.1、生物體內藥物分析方法及其應用，引言2。體內藥物分析方法的設計和建立。方法確認(評估、確認和評價)。嘿。2，1.1生物樣品分析是藥代動力學研究的必要手段：分析化學是化學科學中的“眼睛”，而“眼睛”是獲取大量信息的心靈“窗口”，定量分析定性分析(半定量)，1。引言源于化學的分析化學專業具有分析化學的基本概念和要求，不同于一般的藥物分析，具有生物學的特點。3.生物樣品中藥物的分析和測定是定量描述藥物體內過程和獲得藥代動力學參數的重要手段之一。方法類型和特點：體內藥物分析方法可大致分為五大類：1。光譜分析2。色譜3。毛細管電泳。免疫測定5。同位素方法(.)。傳統的分類方法：設定了各種方法的長度，是： HPLC-UV高效液相色譜-質譜聯用技術，5、體內藥物分析方法的特點：高靈敏度：受劑量限制，受生物利用度限制，低濃度和良好的特異性：生物內源性物質的干擾，體內新形成代謝物的干擾，少量樣品：血液(血漿、血清、全血)、尿液、膽汁、唾液、汗液、乳汁、精液和糞便、組織和器官，6。快速方法：這不是一個專門的方法學研究，使用這種方法可以快速澄清藥理學問題。可靠且可重復：藥代動力學實驗的不可重復性。藥物有多種類型：需要各種儀器和技術手段。7.1.2.1光譜分析比色法紫外分光光度法：微分、導數、雙波長和三波長熒光分光光度法，1.2.2色譜：高分離效率；高特異性的HPLC:具有廣泛的應用范圍。室溫測試；樣品預處理簡單；流動相選擇范圍廣；儀表自動化程度高的GC:化合物氣化；載氣種類很少；該方法靈敏，但受注入樣品量的限制。TLC:的檢測條件有限。毛細管電泳：分離效率高。膠束電動毛細管色譜結合高特異性毛細管區帶電泳毛細管凝膠電泳毛細管等速毛細管電泳毛細管電色譜具有進樣量少、檢測條件受限的特點。同位素方法：的靈敏度高。弱特異性放射強度表明標記藥物量(eq.ng/ml)同位素技術與其他分析方法相結合以提高特異性。1.2.4免疫測定：放射免疫測定酶免疫測定熒光免疫測定。10，(2)生物樣品的藥物測定方法生物樣品中的藥物測定，免疫學和微生物學方法。根據待測藥物的性質，應選擇特異性好、靈敏度高的測定方法。色譜包括高效液相色譜、氣相色譜和色譜-質譜。在同時測定生物樣品中多種化合物的情況下，液相色譜-串聯質譜法和氣相色譜-串聯質譜法在特異性、靈敏度和分析速度上更具優勢。放射性核素標記法應結合顏色法測定血藥濃度，以保證良好的檢測特異性。如果某些藥物難以使用上述檢測方法，可以選擇免疫學或生物學方法，但必須確保其可靠性。放射免疫分析和酶標免疫分析具有一定的特異性和較高的靈敏度，但原藥經常與其代謝產物或內源性物質發生交叉反應。應提供證據解釋其特異性。生物方法(如微生物方法)往往能反映藥效學的本質，但一般特異性較差。平行檢查應盡可能采用高特異性的方法(如色譜法)。根據：臨床前藥代動力學研究技術指南(第二稿)(草案)，11，2。體內藥物分析方法的設計和建立2.1體內藥物分析方法設計的主要依據是2.1.1闡明分析方法設計的目的。臨床藥物監測：要求D.新藥：試驗的批準應根據SFDA發布的指導原則按照標準操作程序進行。信息應迅速獲取。13、2.1.2了解待測藥物的特性，并研究文獻中藥物的結構和理化性質？溶解度？穩定性？藥物作用的藥理學和毒理學機制生物樣品：動物特性？組織器官？代謝藥物體內劑量給藥途徑中有多少樣品預處理方法(同一類化合物)干擾成分，14、2.1.3參考儀器和設備以及實驗室條件文獻？重復性？別人能做的事適合我們嗎？實驗室硬件建設與研究課題兼容嗎？毒品就是毒品！它不是一般的化合物。我們應掌握和了解其功效、毒性機制、理化性質、未來臨床應用等。只有加深理解，才能進行深入的代謝研究，包括藥物代謝研究所采用的方法和技術。體內藥物分析方法設計和建立的一般原則：方法確認(評估、確認和評價)生物樣品測定的關鍵是方法的確認。方法學確認是整個藥代動力學研究的基礎。這是藥代動力學研究與其他藥理學和毒理學研究的區別。所有藥代動力學研究結果都依賴于生物樣品的測定，只有可靠的方法才能獲得可靠的結果。通過對特異性、靈敏度、精密度、準確度和穩定性的研究，建立檢測方法后，獲得標準曲線后，在檢測過程中應進行方法學質量控制，應制備配套的標準曲線，并確定質量控制樣品，以保證檢測方法的可靠性。“摘自：臨床前藥代動力學研究技術指南(第二稿)(草案)”。18，3.1名義解釋：19，20、21，22標稱濃度：真實濃度(真實濃度值；算術值)，如：配置溶液(1.3毫克/毫升)；標準曲線或質控中的XNG/MLFortifiltedSamples :已處理樣品濃度標準：與測試物質(或根據測試樣品復制的標準物質)完全相同。23，3.2體內藥物分析方法的評價：1。選擇性： FDA/FDA 2。線性范圍和響應因子：S/F3。日間精度標準：S/F4。日內精度精度：S/F5。稀釋積分：F6 .靈敏度：S/F7。回收(提取效率)F8。矩陣效應3360F9 .結轉估價10 .穩定性：S/F11。相對保持力：24，3.2.1選擇性：被測組分與內源性物質、試劑中的雜質、代謝物和其他干擾物質有良好的分離；必須證明被測物質是預期的分析物，內源性物質和其他代謝物不得干擾樣品的測定。對于色譜分析，應調查至少6份來自不同來源的空白生物樣品的色譜圖、空白生物樣品加對照物質(指示濃度)的色譜圖以及用藥后生物樣品的色譜圖。質譜分析的原理應關注分析過程中的介質效應。待測藥物標準樣品色譜圖2。正常生物樣品色譜圖(空白)3。空白生物樣品加待測藥物的色譜圖。給藥后生物樣品的色譜圖，26，3.2.2線性范圍和響應因子：必須在測試報告(論文)中建立至少6個濃度(n=/5)的標準曲線；應使用與待測樣品相同的生物培養基；定量范圍應涵蓋所有要測量的濃度；不允許計算定量范圍外未知樣品的濃度。應使用空白生物樣品建立標準曲線，但這一點不包括在計算中。標準曲線的相關系數標準曲線線性范圍標準曲線，試驗報告(紙)應提供：5。空白生物樣品加受試藥物(低、中、高濃度；N5)濃度通過反算標準曲線來確定。標準曲線線性范圍內最低和最高濃度的樣品色譜圖。28，TABX。標準曲線反褶合藥物。29，3 . 2 . 3日間精密度和準確度：3 . 2 . 4日間精密度和準確度：精密度和準確度，定義為百分比相對標準偏差(%RSD=(標準偏差)(平均值)100)，WasDetedFromInterperatedQcsampleconcentrations。Accuracyofthemethod，defined by percentrelativeerror(% RE=(standard observedconcentration-nominal concentration)(nominal concentration)100)，Precision AndAccuracy，30，精度：精度，31要求選擇3種濃度的對照樣品，同時檢查方法的精密度和準確度。低濃度選擇在定量下限附近，其濃度在定量下限的3倍以內。高濃度接近標準曲線的上限。在中間選擇一個濃度。每批每種濃度至少應測定5個樣品，至少應連續測定3個分析批次，以獲得批次間精度。精密度用質量控制樣品批內和批間的相對標準偏差(RSD)表示。相對標準偏差一般應小于15%，接近最低允許質量時相對標準偏差應小于20%。準確度一般應在85% 115%的范圍內，并應在LLOQ附近的80% 120%的范圍內。如果您每天測量一次并連續測量5次以獲得日間結果，數據處理，34，35，36，3.2.5稀釋完整性：您如何測量超出線性范圍的樣品？對于大于200納克/毫升的樣品，稀釋：0500納克/毫升，50納克/毫升，10倍，處理和測量結果是否滿足要求的：50納克/毫升，37， 38，處理和測定結果是否滿足：10ng/ml、39、3.2.6靈敏度：的置信限(10 ng/ml)，定量下限是標準曲線上的最低濃度點，要求滿足3-5個半衰期或1/10-1/20 Cmax測定樣品中的藥物濃度，其準確度應在真實濃度的80%-120%范圍內，相對標準偏差小于20%。應通過至少5個標準樣品的測試結果來證明。最低檢測濃度(X/ml)、最低檢測量(X)、最低定量下限(lloq)。40歲。41、3.2.7回收率(萃取效率)，萃取回收率：應考察高、中、低濃度的萃取回收率，且結果應一致、準確、重現性好。低、中、高(3個濃度):回收率不低于70%(原規定)回收率不低于50%(已改變)、42，萃取回收率：43，方法回收率：低、中、高(3個濃度)添加量和檢測量的比較，法定最低濃度，濃度。添加量回收率(ng/ml)(ng/ml)(ng/ml)(%)(平均值)，12345678910112131415，法定最低工資，2122232425262728293032333435，美國廣播公司。44，3.2.8基質效應：當質譜用于體內定量藥物檢測時，應進行基質效應試驗，以觀察基質對藥物測定的影響。對矩陣沒有統一的解釋，矩陣曾被稱為“分析物的環境”，即除了索引書中的分析物之外的所有成分。就血清膽固醇(Chol)的測定而言，它是指血清中除Chol以外的所有成分及其理化性質。基質效應對臨床化學分析的影響越來越受到重視。當人工制備的參考物質用于酶動力學測定時，首次發現了這一點。根據NCCLS文件的定義，基質效應是指：(1)樣品中除分析物以外的其他成分對分析物測量值的影響。(2)基質干擾分析方法準確測定分析物的能力。廣義而言，基質效應還應包括已知的干擾物(如膽紅素、血紅蛋白、抗壞血酸等)。是Chol測定中的干擾物)，但目前，基質效應僅限于未知或不確定物質或因素(如粘度、酸堿度等)的影響。)在生物材料中。降低基體效應的研究方向仍有參考價值：改進室內質控樣品；(2)改進儀器設計和試劑組成；(3)選擇方法和方法參數，使其更具適應性和易于掌握，且對制劑基質(如標準溶液、室內質控樣品和質控材料)的準確性不敏感。嘿。47，矩陣因子(MF；基質因子):峰面積(分析樣品)生物培養基樣品的處理(強化樣品：)待測藥物的添加測定分析樣品3360標準樣品測定(兩種測定方法的藥物濃度相等)，48、ISadjustedMatrixFactor(由內標校正的基質因子):基質因子由色譜峰面積的峰面積計算。由內標校正的基質因子通過色譜峰面積比計算。比率(藥物/信息系統)(強化樣品)比率(藥物/信息系統)(分析樣品)(兩種方法的藥物濃度相等)矩陣因子為1，表明藥物測定不具有矩陣效應。矩陣效應影響范圍(矩陣因子；由內標校正的矩陣因子)在一定間隔內是可接受的。(0.8-1.2)，49歲。50，3.2.9結轉評估。在方法評估中，測試最高線性濃度(例如1000ng/ml)后，必須測試試劑空白樣品以評估殘留。在樣品的峰值時間(RT)，相應的信號可能出現在試劑空白樣品中，即LLOQ的百分比是多少？LLOP :1.0 ng/ml；驗收：0.8-1.2納克/毫升(1.0納克/毫升的20%)；當注入高濃度樣品時，分析系統中會有“攜帶污染”。當“污染”達到什么程度時，分析方法是可以接受的；分析