾滋病實驗室生物安全 一、一、HIV的生物危害的生

7、物危害 第一類、第二類病原微生物統稱為高致病 性病原微生物。人類免疫缺陷病毒（HIV） 屬第二類病原微生物，是高致病性病原微 生物。 二、二、HIV相關檢測的生物安全相關檢測的生物安全 級別級別 HIV抗體檢測應在符合級生物安全實驗室 （BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行。 三、生物安全保證措施三、生物安全保證措施 1 1、建立安全制度、建立安全制度 艾滋病檢測實驗室應建立下列安全制度 (1) 實驗室的安全工作制度或安全標準操 作程序（S-SOP）。 (2) 意外事故處理預案，主要是生物安全 意外事故。 (3) 信息安全及保密制度：信息安全及保密制度：（例）（例） 2 2、培訓和管理、培

8、訓和管理 3 3、個人保健和防護、個人保健和防護 4 4、安全操作、安全操作 5 5、實驗室的清潔和消毒、實驗室的清潔和消毒 工作完畢應對工作臺面消毒，推薦用0.1 0.2%的次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后 要干燥20min以上；操作過程中如有樣品、 檢測試劑外濺，應及時消毒。 如有大量高濃度的傳染性液體濺出，在清 潔之前應先用1%的次氯酸鈉溶液浸泡，然 后戴上手套擦凈。離心樣品時要使用密閉 的罐和密封頭，防止離心時液體溢出或在 超/高速離心時形成氣溶膠。 四、污染物處理四、污染物處理 1 1、艾滋病實驗室產生的所有廢棄物，包括、艾滋病實驗室產生的所有廢棄物，包括 不再需要的樣品、培養物和其它

9、物品，均不再需要的樣品、培養物和其它物品，均 應視為感染性廢棄物，應置于專用的密封應視為感染性廢棄物，應置于專用的密封 防漏容器中，安全運至消毒室，經高壓消防漏容器中，安全運至消毒室，經高壓消 毒后再進行處理或廢棄。毒后再進行處理或廢棄。 2 2、艾滋病檢測實驗室常用的消毒方法、艾滋病檢測實驗室常用的消毒方法 （1 ） 物理消毒方法 a 高壓蒸汽消毒，121，保持1520min; b 干燥空氣烘箱消毒（干烤消毒），140， 保持23h。 （2） 化學消毒方法 含氯消毒劑（次氯酸鈉，含有效氯2000 5000mg/L）、75%乙醇、2%戊二醛 （3）艾滋病檢測實驗室物品常用的消毒方 法 a、廢棄

10、物缸：5000mg/L 次氯酸鈉。 b、生物安全柜工作臺面和儀器表面：75% 乙醇。 c、溢出物：5000mg/L次氯酸鈉。 d、污染的臺面和器具：2000mg/L 次氯酸鈉, 也可以用過氧化氫或過氧乙酸。器械可用 2%戊二醛消毒。 艾滋病檢測實驗室質量管理艾滋病檢測實驗室質量管理 一、范圍一、范圍 艾滋病檢測實驗室質量管理包括質量保證、 質量控制和質量評價 二、質量保證二、質量保證 1 1、人員培訓、人員培訓 檢測技術人員需經過上崗培訓和在崗持續 培訓。篩查實驗室技術人員至少每2年1次。 2 2、環境條件、環境條件 艾滋病抗體篩查實驗室的設置及其建筑、 設施、設備必須符合全國艾滋病檢測工全國

11、艾滋病檢測工 作管理辦法作管理辦法的要求。HCV，HBV及梅毒等 血清學檢測在滿足實驗室管理要求和保證 生物安全的條件下，可以與HIV檢測共享空 間和設備，應避免交叉污染。 3 3、樣品采集、運送和處理、樣品采集、運送和處理 4 4、檢測方法和試劑的選擇、檢測方法和試劑的選擇 5 5、設備維護與校準、設備維護與校準 6 6、實驗耗材、實驗耗材 7 7、文件和文件管理、文件和文件管理 8 8、標準操作程序、標準操作程序 （SOP） 篩查實驗室SOP文件包括：（1）樣品的接 收、登記、處理、保存和運輸；（2）檢測 方法和步驟；（3）試劑使用和保存；（4） 儀器的使用維護和校準；（5）質量控制要 求

12、及程序；（6）結果解釋與報告；（7） 保密程序；（8）實驗室數據、相關文件記 錄與保存；（9）不確定樣品追蹤和處理； （10）實驗室安全防護及實驗室的清理和 消毒； （11）標題和編號；（12）編寫和修訂日 期；（13）編寫和修訂人員姓名；（14） 方法、目的和應用范圍；（15）檢測設備； （16）試劑及有效期；（17）安全防護相 關步驟；（18）結果的解釋和報告；（19） 附錄，包括相關的附加文件如標準表格、 設備和試劑盒說明書等。 9 9 、實驗原始記錄表、實驗原始記錄表（附表附表4） 1010、 結果報告結果報告 1111、 樣品登記和保存樣品登記和保存 三、質量控制三、質量控制 四、質

13、量評價四、質量評價 包括內部質量評價和外部質量評價。 1 1、內部質量評價、內部質量評價 2 2、外部質量評價、外部質量評價 篩查實驗室應參加省級職能工作考核和PT。 3 3、職能工作考核、職能工作考核 現場評價內容，篩查實驗室現場評價應包 括： 實驗室人員組成及其職責分工；實驗室分 區、布局、恒溫設施；儀器設備及其使用、 校準記錄；質量保證文件、實驗室SOP文件 及原始記錄；實驗室的安全防護措施，安 全用品及安全規程； 消毒與污物處理方法及設施；HIV檢測資 料數據庫的建設、存檔、備份、安全和保 密；樣品保存和安全；開展的HIV檢測項目 和檢測試劑等。 梅毒、乙肝檢測要點梅毒、乙肝檢測要點

14、一、梅毒螺旋體感染人體后出現兩種抗體，一、梅毒螺旋體感染人體后出現兩種抗體， 特異體抗體和非特異性抗體。特異體抗體和非特異性抗體。 特異性抗體特異性抗體(TPHA)：為lgM，這種抗體一 旦產生，終身是陽性。靈敏度高、特異性 強 非特異性抗體（反應素非特異性抗體（反應素 RPR）：為lgA與 lgM的混合物，隨病情發展而變化?？膳c正 常生物組織中的類脂抗原發生非特異性結 合。 二、梅毒特異性抗體檢測二、梅毒特異性抗體檢測：用于證實試驗， 即使患者已經經過充分的治療，IgG抗體仍 保持陽性 所以不能用以觀察療效、復發及 再感染。 方法有方法有：TP-ELISA酶聯免疫法、TPPA。 梅毒非特異性抗體檢測梅毒非特異性抗體檢測：用于梅毒診斷療 效觀察和對復發或再感染的監測。 方法有方法有：性病實驗室試驗（又稱VDRL試 驗