微藻工廠化培養經驗分享（附單胞藻的培養配方）大家好，很高興今天能跟大家交流一下微藻的規模培育。規模培育在水產養殖方面現在主要運用于大棚生物餌料方面(一定地點建立車間、濃縮之后近距離管道運輸到養殖區域)、提取色素添加在飼料中，至于土塘潑灑，如何控制量、增氧和開口餌料這方面正在摸索，需要大家一起總結出經驗。今天我跟大家主要跟大家分享一下藻種的工廠化規模化培育。群里面應該很多人都培育過藻，大家都知道藻種的培育分為一級、二級、三級培養，今天我是簡單從一級、二級、三級培養過程可能中遇到的問題、日常管理、接種、藻種營養配方這些方面做一下簡單的交流。因各地環境氣候、溫度、光照、水質條件不同。不同季節、藻種性質不同，單位水體養殖品種的需求量也不同。所以培養條件、營養鹽配方等各有不同。今天我主要是以金藻為例，引申出其他藻種的營養配方，讓大家學習一下其中的相似點。國內大部分水產育苗企業，在育苗生產中都是自備微藻養殖設施，自行生產各類餌料用微藻。但是一般育苗場都普遍缺乏相應的專業技術力量，只能利用各自的藻池和天然水體粗放培養，在餌料微藻種質、生產技術和應用方法上都各自為正，導致微藻種質混亂、供應不穩定、營養成分不平衡、餌料效價低、缺乏多品種集約化生產應用技術；同時，受限于微藻高密度養殖、采收技術和濃縮液保藏技術的限制，國內幾乎沒有統一的、專業化的餌料微藻質量標準和集中供應點。所以工廠化育苗需要及時的補充藻種，開口餌料非常重要。首先從工藝流程上來說一級培養：主要用于保種，主要用的儀器是錐形瓶，其能夠完全消毒，所以應用在保種上面特別多。二級培養：主要是用塑料白桶（聚丙烯材料），生產上也用20L的飲水桶，但是瓶口小，操作不方便，消毒也不徹底；而用氧氣袋又易破裂。在南方經常可以見到用玻璃制作的大型魚缸和氧氣袋。回復舉報|來自Android客戶端2樓2016-03-03 08:04 xiazaiba06知名人士10三級培養：主要有小型的10 m3、20 m3、30m3左右的室內水泥池，采光良好，白色透明玻璃鋼瓦或塑料薄膜于車間頂部用于培育藻種。接下來我主要簡單的講一下容器和工具的洗滌、消毒。培藻過程中所有的容器和工具，比如錐形瓶、礦泉水桶、攪拌棒等必須經過去污漬、肥皂等刷洗，之后再用消毒后的蒸餾水沖洗3-4遍。消毒的方法一般有加熱消毒法、化學試劑消毒法、紫外線消毒法。一般小型儀器用加熱消毒法，比如錐形瓶，方法是在錐形瓶瓶口放一培養皿，瓶中加水，煮沸，煮沸完之后，用牛皮紙或紗布包住，備用，這種方法能殺死營養體的部分芽孢。大型儀器、工具、培養池用化學藥品消毒（漂白粉、酒精、高錳酸鉀、鉻酸洗液等），漂白粉的有效氯含量一般是30-35%，漂白精的有效氯的含量是漂白粉的2倍，消毒時按1/10000-3/10000的含量配成水溶液，浸泡容器、工具半小時，再用消毒水沖洗3-4次（消毒水既是煮沸、沉淀、過濾其中的水）。水泥池的消毒可配成高濃度的漿糊狀漂白溶液，淋灑池壁，半小時后用消毒水沖洗干凈。也可以用較低含量的漂白粉進行全池浸泡后，用消毒水沖洗，停放12小時后才可使用。酒精消毒一般用于人為操作，如在活化藻種、搖瓶或者攪拌的時候，涂抹手，消毒小的儀器上使用。酒精一般是配置成70-75%左右，殺菌效果是最顯著的，使生物蛋白脫水變性凝固，故有殺菌效果。海水的消毒，一般海水的消毒有過濾和加入化學消毒劑法。因為海水消毒主要用于三級培養，三級大規模培養時候主要用于殺滅有害生物，處理水必須無毒，對培養藻類的生長繁殖影響不大。水消毒必須簡單、經濟、易行，不然大規模運水特別多的時候培藻成本會加大。補充：消毒海水時可根據培養的目的和方式選用以下方法之一。1、加熱消毒法：經沉淀、過濾的海水，一般加溫至90左右維持5分鐘或達到沸騰即可。由于海水中的一些對藻類生長有促進作用的有機物在高溫時易遭破壞，所以加溫時間不宜太長。2、過濾除菌法：把經沉淀的海水先經砂濾，把大型生物和非生物雜質去除，再用陶瓷過濾罐過濾，除去微小生物。3、次氯酸鈉消毒法：按每立方米海水20毫克有效氯的量加入次氯酸鈉溶液，充氣10分鐘后停氣，經67小時消毒后，按每立方米水體25克的量加入硫代硫酸鈉，強充氣46小時，用硫酸-碘化鉀-淀粉溶液測試，若無余氯即可使用。4、紫外線消毒：有成型的紫外線消毒器可供選用。但此法不易殺滅較大的浮游動物。最好和過濾法結合使用。加熱消毒我們就不解釋了。主要是過濾除菌消毒，沉淀后的海水經過紗慮池紗慮大型的生物及非生物雜質出去，再經陶瓷過濾罐過濾，除去微小生物，也可兩次紗慮，兩次紗慮也可以起到比較好的效果。漂白粉和漂白液消毒的時候，向水中加入漂白粉和漂白液，用硫代硫酸鈉中和余氯，中和余氯的過程以及操作流程的具體步驟如下：氯含量測定方法一硫代硫酸鈉滴定法需要的物品:1%碘化鉀溶液 (1 g溶于100ml水中)1.58%硫代硫酸鈉溶液 (1.58g溶于100ml水中 )HCI 37%樣品溶于一定數量的水中的溶液（即稀釋一定倍數）程序在滴定瓶中加50ml碘化鉀溶液，0.25ml HCI 和1ml樣品溶液，這時候瓶中溶液應該變為褐色用硫代硫酸鈉滴定，直到瓶中溶液變為澄清（沒有顏色）。每ml硫代硫酸鈉可以中和3.55ppt的氯樣品溶液的氯濃度 = 硫代硫酸鈉的毫升數3.55 100/1000(%) 樣品的氯含量=樣品溶液的氯濃度樣品稀釋倍數方法二1 試劑（1）KI溶液：10%。（2）淀粉溶液：0.5%。 稱取0.5克可溶性淀粉于小燒杯中，用少量水攪勻后加入 100ml的沸水中，加入后不斷攪拌，并煮沸至溶液透明為止。加熱時間不易過長且應迅速冷卻，以免降低淀粉指示劑的靈敏性能。如需久存，可加入少量的HgI2或ZnCl2等防腐劑。（3）H2SO4溶液：2 mol/L。（4）K2Cr2O7標準溶液：0.1000 mol/L。將K2Cr2O7在150-180烘干2小時，放入干燥器中冷卻至室溫。準確稱取1.2258克于100ml燒杯中，加蒸餾水溶解后轉入250ml容量瓶中，用水稀釋至刻度充分搖勻。（5）Na2S2O3溶液：0.1 mol/L。將12.5克Na2S2O3 5H2O溶解在500毫升新煮沸冷卻后的水中，加入0.1克碳酸鈉，儲于棕色瓶中并搖勻，保存于暗處一周后標定使用。（低濃度的溶液需稀釋）（6）丙二酸：20%溶液。2 實驗步驟（1） 硫代硫酸鈉溶液的標定用25毫升移液管吸取0.1000 mol/L重鉻酸鉀標準溶液三份，分別置于250毫升碘量瓶中，加入5毫升6N鹽酸、5毫升20%KI，搖勻后在暗處放置約5min，待反應完全，用100毫升水稀釋。用硫代硫酸鈉溶液滴定至溶液由棕色到綠黃色，加入2毫升0.5%淀粉指示劑，繼續滴定至溶液由藍色至亮綠色即為終點。根據消耗的硫代硫酸鈉溶液的毫升數計算其濃度。（低濃度的溶液標定類似）（2） 有效氯含量的測定取10毫升待測消毒溶液，置于250毫升碘量瓶中，加入2 mol/L 硫酸 10毫升，10%碘化鉀溶液10毫升，此時溶液出現棕色。蓋上蓋并振搖混勻后加蒸餾水數滴于碘量瓶蓋緣，在暗處放置約5min。打開蓋，讓蓋緣蒸餾水流入瓶內。用硫代硫酸鈉溶液（裝于25毫升棕色滴定管中）滴定游離碘，邊滴邊搖勻，待溶液呈淺棕黃色時，加入10滴0.5%淀粉指示劑，溶液立即變藍色，繼續滴定至溶液由藍色至無色即為終點。記錄消耗的硫代硫酸鈉溶液的毫升數（V，ml）。重復測3次，取3次平均值進行以下計算。 因1 mol/L硫代硫酸鈉標準溶液營養鹽接下來說一下營養鹽的加法。以金藻為例，金藻的生長繁殖過程中必須每個營養元素都有一個最低量，如果低于這個最低量，生長繁殖則會受到抑制，如果某種營養的含量過高也會對藻類產生毒害作用，甚至死亡，因為含量過高會破壞滲透壓系統，讓藻脫水死亡。今天我跟大家說一下金藻的營養鹽，一般主要的營養鹽配方是F/2，營養鹽有大量元素、微量元素以及維生素，大量元素一般都是硝酸鈉（NaNO3）、磷酸二氫鈉（ NaH2PO4），微量元素有鋅（Zn）、錳（Mn）、鉬（Mo）、鈷（Co）、銅（Cu）、鐵(Fe)，維生素有維生素B1（VB1）：主要是輔助糖類代謝，對能量起到積極的作用、維生素B12（VB12）：有利于鐵的利用，促進代謝等發育成熟、維生素B6（VB6）：活化多種酶，有助于VB12的吸收等、生物素（VBH）：脂肪和蛋白正常代謝不可或缺的物質，是一種維持生長、繁殖的營養素。培藻過程中如果是人工繁殖時，在光照、營養鹽、PH適合的情況它會非常大規模的繁殖。此時，水體中的二氧化碳會成為藻類繁殖的限制因子。現在金藻和其它藻在人工繁殖的時候，碳源的補充是非常重要的，因為其它營養鹽可以通過正交分解得出最優的含量，而在藻體繁殖過程中光合作用需要大量的二氧化碳，從而導致碳源的需求量增大，這時根據情況人為補充碳源的話會起到非常好的繁殖效果，可通過氣石、攪拌等方式補充二氧化碳。培藻過程中如果是人工繁殖時，在光照、營養鹽、PH適合的情況它會非常大規模的繁殖。此時，水體中的二氧化碳會成為藻類繁殖的限制因子。現在金藻和其它藻在人工繁殖的時候，碳源的補充是非常重要的，因為其它營養鹽可以通過正交分解得出最優的含量，而在藻體繁殖過程中光合作用需要大量的二氧化碳，從而導致碳源的需求量增大，這時根據情況人為補充碳源的話會起到非常好的繁殖效果，可通過氣石、攪拌等方式補充二氧化碳。培養金藻的時候，一般一、二級用康維方，康維方一般基于F/2配方基礎上的一個配方，而三級培養的時候用金藻培養液。金藻培養液：硝酸鈉溶液：磷酸二氫鉀溶液:檸檬酸鐵氨=100：10：1，1000ml滅菌海水。在三級培養的時候，營養鹽的添加都是1:1000的添加，就是1毫升的營養鹽添加到1L的水體中。在生產時可以為了生產等便利，可以放大配方比例，在大規模的培養中1：10000的添加也是可以的。實驗結果當然是1:1000最好，但是實驗和實際生產中肯定有一定的誤差，在實際生產中1:10000也可以正常的培育出高密度的金藻。當然在大規模的培養中1：10000的添加，起到的效果稍微差一點，但也不會差到哪里去。接種接下來就是接種，接種其實也是一個很簡單的操作，接下來我簡單說明下。金藻在二級培養（高密度擴大培養的時候），能達到700800萬個cell/ML，扁藻能達到100150萬個cell/ML，小球藻也能達到1000萬個cell/ML。接種就是把作為藻種的藻液接入新配好的培養液中，進行豐富培養。接種的過程雖然簡單，但要注意藻種的質量、藻種的密度、接入藻液的數量以及接種的時間等問題。藻種的質量我們可以根據藻細胞運動、附壁、沉淀、鏡檢顏色，觀察它的質量好壞。金藻是金褐色，硅藻是呈黃褐色，綠藻是鮮綠色，有運動能力會上浮，沒有運動能力均勻漂浮在水中。附壁和沉淀：好的藻種一般沒有明顯的附壁，如果藻種受到環境因子等各方面的不適宜條件的時候，會大量的聚集沉淀。鏡檢的時候一般都是觀察顏色和運動，有無雜藻，有無大的原生動物和蟲子，水體中的藻種是否過關。接藻的時候，金藻培育從二級向三級接的時候，金藻藻細胞達到250萬/毫升的時候就可以接種了。一級培養或小型培養可以是1:2或者1:3的接種，二級培養或生產培養可以是1:10、1:20、1:40的接種也可以正常生長。剛說的這些，1:20不清楚，我舉一些簡單的例子，假設5000Ml的錐形瓶，培養5000ML的藻液，可以接種1個 20L的礦泉水桶，3個20L的礦泉水桶可以接種1m3的保種池，1m3米的保種池可以接種2個5m3的生產池。接種時間一般選擇在早上的8:0010:00，這時候選擇接種是因為藻體的活性隨著光照、環境溫度的上升，活性是最好的，接種的時候它能夠快速的進入到指數生長期。培養工藝，金藻培養有一次性施肥、混合營養鹽的施肥和碳酸氫鈉分批次的施肥。金藻在國內現在應該是開放式半連續培養。日常管理日常管理是非常重要的一塊，跟消毒一樣。比如你培養了30m3的水池，如果你培養時從顏色等感覺還行，突然之間有可能全部死亡，可能是你日常管理不規范、不細致，引起雜菌繁殖和無法探知的原因導致培養的藻體全部死亡。2.2 亞心形扁藻培養液NaNO3 0.05克KH2PO4 0.005克FeC6H5O7 (1%溶液) 0.2毫升維生素B1 200微克維生素B12 200毫微克人尿 2毫升海水 1000毫升3、硅藻培養液配方3.1、湛江水產學院硅藻培養液NaNO3 0.08克KH2PO4 0.008克FeC6H5O7 (1%溶液) 0.2毫升Na2SiO3 0.02克維生素B1 200微克維生素B12 200毫微克人尿 1.5毫升海水 1000毫升培養三角褐指藻、小新月菱形藻、鈣質角毛藻、牟氏角毛藻。3.2、中肋骨條藻培養液KNO3 0.4克Na2HPO4 2H2O 0.04克K2SiO3 0.02克Fe(SO4)3 7H2O 0.014克土壤提取液 15毫升“920”植物生長激素 45國際單位海水 1000毫升3.3 牟氏角毛藻配方NH4NO3 520毫克KH2PO4 0.51毫克FeC6H5O7 3H20 0.52毫克海水 1000毫升4、金藻培養液配方4.1 “f /2”培養液NaNO3 74.8毫克NaH2PO4 4.4毫克Na2SiO3 9H2O 8.416.7毫克f /2微量元素溶液 1毫升f /2維生素溶液 1毫升海水 1000毫升4.2 等鞭金藻OA-3011培養液（陳椒芬等）NaNO3 0.06克K2HPO4 0.004克FeC6H5O7 0.5毫克Na2SiO3 0.005克維生素B1 100500微克維生素B12 0.51.5毫克NaHCO3 1克海水 1000毫升二、微量元素溶液配方1、A5-B6微量元素溶液配方A5：H3BO3 2.86克MnCl2.4H2O 1.81克ZnSO4.7H2O 0.22克CuSO4.5H2O 0.08克Na2MoO4 0.021克純水 1000毫升H2SO4 （濃） 1滴B6NH4VO3 229.6毫克Cr2(SO4)4.24H2O 960.2毫克NiSiO4.6H2O 447.8毫克Co(NO3)2.6H2O 493.8毫克Ti溶液 20毫升0.2摩爾/升 H2SO4 1000毫升Ti溶液配法：把736.6克草酸鈦溶解于少量純水中，加入氫氧化銨