1、DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減 中藥脫花煎協(xié)同米非司酮與米索前列醇 終止早期妊娠的機理研究 （作者：單位：郵編：） 作者：鄧高丕孫冬莉李道成 【摘要】目的通過采用高倍顯微鏡、免疫組化的方法，檢測藥物流 產(chǎn)的絨毛、 蛻膜組織壞死率以及增殖細(xì)胞核抗原（PCNA蛋白和細(xì)胞凋亡相關(guān)基因2 （Bel 擬2）的表達(dá)，探討活血化淤，祛淤下胎的中藥古方脫花煎協(xié)同米非司酮、米索 前列醇終止早期妊娠的作用機理。方法對在70例臨床療效研究中收集到的完整 的藥物流產(chǎn)標(biāo)本25例（其 中觀察組8例，對照組17例），采用前瞻性的對照 研究方法，檢測兩 組的絨毛、蛻膜組織結(jié)構(gòu)壞死率以及PCNAg白和Bel擬2的 表達(dá)。

2、結(jié) 果兩組的絨毛、蛻膜組織結(jié)構(gòu)壞死率比較有顯著差異（P0.05）；兩組 的PCNAg白陽性表達(dá)率有顯著性差異（P0.05）；兩組的Bel-2陽性 表達(dá)率無顯 著性差異（P0.05） o結(jié)論脫花煎協(xié)同米非司酮、米索前列醇可增加早期妊娠的 絨毛、蛻膜組織結(jié)構(gòu)壞死率，提高流產(chǎn)效果；脫花煎協(xié)同米非司酮、米索前列醇 可降低藥物流產(chǎn)的絨毛、蛻膜組織的 PCNAg白表達(dá)，促進妊娠組織細(xì)胞凋亡，提高流產(chǎn)效果；脫花煎協(xié)同米非司 酮、米索前列醇對藥物流產(chǎn)蛻膜組織的Bel-2表達(dá)與米非司酮、米索前列醇組無 明顯差異。 【關(guān)鍵詞】脫花煎米非司酮米索前列醇增殖細(xì)胞核抗原細(xì)胞凋 亡相關(guān)基因擬2 經(jīng)過閱讀復(fù)習(xí)文獻發(fā)現(xiàn)，對中

3、藥藥物流產(chǎn)的研究絕大多數(shù)集中在臨床 療效、減少 副作用等方面的探討，且中藥的使用時間大多數(shù)是在妊娠組織排出后，目的在于 縮短陰道流血時間和減少流血量1,鮮見對其作用機制方面的深入探討。本研究 采用活血化淤、祛淤下胎的中藥 古方脫花煎協(xié)同米非司酮、米索前列醇終止早期 妊娠，觀察其對早期 妊娠的絨毛、蛻膜組織結(jié)構(gòu)壞死率以及對細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞胞漿 增殖細(xì)胞 核抗原（PCNA蛋白和細(xì)胞凋亡調(diào)控因子細(xì)胞凋亡相關(guān)基因-2 （Bcl- 2 ）表達(dá)等方面的影響，探討其終止早期妊娠的作用機制。 1臨床資料 11研究對象 研究對象均來源于200或1092007以02在廣州中醫(yī) 藥大學(xué)第 一附屬醫(yī)院婦科就診，要求藥物終

4、止妊娠者。所有研究對象嚴(yán)格按照下列的診斷 標(biāo)準(zhǔn)、納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)進行篩選，按SAS9.0系統(tǒng)設(shè)置的隨機方法分組，對 在70例臨床療效研究中（觀察組34例，對照組36例）能完整收集到的流產(chǎn)標(biāo) 本25例按原分組方法分為觀察 組8例，對照組17例。 1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)停經(jīng)日數(shù)w49d, HCG陽性；確診為宮內(nèi)妊娠（B型超聲見 到宮腔內(nèi)有妊娠囊）。 1.3納入標(biāo)準(zhǔn)符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)者；年齡1842歲之間；血 分析正常； 本人自愿使用藥物終止早期妊娠，簽署知情同意書者。 1.4排除標(biāo)準(zhǔn)不符合診斷標(biāo)準(zhǔn)和納入標(biāo)準(zhǔn)者；對米非司酮或米索前列醇過敏 者；可疑異位妊娠，妊娠劇吐者；有生殖器官腫瘤 或畸形者；合并有心血

5、管、腦血管、糖尿病、甲狀腺病、肝腎和造 血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病及精神病患者； 有肝炎、結(jié)核等傳染病者；患者不合作，無法按方案進行者。 2研究方法 2.1服藥方法 2.1.1觀察組（脫花煎+米非司酮、米索前列醇組）口服米非司酮150 mg,服 藥前后均空腹2 ho口服米非司酮后2 h,開始服中藥脫花煎，2劑/d,共3 d,水煎服中藥脫花煎組成：當(dāng)歸15 g，川茸10g,肉桂3g （煽服），川 牛膝15g,紅花3g,車前子15 g。48 h后口服米索前列醇600 Pg,服 藥前后均空腹2 ho 2.1.2對照組（米非司酮、米索前列醇組）服藥方法同觀察組。 2.2標(biāo)本收集及處理 將藥流排出的絨毛、蛻膜組織

6、，馬上用10%福爾馬林固定 后，將所得到的絨毛及蛻膜組織，制作芯片，常規(guī)包埋，切片，備用于檢測。每 張切片中均有觀察組、對照組，以保證檢測條件一致。 2.3檢測方法采用高倍顯微鏡檢測絨毛、蛻膜組織結(jié)構(gòu)壞死率；采用免疫組化的 方法檢測PCNA和Bcl-2的表達(dá)。免疫組織化學(xué)染色結(jié) 果判斷：（-）無染色信 號。（+ ）染色信號呈細(xì)顆粒狀，棕黃色，陽性細(xì) 胞占總細(xì)胞數(shù)50%以下。 （+）染色信號呈細(xì)顆粒狀，棕黃色，陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)50%以上；或染色 信號呈粗顆粒狀、塊狀，棕黑色，陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)50%以下。（+）染色信 號呈粗顆粒狀或塊狀，棕黑色，陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)50%以上。 2.4統(tǒng)計方法采

7、用SPSS11.0統(tǒng)計軟件，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料米用X 2檢驗。 3結(jié)果 3.1 一般資料兩組孕者的年齡、孕周比較見表1。表1兩組孕者的年齡、孕周比 較兩組的年齡分布差異無顯著性(P0.05),具有可比性。其中觀察組最大年齡為 34歲，最小年齡為20歲；對照組最大年齡為41歲，最小年齡為20歲。兩組的 孕周分布差異無顯著性(P0.05),具有可比性。 3.2兩組的絨毛、蛻膜組織結(jié)構(gòu)壞死率比較見表2o表2絨毛、蛻 膜組織結(jié)構(gòu)面 積的壞死率比較 經(jīng)獨立樣本t檢驗，觀察組比對照組 絨毛及蛻膜組織變性壞死面 積更大，壞死程度更徹底，兩組比較有顯著性差異(P0.05)o 3.3兩組的蛻膜PCNA

8、蛋白表達(dá)結(jié)果比較見表3。由表3可見，PCNA在觀察組 的蛻膜組織表達(dá)多為+,而對照組多為+-+,有組間差 異(P0.05)o表3兩 組蛻膜PCNAg白表達(dá)結(jié)果比較 3.4兩組的絨毛、蛻膜Bcl-2表達(dá)結(jié)果比較見表4。由表4可見，在絨毛合體細(xì) 胞滋養(yǎng)層細(xì)胞漿和蛻膜中，兩組Bcl-2均呈強陽性表達(dá)，無組間差異(P0.05)o 表4兩組的絨毛、蛻膜Bcl-2表達(dá)結(jié)果比較例 4討論 脫花煎出自景岳全書婦人規(guī)，由當(dāng)歸、川茸、肉桂、川牛膝、紅花、車前 子組成。功效為理氣行血，祛淤下胎。方中當(dāng)歸、川茸活 血，川茸又能行血中之 氣；肉桂溫通血脈，紅花祛淤，牛膝引血下行；車前子軟堅滑利以下胎。合而用 之，淤血去

9、而死胎下。現(xiàn)代藥理研究證實2:當(dāng)歸含有興奮子宮和抑制子宮兩 種不同成分，對多種動物已孕、未孕的離體子宮、在位子宮具有“雙向性”調(diào)節(jié) 作用。當(dāng)歸的興奮成分為水溶性甚高、溶于醇而不溶于醯的非揮發(fā)性物質(zhì)，能使 子宮平滑收縮加強，大量或多次給藥時，甚至可出現(xiàn)強直性收縮。醇 溶性物質(zhì)比 水溶性物質(zhì)作用強。當(dāng)歸的抑制成分為高沸點揮發(fā)油，1 : 50濃度即對子宮產(chǎn)生 迅速而持久的抑制作用，使子宮肌弛緩，節(jié)律性收縮減少，1 ： 25濃度即可使收 縮完全停止、但洗去藥液后子宮收縮可恢復(fù)，對子宮無明顯損害。川茸浸膏能 使孕兔離體子宮收縮加強，甚至痙攣；大劑量則轉(zhuǎn)為抑制，使子宮麻痹，收縮停 止。川茸浸膏給妊娠兔或大

10、鼠連續(xù)注射，可使胎仔壞死在子宮內(nèi)，但不墮下，推 測胎仔的壞死可能受川茸的作用引起痙攣而影響胎仔營養(yǎng)有關(guān)。牛 膝具有興奮子宮和抗生育作用，牛膝流浸膏或煎劑對離體子宮家兔不論已孕、未 孕均有興奮作用，對收縮無力的小鼠離體子宮，則使收縮加強，對貓的未孕子宮 成弛緩作用，而對已孕子宮則發(fā)生強有力的收縮，牛膝總皂昔在0.1251.0 mg/ml的濃度內(nèi)，對大鼠子宮平滑肌有明顯興奮作用，給藥后子宮收縮幅度增 高，頻率加快，張力增加，子宮收縮面積較給藥前顯著增大。有報告指出，懷牛 膝總皂苜給小鼠灌胃并有明顯的抗著床作用。紅花煎劑對小鼠、家兔、貓、豚 鼠、狗等動物在體或離體子宮均有不同程度的興奮作用，小劑量可

11、使子宮緊張性 或節(jié)律性收縮，大劑量可使子宮緊張性與興奮性升高，子宮收縮，甚至痙攣。此 作用對已孕子宮較未孕子宮更為明顯。 根據(jù)表1：觀察組和對照組年齡、孕周比較無顯著性差異（P0.05）,說明兩 組一般資料均衡，具有可比性。 根據(jù)表2:觀察組和對照組的絨毛、蛻膜組織結(jié)構(gòu)面積壞死率分別 為（43.75 士 34.62）唏口（24.76 士 14.68） %兩組比較有顯著性差異 （P0.05） o實驗中，發(fā)現(xiàn)觀察組絨毛、蛻膜組織細(xì)胞呈不同程度的退行性變、 水腫，可見炎細(xì)胞浸潤、，變性、壞死，少數(shù)細(xì)胞核固縮、破碎，細(xì)胞質(zhì)不均勻 及空泡變性，部分組織細(xì)胞界限不清，相互融合，正常組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，其壞

12、控制的細(xì)胞自我消亡過程，是細(xì)胞生命周期的重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞凋亡是一種主動 的、固有的現(xiàn)象，它發(fā)生在胚胎發(fā)育、生物變態(tài)、內(nèi)分泌器 官的萎縮及正常組織 的修復(fù)更新過程中5, 6o本研究中兩組Bcl-2均呈強陽性表達(dá)，一方面可能是 由于米非司酮的作用已使Bcl-2呈強陽性表達(dá)，無法體現(xiàn)出中藥脫花煎對Bcl-2 表達(dá)的影響。另一方面也可能是脫花煎對Bcl-2表達(dá)的影響很小或沒有意義，仍 需做進一步的研究。 綜上所述，脫花煎協(xié)同米非司酮、米索前列醇可增加早期妊娠的絨毛、蛻膜組織 結(jié)構(gòu)壞死率，從而提高流產(chǎn)效果；脫花煎協(xié)同米非司酮、米索前列醇可降低藥物 流產(chǎn)的絨毛蛻膜組織PCNAg白的表達(dá)，促進 妊娠組織細(xì)胞凋

13、亡，從而提高流產(chǎn)效果；脫花煎協(xié)同米非司酮、米索前列醇對 Bcl-2的表達(dá)與米非司酮、米索前列醇組無明顯差異。 【參考文獻】 ：1姜翠英，吳永慶.脫花煎輔助早期妊娠藥物流產(chǎn)中100例臨床觀 察J甘肅科技，2004, 20( 10)：182. ：2馬清鈞，王淑玲.常用中藥現(xiàn)代研究與臨床購天津：天津科技翻譯出 版公司，1995:382. 3 Hall PA,Levison DA, WoodsAL, et al. Proliferationing cell nuclear antigen (PCNA) immunolocation in paraffin section: Anin dex of ce

14、ll proliferati onwith evide nee in some neoplasms :J . J Pathol,1990,162:285. 4 Lipponen PK, Eskelinen MJ .Cell proliferation of tran siti oning cell bladder tumor determ ined by PCNA cycl in immuno sta ining and its prog no Stic valye J . Br J Can cer,1992, 66： 171. 5 Dai D, Mouiton BC, Ogle TF, etal. Regression of the decidu