1、微生物及發(fā)酵工程摘要 微生物是發(fā)酵工程的靈魂，近年來，對于發(fā)酵工程的生物學屬性的認識愈益明朗化，發(fā)酵工程正在走近科學。人們熟知的利用酵母菌發(fā)酵制造啤酒、果酒、工業(yè)酒精，乳酸菌發(fā)酵制造奶酪和酸牛奶，利用真菌大規(guī)模生產青霉素等都是這方面的例子。本文主要講述了微生物發(fā)酵工程技術及新的研究方向。關鍵詞 微生物發(fā)酵 歷史 發(fā)酵技術 應用一、微生物工程的發(fā)酵歷史發(fā)酵工程1是指采用工程技術手段，利用生物（主要是微生物）和有活性的離體酶的某些功能，為人類生產有用的生物產品，或直接用微生物參與控制某些工業(yè)生產過程的一種技術。20世紀20年代，酒精、甘油和丙酮等發(fā)酵工程，屬于厭氧發(fā)酵。從那時起，發(fā)酵工程開始在不斷

2、地發(fā)展和完善。 20世紀40年代初，隨著青霉素的發(fā)現(xiàn)，抗生素發(fā)酵工業(yè)逐漸興起。由于青霉素產生菌是需氧型的，微生物學家就在厭氧發(fā)酵技術的基礎上，成功地引進了通氣攪拌和一整套無菌技術，建立了深層通氣發(fā)酵技術。它大大促進了發(fā)酵工業(yè)的發(fā)展，使有機酸、微生素、激素等都可以用發(fā)酵法大規(guī)模生產。 1957年，日本用微生物生產谷氨酸成功，如今20種氨基酸都可以用發(fā)酵法生產。目前，代謝控制發(fā)酵技術已經應用于核苷酸、有機酸和部分抗生素等的生產中。 20世紀70年代以后，基因工程、細胞工程等生物工程技術的開發(fā)，使發(fā)酵工程進入了定向育種的新階段，新產品層出不窮。 20世紀80年代以來，隨著學科之間的不斷交叉和滲透，微

3、生物學家開始用數學、動力學、化工工程原理、計算機技術對發(fā)酵過程進行綜合研究，使得對發(fā)酵過程的控制更為合理。在一些國家，已經能夠自動記錄和自動控制發(fā)酵過程的全部參數，明顯提高了生產效率。二、微生物發(fā)酵工程2的內容(1)、菌種的選育方法：a、從自然界中先分離出相應的菌種；b、利用誘變篩選出符合生產要求的優(yōu)良菌種 ；c、利用基因工程、細胞工程的方法構建工程細胞或工程菌。例：可將人工合成的人的胰島素基因與大腸桿菌的質粒結合，形成重組dna，再把重組dna導入大腸桿菌細胞內形成工程菌。通過篩選則可培養(yǎng)出能生產人的胰島素的菌種。(2)、培養(yǎng)基的配置及原則：a、根據不同的菌種，選擇不同的材料配制培養(yǎng)基。b、

4、配制的培養(yǎng)基應滿足微生物在碳源、氮源長因子、水、無機鹽等方面的營養(yǎng)要求，并為微生物提供適宜的ph。c、培養(yǎng)基的營養(yǎng)要協(xié)調，以利于產物的合成。d、培養(yǎng)基在滿足微生物的營養(yǎng)需求的基礎上應盡量降低生產成本，以得到更高的經濟效益。(3)、滅菌及原因：在發(fā)酵過程中如混入其他微生物，將與菌種形成競爭關系，對發(fā)酵過程造成不良影響 。舉例：如果在谷氨酸發(fā)酵過程中混人放線菌，則放線菌分泌的抗生素就會使大量的谷氨酸棒狀桿菌死亡。如果在青霉素生產過程中污染了雜菌，這些雜菌則會分泌青霉素酶，將合成的青霉素分解掉。 (4)、擴大培養(yǎng)和接種：擴大培養(yǎng)是將培養(yǎng)到對數期的菌體分開，分頭進行培養(yǎng)，以促使菌體數量快速增加，能在短

5、時間里得到大量的菌體 接種：接種過程要注意防止雜菌污染。(5)、發(fā)酵過程：發(fā)酵產物主要在菌體生長的穩(wěn)定期產生。在發(fā)酵過程中隨時取樣檢測培養(yǎng)液中細菌數目、產物濃度以了解發(fā)酵進程，及時添加必需的培養(yǎng)基成分來延長菌體生長穩(wěn)定期的時間，以得到更多的發(fā)酵產物 。發(fā)酵生產中溫度、ph、溶氧量等對發(fā)酵過程有重大影響。(6)、分離提純發(fā)酵產物不同，分離提純的方法會有所不同。一般方法是：代謝產物：蒸餾、萃取、離子交換等方法。菌體本身：過濾、沉淀。三、微生物發(fā)酵過程的多種培養(yǎng)技術1、分批培養(yǎng)分批發(fā)酵是一種封閉培養(yǎng)系統(tǒng), 含有初始限制量的基質的發(fā)酵方式, 菌體接種到培養(yǎng)基后除了氣體流通外，發(fā)酵液始終留在生物反應器內

6、。分批培養(yǎng)過程中微生物生長一般可以分為四個階段:延滯期、對數生長期、衰減期、穩(wěn)定期，在接種后一段時間, 細胞數目和菌體量不變，因菌體對新的生長環(huán)境有一個適應過程,所以工業(yè)生產從發(fā)酵產率和發(fā)酵指數以及避免染菌考慮,應盡量縮小延滯期，擴大生長期。延滯期過后進入對數生長期 ，如果條件良好, 營養(yǎng)充分,微生物會以最大生長速率生長3，經過一段時間, 由于養(yǎng)分的消耗和微生物產物的分泌,生長速率逐漸減速直到停止 ，從對數生長期到穩(wěn)定期有一個過渡,稱為衰減期 , 衰減期的長短取決于菌對限制性基質的親和力 ,例如對基質的親和力高( 具有低 ks值) ,則衰減期很短,反之 ,則長4；當生長率下降為零時, 便進入穩(wěn)

7、定期,但是穩(wěn)定期菌體代謝仍然十分活躍,有許多次級代謝產物在此時合成。分批培養(yǎng)的產物大概可以分為兩種: (l)與生長聯(lián)動的產物；(2)與生長不聯(lián)動的產物。前者相當于初級代謝產物, 由正在生長的細胞合成,后者相當于次級代謝產物,多在穩(wěn)定期中合成5，若所需產物不同,要選擇不同的分批發(fā)酵工藝，對于產物是細胞本身, 可采用能支持最高生長量的培養(yǎng)條件；對于產物是初級代謝產物, 可設法延長與產物關聯(lián)的對數生長期； 對于次級代謝產物, 可縮短對數生長期，延長穩(wěn)定期 ,或降低對數生長期的生長速率, 從而使次級代謝產物更早形成。2、分批補料培養(yǎng)在發(fā)酵開始時投人一定量的基礎培養(yǎng)基,到發(fā)酵過程的適當時期，開始連續(xù)補加

8、碳能源或氮源或和其他必需基質,直至發(fā)酵液體積達到發(fā)酵罐最大操作容積后, 將發(fā)酵液一次全部放出, 這種操作方式稱為分批補料發(fā)酵6。 分批補料培養(yǎng), 最初以分批方式建立 , 因為簡單分批發(fā)酵不能維持一定的菌體濃度, 當基質消耗后菌體將加速死亡, 使活細胞數量迅速下降 ,分批補料由于持續(xù)供給菌體維持和生長所需的營養(yǎng),故能保持發(fā)酵液中有較高的活菌體濃度,從而克服上述缺點，另外,不斷的補料稀釋, 對降低發(fā)酵液的粘度, 改善流變學性質,強化好氧發(fā)醉的供氧,也是十分有利的。分批補料發(fā)酵目前已廣泛應用于各種發(fā)酵產品的工業(yè)生產中。優(yōu)點在于使發(fā)酵系統(tǒng)中維持很低的基質濃度: (l)可以除去快速利用碳源的阻遏效應,并

9、維持適當的菌體濃度,使不至于加劇供氧的矛盾；(2)避免培養(yǎng)基積累有毒代謝物，與連續(xù)發(fā)酵相比, 分批補料發(fā)酵不需要嚴格的無菌條件,也不會產生菌種老化和變異等問題 ,其應用范圍十分廣泛, 包括抗生素、氨基酸 、酶蛋白、核昔酸 、有機酸及高聚物等 。3、半連續(xù)培養(yǎng)一部分培養(yǎng)物有規(guī)律的間隔收獲以及被等體積新鮮培養(yǎng)基替換的培養(yǎng)方式稱為半連續(xù)培養(yǎng)7。半連續(xù)培養(yǎng)在分批補料的基礎上，間歇放掉部分發(fā)酵液,與其他發(fā)酵罐的發(fā)酵液一起進行提煉, 通常在行業(yè)中稱為帶放，這種方式可以通過補充養(yǎng)分和放掉部分發(fā)酵液 ,使發(fā)酵持續(xù)下去, 因為在發(fā)醉中有害物的積累,也會造成合成產物遭到抑制, 所以放掉一部分發(fā)酵液再補人適當原料

10、, 使得營養(yǎng)充分, 代謝有害物濃度稀釋, 從而有利于產物的繼續(xù)合成。不足之處: (1)放掉發(fā)酵液的同時也丟失了未利用的養(yǎng)分和處于生長旺盛的菌體；(2)定期補充和帶放使發(fā)酵液稀釋,送去提煉的發(fā)酵液體積更大；(3) 發(fā)酵液稀釋后可能產生更多的有害代謝物, 最終限制發(fā)酵產物的合成；(4) 一些經代謝產生的前體可能丟失；(5)有利于非產生菌突變株的生長，因此,采用該法時要考慮到這些限制,要具體問題具體分析。4 、連續(xù)培養(yǎng)連續(xù)培養(yǎng)是發(fā)酵過程中一面補入新鮮的料液,一面以相同的流速放料，維持發(fā)酵液在原來的體積。連續(xù)發(fā)酵8是一個開放系統(tǒng),通過連續(xù)流加新鮮培養(yǎng)基并以相同的流量連續(xù)地排出發(fā)酵液,可以使微生物細胞群

11、體保持穩(wěn)定的生長環(huán)境和生長狀態(tài),并以發(fā)酵中的各個變量都能達到恒定值而區(qū)別于瞬變狀態(tài)的分批發(fā)酵 ，連續(xù)發(fā)酵對于微生物典型的生長曲線實際上是盡量縮短或消除延滯期, 使菌體一直處于良好的條件下, 以最大生長率生長，獲得較高的菌體量。連續(xù)發(fā)酵包括恒化器發(fā)酵和恒濁器發(fā)酵，前者以某種必需營養(yǎng)作為生長限制基質, 通過控制其流加速率，造成適應這種流加條件的生長密度和生長速率；后者控制生長限制基質的流量以維持恒定的菌體密度，無論恒化器還是恒濁器, 除了控制進出口物料流量外，許多重要的環(huán)境因素如溫度、ph、空氣流量、壓力等也必須加以控制以保持穩(wěn)定。同時，還應具有良好的攪拌混合條件，使整個發(fā)酵液中所有物質的分布都達

12、到均一，以保證流出液中各物質的濃度與反應器中的濃度相同。一般多用恒化器 ,但有時恒化器也會有偏差或異常, 由于不完全的攪拌和器壁貓附,恒化器的改良可以通過增加容器的級數，將菌體反饋到容器中等手段來實現(xiàn)，例如, 多級恒化器、內部反饋系統(tǒng)和外部反饋系統(tǒng)。連續(xù)發(fā)酵具有的優(yōu)點:(l) 能夠維持較低的基質濃度；(2)可以維持穩(wěn)定的操作條件,連續(xù)培養(yǎng)具有穩(wěn)態(tài)優(yōu)勢, 從而使產率和產品質量也相應的保持穩(wěn)定；(3)便于自動控制, 有效的實現(xiàn)機械化和自動化, 降低勞動強度,減少操作人員與病原微生物和毒性產物接觸的機會；(4)減少設備清洗、準備和滅菌等非生產占用時間，提高設備利用率，節(jié)省勞動力和工時；(5)由于滅菌

13、次數少，使測量儀器探頭的壽命得以延長；(6)容易對過程進行優(yōu)化,有效的提高發(fā)酵產率。在大規(guī)模生產中也有不足之處：(l)對儀器設備及控制元件的技術要求較高, 從而增加投資成本；(2)連續(xù)培養(yǎng)是開放系統(tǒng)，并且發(fā)醉周期長，有極大的可能性造成菌體染菌，這也是生產成敗的關鍵問題；(3)在長期的發(fā)酵過程中，微生物容易發(fā)生變異, 菌株退化問題也限制了大型連續(xù)培養(yǎng)生產，生產慢的高產菌株很可能逐漸被生長快的低產變異菌株取代，從而降低生產效率；(4)絲狀真菌菌體容易附著在器壁上生長以及在發(fā)酵液內結團, 給連續(xù)發(fā)酵操作帶來困難。鑒于以上情況, 連續(xù)發(fā)酵目前主要用于研究工作。5 、其他技術(1)膜分離與發(fā)酵的耦合為解

14、決產物反饋阻遏和代謝有害產物限制的問題,理想的辦法是在發(fā)酵過程中產物積累時將產物即使從發(fā)酵液中分離與回收，膜分離技術與發(fā)酵的耦合可避免菌體丟失這一缺點,可排除有害代謝物,避免或減輕產物的反饋抑制，從而使高密度細胞培養(yǎng)成為可能, 更合理的利用微生物的生產性能，以提高產率。與膜結合的生物反應器在這方面最能發(fā)揮他的特長，膜生物反應器是一種借助于膜截留住酶、細胞器、微生物、動物或植物細胞,用以生產較為貴重的物質，或進行污水處理，膜生物反應器可以分為兩類:第一類用膜保留培養(yǎng)物, 使之懸浮于生物反應器中, 不會因微濾或透析作用是細胞流失, 因而水流和培養(yǎng)物在反應系統(tǒng)中的持留時間各異； 第二類把生物催化劑固

15、定在膜表面上或網格中或夾持在兩張膜的中間, 因此, 生物催化劑是不能運動的。膜技術的優(yōu)點除了排除有害代謝物、避免反饋抑制外, 可以提高發(fā)酵中有機酸的產率, 乙醇、丙酮、丁醇發(fā)酵的反饋抑制 ,在基因工程菌的培養(yǎng)、超氧歧化酶生產、單克隆抗體生產等方面都能達到較高的產率。(2)高細胞密度培養(yǎng)代謝產物的合成是靠菌( 生產者) 來完成的，量越多，自然產量就越大, 條件是菌的生產力能保持在最佳狀態(tài)和具備適當的生產條件，包括足夠的產物合成所需的基質、前體、誘導物等和沒有有害代謝物的積累10 。高細胞密度培養(yǎng)曾成功地應用于各種代謝產物的生產，高細胞密度培養(yǎng)一般指微生物沉沒培養(yǎng)時其細胞濃度達到100g/l以上的

16、水平，最早應用于生產單細胞蛋白、乙醇等，可用于高細胞密度培養(yǎng)的生物反應器類型有常用的攪拌罐和帶有外置式或內置式細胞持留裝置的反應器, 一般多用于研究，在工業(yè)生產中，還是采用一般的攪拌罐與補料工藝進行高細胞密度培養(yǎng), 因為它簡單、生產潛力高,適合于進行多參數的相關控制11。四、發(fā)展趨勢(1)、菌種改良青霉素和鏈霉素的相繼發(fā)現(xiàn),開啟了現(xiàn)代微生物藥學的大門。微生物產生的生物活性物質(比如:抗生素、維生素、氨基酸、酶等)滲透了人們的生活, 并在醫(yī)藥、食品和化工工業(yè)中有著不可取代的地位，但是,由于剛從自然界分離得到的原始菌株代謝產物產量往往很低,遠不能滿足生產需要,所以, 通過菌種改良手段篩選高產菌種,

17、從而降低生產成本的工作就顯得尤為重要。早期的菌種改良思路主要集中于隨機篩選和簡單的理性篩選,利用這些傳統(tǒng)方法進行菌種改良12也取得了許多成功,例如: 最初的青霉素生產菌產黃青霉(penicillium chrysogenum nrrl 1951)的產量為60 mg/l, 經過多年的傳統(tǒng)選育,如今的生產菌種產量已到達 70 g/l。但是,傳統(tǒng)方法耗時、費力、工作量大以及誘變結果不具定向性的缺點隨著時間推移也逐漸暴露出來 ，隨著 dna 重組技術、原生質體融合和組學研究的應用日益廣泛, 菌種改良的新方法和新策略如雨后春筍,層出不窮。如今,對于那些生化途徑清晰的菌株,通過代謝工程策略可以更容易地選擇

18、菌種改良靶點；而對那些生化代謝途徑不清楚的菌株,也可以直接通過基因組改組(genome shuffling)、系統(tǒng)生物技術、核糖體工程和表觀遺傳修飾等手段進行遺傳選育,從而獲得理想突變表型。新方法和新策略的出現(xiàn),使得微生物菌種選育的工作更具定向性和正突變性,為構造高產菌種提供了更廣闊的空間。以下為近年來菌種改良相關領域的最新方法和策略的進展。a、代謝工程 代謝工程是使用現(xiàn)代基因工程技術對產生菌細胞進行定向改造的優(yōu)化手段。以了解相關代謝產物的生化反應途徑為重點，應用多種不同的代謝分析手段確定生物合成的“瓶頸”,集中于細胞代謝流的控制，比如:調整參與目的抗生素合成的前體化合物的代謝通路，以提高目的

19、代謝物的產量或產率；最小限度地限制流向副產物的代謝流，排除某些不需要的副產物的合成；使微生物合成新的代謝產物等。應用代謝工程進行微生物的遺傳育種主要體現(xiàn)在提高途徑限制酶的活力、對全局性調控基因或整個基因簇的操作、增強菌種代謝產物的耐受性及其生物合成途徑的異源表達。b、基因組改組 基因組改組(genome shuffling)9技術是結合傳統(tǒng)菌種改良技術與細胞融合技術發(fā)展的一種新興菌種改良手段, 它主要是指將傳統(tǒng)育種得到的具有不同表型的菌株進行全基因重組,從而使得這些菌株的優(yōu)良性狀能集于一身。c、系統(tǒng)生物技術 近年來, 隨著組學(基因組、蛋白質組、代謝組等)和高通量篩選技術的蓬勃發(fā)展, 探索細胞

20、內復雜的次級代謝調控網絡逐漸成為可能。通過系統(tǒng)生物技術將獲得的相關組學數據整合,通過計算機建模和預測,從而確定相關的遺傳操作靶點,使微生物的遺傳育種更具定向性。d、核糖體工程 微生物在惡劣的環(huán)境下,比如:碳源、氮源或者磷酸鹽營養(yǎng)突然匱乏時, 自身的rrna以及trna合成受到限制,從而導致蛋白合成水平低,啟動抗生素等次級代謝產物的合成,這種應答機制被稱作應急反應。通過研究發(fā)現(xiàn),小分子化合物四磷酸鳥苷(ppgpp)是導致微生物出現(xiàn)應急反應中的主要響應因子,它能直接作用于rna 聚合酶, 調節(jié)trna 和 mrna 合成水平。實驗表明, 作用位點與 ppgpp 鄰近的抗生素利福平以及作用位點在核糖

21、體上的抗生素(鏈霉素、慶大霉素、巴龍霉素、硫鏈絲菌肽)等,都能模擬ppgpp 的作用,使微生物產生類似應急反應的現(xiàn)象,從而使得菌株相關代謝產物產量增加或者產生新型化合物,基于這些發(fā)現(xiàn),提出了核糖體工程育種技術的概念。e、表觀遺傳修飾 上述的微生物遺傳育種的新方法與新策略主要集中于提高已知目的代謝物的產量，其實尋找新結構的代謝產物也是微生物遺傳育種的重要面。近年來，由于真菌具有強大的生物酶系和代謝系統(tǒng)的特殊性等特點，其產生的一系列新穎的化學小分子實體引起了廣泛微物藥學家的重視。通“基因組挖掘”技術研究發(fā)現(xiàn)，真菌基因組中存在廣泛的次級代謝生物成途徑,但由于實驗室條件對于菌株的“馴化”,大量潛在的生

22、物合成基因簇仍處于沉默狀態(tài), 菌株實際產生的次級代謝產物遠遠低于預 期。雖然通過改變養(yǎng)條件或分子操作手段能適當激活一些沉默基因的表達，但是操作基因未知性以及異宿主的兼容性等原因依然成為限制的主要因素。因此, 尋找一種能效激活真菌沉默的次級代謝生物合成基因的遺傳育種方法迫在眉睫。(2)、高效呼吸膜固態(tài)發(fā)酵近20多年來人們逐漸認識到抗生素對人和動物存在的潛在危害，因此，在動物營養(yǎng)研究和動物養(yǎng)殖中，人們不得不花費大量心血研究抗生素替代品及其應用推廣。農業(yè)部飼料工程研究中心和晟亞育達生物科技有限公司經過共同努力，結合傳統(tǒng)發(fā)酵飼料技術和傳統(tǒng)食品發(fā)酵防雜菌污染經驗，發(fā)明了帶呼吸膜可移飼料發(fā)酵技術。該技術關

23、鍵在于發(fā)明了一種能使微生物有益菌在自然狀態(tài)下保持高活性生長代謝的生命呼吸裝置- 呼吸膜它可以使活菌，主要是乳酸桿菌和酵母菌在自然條件下能夠長期保持高活性，巧妙地解決了微生物固態(tài)發(fā)酵散熱、厭氧控制以及包裝、儲運、穩(wěn)定性等難題，高效呼吸膜固態(tài)發(fā)酵核心技術在于抗生生產技術是以各種輕工業(yè)副產物或雜粕作為發(fā)酵底物，原料不需要經過消毒，采用獨創(chuàng)的微生物呼吸膜和先包裝后發(fā)酵的移動式微生物厭氧固態(tài)發(fā)酵工藝，低成本、規(guī)模化的生產，含高量有益微生物。復合培養(yǎng)物每克成品發(fā)酵料中，乳酸菌活菌數可以達到10億個。我國現(xiàn)有生豬飼養(yǎng)條件下，在配合飼料中添加15-25% 發(fā)酵飼料就可以完全替代抗生素，在基本不增加飼養(yǎng)成本條件

24、下，實現(xiàn)生豬從15 千克至出欄無抗生素飼養(yǎng)，豬肉品質達到歐盟安全肉品要求。高效呼吸膜固態(tài)發(fā)酵技術對實現(xiàn)我國飼料安全有重大意義，通過微生物發(fā)酵無抗飼料，實現(xiàn)生豬無抗生素飼養(yǎng)技術項目的實施具有劃時代意義。 此技術將解決飼料中全面禁止使用抗生素難題，可以提高酒糟、醋渣、果渣、棉籽粕、菜籽粕等非糧食飼料資源利用率3-5%。 在動物飼料中添加量可以達到20-40% 且生產工藝簡單、成本低、投資少、可操作性強、成品使用方便、特別適合廣大農村養(yǎng)殖場戶，對解決人畜爭糧及飼料數量安全問題建設節(jié)約型社會具有重大意義。(3)、利用代謝工程技術提高工業(yè)微生物對脅迫的抗性13代謝工程是微生物菌種改造的平臺技術，它通過修

25、飾和優(yōu)化微生物代謝網絡與表達調控網絡14，改善細胞的生理功能，從而將微生物改造成“細胞工廠”生產有用的物質，是一個極具吸引力的研究熱點。a、借鑒傳統(tǒng)代謝工程技術構建脅迫抗性突變株a構建新的代謝途徑合成脅迫抗性物質；b拓展已有的代謝途徑組成完整有效的抗脅迫途徑；c 削弱已有的代謝途徑。b、借鑒反向代謝工程技術構建脅迫抗性突變株a 在異源微生物或相關模型系統(tǒng)中獲得預期的表型； b確定導致這一表型的遺傳基因； c通過遺傳改造使這一表型在特定微生物中表達。四、微生物發(fā)酵工程的應用(1)、食品工業(yè)方面：酒類：如果酒（葡萄酒等）、米酒、白酒等；(2)、有機溶劑：如乙醇、丙酮、丁醇、甘油；(3)、有機酸：如

26、醋酸、乳酸、葡萄糖酸、檸檬酸、酒石酸、衣康酸、長鏈二元酸（以十三到十八碳的直鏈烷烴為原料的發(fā)酵產品）；(4)、氨基酸：如谷氨酸（谷氨酸鈉又稱味精）、賴氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、精氨酸、絲氨酸、丙氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸等；核苷酸及其類似物：如鳥嘌呤核苷酸（5-gmp）、肌苷酸（5-imp）、腺嘌呤核苷酸（5-amp）、黃嘌呤核苷酸（5-xmp）等；(5)、抗生素：包括疾病治療的藥用抗生素，農業(yè)和畜牧業(yè)用于防病抗病的抗生素，如青霉素、頭孢霉素、鏈霉素、四環(huán)素、土霉素、紅霉素、稻瘟素、井崗霉素、春日霉素等等；(6)、多糖：如黃原膠、普魯蘭等；(7)、酶15：如堿性蛋白酶

27、（洗滌劑）、中性蛋白酶（洗滌劑等）、脂肪酶（洗滌劑）、-淀粉酶（淀粉水解）、葡萄糖淀粉酶（葡萄糖生產）、葡萄糖異構酶（高果糖糖漿生產）、纖維素酶（纖維素水解、紡織品加工）、果膠酶（食品、水果加工等）、凝乳酶（奶酪制造）、青霉素酰化酶（青霉素母核生產）、天冬氨酸酶（l天冬氨酸制造）、延胡索酸酶（l蘋果酸制造）、葡萄糖氧化酶（檢驗葡萄糖）、乳酸脫氫酶（臨床檢驗）、鏈激酶（治療血栓）等，目前世界上有100多種酶用微生物發(fā)酵生產，應用于不同領域。參考文獻1儲炬、李友榮. 現(xiàn)代工業(yè)發(fā)醉調控學. 化學工業(yè)出版社,2002：230-250.2熊宗貴. 發(fā)酵工藝原理. 中國醫(yī)藥科技出版社, 1995 : 171-178.3pf stanbury , a whitaker, s hall. principles of fermentationtechnology ,1995: 13-33.4俞俊棠、唐孝宣. 生物工藝學( 上冊) . 華東理工大學出版社2003: 150 - 167.5pirt sj.principles of microbe and cell cultivation .blackwell ,oxf