1、.玫瑰單胞菌研究現狀.玫瑰單胞菌是一種粉紅色的、革蘭氏陰性、需氧 的小球桿囷，是在1993年由Rihs等人利用生化實驗 以及DNA雜交等手段，對42株革蘭氏陰性非Methy- lobactermm的粉紅色細菌進行分類后而正式命名的, 在伯杰氏細菌鑒定手冊第9版上還沒有收錄。該菌 多是從一些臨床病人標本中分離獲得，如血、傷口、滲 出液、潰瘍、泌尿生殖道、腹膜透析液等, 80%的分 離病人多合并一些免疫低下疾病，如慢性白血病、 惡性腫瘤、腎衰、類風濕等。因此許多學者普 遍認為，該菌可能為條件致病菌，但臨床上確有因合 并該菌感染而致死的病例報道。我國目前還沒有關于這方面臨床病例的報道。近來，一些學者

2、又從飲 用水、淡水湖、土壤以及其他一些自然環境樣本中分離到了玫瑰單胞菌，而且多位學者對現有的分離株依據16S rRNA進行了細致的分型,但是， 時至今日對于玫瑰單胞菌仍缺乏系統深入地研究。 該菌的病原學、檢測技術、致病機制以及諸多流行病學特征等到現在仍不清楚。目前，關于該菌的研究還主要停留在分類鑒定、生化特性及臨床病例報告等方 面，本文現對玫瑰單胞菌的國內外研究現況作簡要介紹。1玫瑰單胞菌的分類1984年,Gilardi和Faur等發現了一些類似Methy- lobacterium（甲基桿菌）的粉紅色細菌，但是經研究發現與已有的菌種皆不相同，遂將這些粉紅色細菌定義 為一個未知的菌種20。199

3、3年,Rihs等人利用生化實驗以及DNA雜交等手段，對42株粉紅色的革蘭氏陰性菌進行了較為系統的研究，正式命名了玫瑰單胞菌屬，并認為該菌屬包括3個已命名的種(R.gilariii,Rcervicalii及R.yauriae)及3個未命名的基因種。近年來由于科技的進步、生物化學的研究深入和遺傳學方面的研究進展，基因雜交、基因測序技術的出現，使玫瑰單胞菌屬分類進入一個嶄新的階段。隨著更多細菌的分離以及細菌分型技術的提高，目前認為該類菌包括5個已命名的種R.gilardii（包括R.gilardii iubsp.gilardii 和R.gilardii subsp.rosea 兩個亞種) 、R.ce

4、rvi calis、R. fauriae、R. lacus 以及 R. mucosa。2玫瑰單胞菌的生物學特征玫瑰單胞菌對培養的要求不高，常用的細菌培養 基如肉膏蛋白胨培養基、LB培養基和麥康凱瓊脂培 養基等，玫瑰單胞菌均能生長,如在培養基中加入血 可以更加促進其生長。大體上，玫瑰單胞菌在培 養2天后，可見如小米粒大小、圓形隆起、微凸出于培 養基，不向培養基內生長，邊緣整齊，表面光滑濕潤呈 粉紅色、有光澤、黏液狀的菌落,34天菌落直徑達1 mm左右，散在分布。7天后直徑逐漸增大，菌落相互融合。該菌為革蘭氏染色陰性，球桿形，多數為成對和短鏈狀，在2537C生長，有些菌株在42C也 可以較好生長。

5、玫瑰單胞菌在透射電鏡下可見球桿形菌體，大小0.72m左右。Rihs、Han、Gal-ago 和 Jiang 等人分別對玫瑰單胞菌分離株理化特性進行了研究，實驗主要集中在研究玫瑰單胞菌產生各種酶的活性。綜合所有研究結果來看，目前該菌屬所有菌株都是氧化酶弱陽性（常在30 s后反應） 或氧化酶陰性，觸酶和尿酶陽性。硝酸鹽還原、硫化氫產生、七葉靈水解、明膠液化、葡萄糖發酵、檸檬酸鹽利用、甘露醇發酵、不同鹽度(NaCl%)生長、最適宜 生長溫度等理化特性方面，各菌株略有不同。玫瑰單胞菌屬成員都能夠產生粉紅色色素，這一 點與甲基桿菌屬(Methylobacterium)相同，因此，在1993年Rihs等人

6、對玫瑰單胞菌屬正式分類命名之前，人們常把它們歸為甲基桿菌屬。但是兩菌屬在形 態上和生化特性上也是有差別的。玫瑰單胞菌無空泡、較豐滿、球形、多數為成對和短鏈狀。在改良的Thayer-Martin瓊脂和麥康凱瓊脂上37C生長，但在 沙氏瓊脂上生長最好。菌落呈黏液流動狀。通過不氧化甲醇、不同化乙酰胺以及不吸收長波紫外光，可與甲基桿菌相鑒別。所有菌株都是氧化酶弱陽性（常 在30 s后反應）或氧化酶陰性，觸酶和尿酶陽性。玫瑰單胞菌屬對氨基糖苷類、四環素和亞胺培南敏感。3玫瑰單胞菌的病原學情況關于玫瑰單胞菌的致病能力、致病機制等情況， 目前還不清楚。但是從能檢索到有分離來源的玫瑰單胞菌菌株來看，其中絕大多

7、數(78.5%)從臨床病人分離獲得，如血、傷口、滲出液、潰瘍、泌尿生殖道、連續移走性腹膜透析液和骨頭標本等,其中來自血液樣本的占88%以上。更重要的是，80%的分離病人多合并一些免疫低下疾病，如慢性白血病、惡性腫瘤、腎衰、類風濕。因此許多學者認為，該菌能致使人體感染，可能為條件致病菌，而且臨床上確有因合并該菌感染而致死的病例報道。感染玫瑰單胞菌的病人主要臨床癥狀為發熱、白細胞增多，菌血癥等。病例報告者的年齡范圍從1月齡到91 歲不等，平均年齡為49.4歲，男女比例為3: 5較典型的臨床癥狀為敗血癥，占病人總數的34%。Struthers及 其同事在對分離到玫瑰單胞菌的35個患者的實驗室、 臨床

8、和流行病資料的評價中，認為玫瑰單胞菌對人可表現出低的致病潛力，但其中一些種，尤其是吉氏玫瑰單胞菌(R.gilardii),對于有潛在并發癥的患者來說是重要的病原菌。玫瑰單胞菌屬對氨基糖苷類、四 環素和亞胺培南敏感。然而,對于具有插管相關性感染的患者來說，除非移去感染的插管，否則難以消除細菌。邱爾臣等研究發現，該菌是一種潛在的病原體， 對小鼠具有致病能力，泌尿系統是實驗菌株最早也是最主要攻擊的對象，實驗小鼠的腎臟和膀胱的病變程度隨著時間的推移而逐漸加重。從腎臟及膀胱的病理改變情況看，類似于急性腎盂腎炎的表現。并且由于感染的持續存在，小鼠的膀胱粘膜萎縮變薄，移行上皮細胞層次減少，粘膜下間質細胞數量

9、增多，這些是間質性膀胱炎的典型特征。間質性病變也為癌 變提供了可能。致病性實驗表明，分離株對BALB/c 小鼠具有致病能力，是一種新的病原體。其組織器官的病理改變由急性發展成為慢性，可能是病原體在機 體內的長期存在所致。研究中發現小鼠病變與臨床病例報道較相同，提示其對人具有致病力，其致病機理有待進一步研究。4玫瑰單胞菌的流行病學目前，盡管已經從飲用水、淡水湖、土壤以及其他一些自然環境樣本中分離到了玫瑰單胞 菌，也有大量關于玫瑰單胞菌的臨床病例報道，但是 時至今日，該菌的自然宿主、媒介、傳播途徑等諸多流行病學特征仍不清楚。Shokar等在2002年報道了一病例，懷疑病人可能因蜘蛛叮咬而感染該菌，

10、但缺乏真實有力的證據。我們課題組在進行自然性疾病現場調查時,首次從蜱體內分離到了玫瑰單胞菌，這提示蜱可能是該菌的自然媒介。我們不僅從一飽血的草原革蜱體內分離獲得玫瑰單胞菌，將該蜱卵在實驗室條件下孵化成幼蜱后,從幼蜱中又分離得到玫瑰單胞菌，經16 S rDNA序列分析，兩者序列完全同源。 由于分離過程中，有效避免污染，因此，幼蜱體內玫瑰單胞菌的分出，表明該菌可能經蜱卵傳遞，進一步提示蜱可能為該菌在自然環境中的傳播媒介。對此，有待于進一步研究確認。5玫瑰單胞菌的實驗室檢測目前用于玫瑰單胞菌實驗室診斷的方法主要有以下幾種。5.1病原學方法該方法對于感染性疾病的診斷最可靠、最直接，也是目前臨床上主要應

11、用于感染玫瑰單胞菌的臨床患者的診斷方法。玫瑰單胞菌體外培養營養要求不高，但生長較緩慢，由于在培養基中加入血可以促進玫瑰單胞菌的生長，所以如果臨床分離中選擇適合的培養基并加入5%的羊血，有利于該菌的分離。另外，由于感染玫瑰單胞菌的臨床病例十分少見，許多醫生對其缺乏認識，尤其當細菌為粉紅色, 形態為球桿形體時,易與甲基桿菌相混淆。由于玫瑰單胞菌在伯杰氏細菌鑒定手冊上還沒有收錄，目前細菌自動鑒定分析儀器如API20NE等也沒有收錄該菌,鑒定也易與甲基桿菌相混淆。對此，要注意利用 玫瑰單胞菌的理化特性，如玫瑰單胞菌無空泡、較豐滿、球桿形、多數為成對和短鏈狀、菌落呈黏液流動 狀。通過不氧化甲醇、不同化乙

12、酰胺以及不吸收長波紫外光等與甲基桿菌相鑒別。我們針對實驗動物進行檢測時，利用CHAB培養基、LB培養基，從發病動物的血液、腎臟、膀胱及肝、脾等臟器中均可以分離出感染用的玫瑰單胞菌。5.2分子生物學方法與病原學方法相比，對于細菌的檢測，分子生物學方法具有敏感性高、快速等優點， 但目前國內外均沒有針對玫瑰單胞菌標準化的檢測試劑盒。對于可疑患者，臨床上主要從病人血、傷口 滲出液、潰瘍、泌尿生殖道、腹膜透析液、腦脊液等標本中提取致病菌的核酸，選用細菌通用引物，經PCR 擴增其16 S rRNA基因，測序后通過采用BLAST SEARCH法進行相似性檢索，與從GenBank和EMBL 等數據庫中搜集相關玫瑰單胞菌菌株所測定的16 S rDNA序列進行比較，作出判斷。盡管診斷步驟較為繁瑣，但對于尚未分離到該病原