組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)課程教學(xué)大綱課程編碼：25590214課程名稱：組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)英文名稱：開課學(xué)期：授課對象：統(tǒng)招碩士開課院系：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院開課教研室：學(xué)時：40（其中理論20，實(shí)驗(yàn)學(xué)時20）學(xué)分：0。5課程類型：公共選修課選用教材：主要參考書： 一、 課程目的與任務(wù)組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是研究組織和細(xì)胞的技術(shù)方法，被培養(yǎng)的組織和細(xì)胞也是實(shí)驗(yàn)研究的對象，本課程是醫(yī)學(xué)臨床與基礎(chǔ)專業(yè)碩士研究生的公共選修課程之一，在醫(yī)學(xué)各專業(yè)高級人才培養(yǎng)中具有重要地位。本課程系統(tǒng)介紹了組織和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)有關(guān)的概念，基本原理、操作程序和關(guān)鍵技術(shù)，及其在醫(yī)學(xué)研究和臨床實(shí)踐中的應(yīng)用，該領(lǐng)域的研究歷史和最新發(fā)展動態(tài)，轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)的概念、研究進(jìn)展、技術(shù)方法、建立方法、應(yīng)用及前景展望。旨在提升醫(yī)學(xué)專業(yè)碩士大研究生的知識結(jié)構(gòu)，掌握現(xiàn)代生物技術(shù)的基本實(shí)驗(yàn)技能，培養(yǎng)學(xué)生開拓創(chuàng)新的能力，適應(yīng)未來學(xué)科發(fā)展對人才的需求。二、 教學(xué)基本要求本課程系統(tǒng)論述了組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的理論和方法，簡要介紹了轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)及應(yīng)用，要求學(xué)生全面系統(tǒng)地掌握組織細(xì)胞培養(yǎng)的操作過程，了解各種操作的基本原理，在判定細(xì)胞生長好壞和是否發(fā)生污染的能力，熟悉體外培養(yǎng)細(xì)胞的生存條件，細(xì)胞的生物學(xué)性狀和與此有關(guān)的基本理論知識，了解國內(nèi)外細(xì)胞培養(yǎng)的最新動態(tài)和研究進(jìn)展，了解轉(zhuǎn)基因動物的概念、研究進(jìn)展、技術(shù)方法、建立方法、應(yīng)用，并能自行根據(jù)需要設(shè)計實(shí)驗(yàn)，運(yùn)用所學(xué)技術(shù)解決科研中的實(shí)際問題，提高學(xué)生綜合分析問題，系統(tǒng)利用專業(yè)知識的綜合素質(zhì)。三、 各章節(jié)內(nèi)容及學(xué)時分配第一章 組織培養(yǎng)技術(shù)的基本理論知識（4。5學(xué)時）目的與要求1、 掌握組織培養(yǎng)基本概念：了解對組織培養(yǎng)的評價；熟悉對組織培養(yǎng)工作者的要求和工作方法。2、 了解體內(nèi)外細(xì)胞的差異與分化；掌握培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)分類及培養(yǎng)細(xì)胞的人體形態(tài)；熟悉組織培養(yǎng)細(xì)胞的生長和增殖過程3、 熟悉培養(yǎng)細(xì)胞生存環(huán)境和條件4、 掌握體外培養(yǎng)細(xì)胞成功的關(guān)鍵步驟；熟悉體外培養(yǎng)細(xì)胞成功所需要的條件5、 熟悉體處培養(yǎng)細(xì)胞的種類和命名；掌握建立細(xì)胞系或細(xì)胞胞株的要求；熟悉已建軍立細(xì)胞系或細(xì)胞株的鑒定，管理和使用的規(guī)則。教學(xué)內(nèi)容第一節(jié) 組織培養(yǎng)基本概念（0。5學(xué)時）1、 組織培養(yǎng)基本概念；組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、器官培養(yǎng)2、 對組織培養(yǎng)的評價；組織培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)3、 對組織培養(yǎng)工作者的要求和工作方法本節(jié)重點(diǎn)、難點(diǎn)：組織細(xì)胞培養(yǎng)所涉及的基本概念第二節(jié) 組織培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)（2學(xué)時）1、 體內(nèi)外細(xì)胞的差異與分化；體內(nèi)外細(xì)胞的差異的表現(xiàn)，分化的概念、機(jī)制、細(xì)胞分化的關(guān)鍵2、 培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)分類；貼附型和懸浮型；貼附型；成纖維型；游走型、上皮型和多形型3、 培養(yǎng)細(xì)胞的人體形態(tài)；貼附型和懸浮型；體外培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)及細(xì)胞機(jī)能狀態(tài)不良的形態(tài)4、 組織培養(yǎng)細(xì)胞的生長和增殖過程，傳代；組織培養(yǎng)細(xì)胞生命期；原代培養(yǎng)期、傳代期、衰退期本節(jié)重點(diǎn)、難點(diǎn)：體內(nèi)外細(xì)胞的差異與分化；培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)分類；傳代的概念，原代培養(yǎng)期、傳代期、衰退期的概念及特征第三節(jié) 培養(yǎng)細(xì)胞生存環(huán)境和條件（0。5學(xué)時）1、 無污染環(huán)境2、 溫度3、 氣體環(huán)境和氫離子濃度4、 體外培養(yǎng)細(xì)胞生存所需基本物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、元素、促細(xì)胞貼附物質(zhì)5、 滲透壓6、 培養(yǎng)基；合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)基7、 附著底物，依賴性的概念，幾種常見的附著底物玻璃、一次性塑料、微載體、飼細(xì)胞8、 抑制細(xì)胞生長因素9、 細(xì)胞代謝與調(diào)控本節(jié)重點(diǎn)、難點(diǎn)：無污染環(huán)境；溫度；氣體環(huán)境和氫離子濃度；培養(yǎng)基；附著物第四節(jié) 體外培養(yǎng)細(xì)胞成功率的分析（1學(xué)時）1、 組織和細(xì)胞供體年齡2、 培養(yǎng)條件3、 貼附底物4、 培養(yǎng)方法本節(jié)重點(diǎn)、難點(diǎn)：體外培養(yǎng)細(xì)胞優(yōu)的關(guān)鍵步驟第五節(jié) 建立細(xì)胞系或細(xì)胞株（0。5學(xué)時）1、 體外培養(yǎng)細(xì)胞的種類和命名；初代培養(yǎng)、細(xì)胞系、克隆細(xì)胞株、腫瘤細(xì)胞系或株、有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系、亞系、二倍體細(xì)胞、遺傳缺陷細(xì)胞；幾個常見的腫瘤細(xì)胞系或株的名稱2、 建立細(xì)胞系或細(xì)胞株的要求：組織來源、細(xì)胞生物檢測、培養(yǎng)條件和方法3、 已建立細(xì)胞系或細(xì)胞株的鑒定，管理和使用本節(jié)重點(diǎn)、難點(diǎn)：初代培養(yǎng)、細(xì)胞系、克隆細(xì)胞株、腫瘤細(xì)胞系或株的概念；建立細(xì)胞系或細(xì)胞株的要求。第二章 組織培養(yǎng)設(shè)施和基本條件（2學(xué)時）目的與要求1、 掌握組織細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計原則和組織培養(yǎng)工作包括的內(nèi)容2、 熟悉無菌操作設(shè)施和工作間的布局與使用3、 熟悉實(shí)驗(yàn)室設(shè)備及使用原理4、 熟悉器械及培養(yǎng)器皿教學(xué)內(nèi)容第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室設(shè)計設(shè)計原則和組織培養(yǎng)工作包括的內(nèi)容第二節(jié) 無菌操作設(shè)施和工作間1、 凈化工作臺2、 無菌操作室3、 無菌操作箱4、 清洗和準(zhǔn)備區(qū)5、 溫育和貯存區(qū)6、 觀察和研究區(qū)第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備1、 電熱恒溫箱2、 電熱干燥箱3、 冰箱4、 顯微鏡5、 水純化裝置6、 洗刷裝置7、 抽濾裝置8、 細(xì)胞冷凍貯存器9、 離心機(jī)10、 天平11、 加樣器第四節(jié) 器械第五節(jié) 培養(yǎng)器械1、 玻璃瓶皿2、 塑料平皿本章重點(diǎn)、難點(diǎn)：無菌操作設(shè)施和工作間的布局與使用，培養(yǎng)室內(nèi)的無菌操作程序第三章 培養(yǎng)用液（2學(xué)時）目的與要求1、 掌握組織培養(yǎng)用水的標(biāo)準(zhǔn)和各種平衡鹽溶液的配制及用途2、 了解天然培養(yǎng)基的成分及用途3、 熟悉合成培養(yǎng)基的種類、成分，掌握合成培養(yǎng)基的配制；熟悉無血清培養(yǎng)基的成分及適用范圍4、 熟悉培養(yǎng)基的選擇方法5、 掌握消化液、PH值調(diào)整液、抗生素液的作用教學(xué)內(nèi)容第一節(jié) 水和平衡鹽溶液1、 水2、 平衡鹽溶液（BSS）第二節(jié) 天然培養(yǎng)基第三節(jié) 合成培養(yǎng)基1、 合成培養(yǎng)基的種類2、 合成培養(yǎng)基的成分3、 合成培養(yǎng)基的配制4、 無血清培養(yǎng)基第四節(jié) 培養(yǎng)基的選擇1、 經(jīng)驗(yàn)法2、 實(shí)驗(yàn)法第五節(jié) 其它常用液1、 消化液2、 PH值調(diào)整液3、 抗生素液本節(jié)重點(diǎn)、難點(diǎn)：合成培養(yǎng)基的配制；無血清培養(yǎng)基的適用范圍第四章 清洗與消毒（1。5學(xué)時）目的要求1、 掌握清洗的主要目的，玻璃器皿，膠塞、塑料器皿的清洗方法；掌握包裝的目的和方法2、 掌握物理消毒法、化學(xué)消毒法、抗生素消毒液（滅菌）的適用范圍教學(xué)內(nèi)容第一節(jié) 清洗1、 玻璃器皿的清洗2、 膠塞的清洗3、 塑料器皿的清洗4、 包裝第二節(jié) 消毒1、 物理消毒法2、 化學(xué)消毒法3、 抗生素消毒液（滅菌）本章重點(diǎn)、難點(diǎn)：玻璃器皿、膠塞的清洗、塑料器皿的清洗方法；包裝的方法；物理消毒法，化學(xué)消毒，抗生素消毒液（滅菌）的適用范圍第五章 基本培養(yǎng)技術(shù)（3學(xué)時）目的要求1、 掌握培養(yǎng)室內(nèi)的無菌操作、取材及組織的分離，細(xì)胞計數(shù)法，細(xì)胞凍存及復(fù)蘇，細(xì)胞運(yùn)送2、 掌握初代培養(yǎng)法、傳代培養(yǎng)法3、 了解特殊培養(yǎng)法教學(xué)內(nèi)容第一節(jié) 組織培養(yǎng)的基本操作和培養(yǎng)技術(shù)（1。5學(xué)時）1、 培養(yǎng)室內(nèi)的無菌操作2、 取材及組織的分離3、 細(xì)胞計數(shù)法4、 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇5、 細(xì)胞運(yùn)送本節(jié)重點(diǎn)、難點(diǎn)：培養(yǎng)室內(nèi)的無菌操作、取材及組織的分離，細(xì)胞凍存與復(fù)蘇，細(xì)胞運(yùn)送第二節(jié) 常規(guī)組織培養(yǎng)法（1學(xué)時）1、 初代培養(yǎng)法2、 傳代培養(yǎng)法本節(jié)重點(diǎn)、難點(diǎn)：初代培養(yǎng)法第三節(jié) 特殊培養(yǎng)；單細(xì)胞分離（克?。?。5學(xué)時）本節(jié)重點(diǎn)、難點(diǎn)：單細(xì)胞分離（克?。┡囵B(yǎng)方法第六章 組織污染的檢測與排除（1。5學(xué)時）目的與要求1、 熟悉污染途徑2、 熟悉污染對細(xì)胞的影響3、 掌握微生物污染的排除方法教學(xué)內(nèi)容第一節(jié) 污染途徑第二節(jié) 污染對細(xì)胞的影響一、污染對細(xì)胞的影響1、 支原體2、 病毒、細(xì)菌、真菌3、 化學(xué)物二、微生物污染的檢測1、真菌污染2、細(xì)菌污染3、支原體污染第三節(jié) 微生物污染的排除1、 抗生素除菌法2、 加溫除菌法3、 動物體內(nèi) 種除菌法4、 巨噬細(xì)胞吞噬法本節(jié)重點(diǎn)、難點(diǎn)：微生物污染的檢測、微生物污染的排除第七章 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)（2。5學(xué)時）目的要求1、 熟悉組織培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性2、 熟悉腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)方法教學(xué)內(nèi)容1、 培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性2、 培養(yǎng)方法；要點(diǎn)；成纖維細(xì)胞的排除法，提高腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長率措施；體外培養(yǎng)增殖細(xì)胞生物學(xué)檢測本章重點(diǎn)、難點(diǎn)：腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的要點(diǎn)，成纖維細(xì)胞的排除法，提高腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長率措施第八章 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)及其應(yīng)用（3學(xué)時）目的要求了解轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)的概念產(chǎn)、研究進(jìn)展、技術(shù)方法、建立方法、應(yīng)用及前景展望教學(xué)內(nèi)容第一節(jié) 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)和轉(zhuǎn)基因動物的概念1、 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)；概念，特點(diǎn)，前景2、 轉(zhuǎn)基因動物、嵌合體動物；概念，特點(diǎn)第二節(jié) 轉(zhuǎn)基因動物研究進(jìn)展1、 轉(zhuǎn)基因動物研究進(jìn)展2、 我國的轉(zhuǎn)基因動物研究第三節(jié) 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)常用方法1、 顯微注射技術(shù)2、 逆子轉(zhuǎn)錄病毒載體技術(shù)3、 胚胎亞細(xì)胞（ES細(xì)胞）介導(dǎo)技術(shù)4、 精子載體技術(shù)5、 電轉(zhuǎn)移技術(shù)6、 基因直接導(dǎo)入技術(shù)第四節(jié) 轉(zhuǎn)基因動物的建立方法1、 顯微注射技術(shù)；主要儀器，附屬設(shè)備，優(yōu)點(diǎn)2、 顯微注射法建立轉(zhuǎn)基因鼠的一般程序第五節(jié) 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用1、 腫瘤學(xué)研究2、 免疫學(xué)研究3、 遺傳學(xué)研究4、 病毒疾病研究5、 改良和培育動物新品種6、 生物活性物質(zhì)研制生產(chǎn)第六節(jié) 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)前景展望本節(jié)重點(diǎn)、難點(diǎn)： 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)、轉(zhuǎn)基因動物有嵌合體動物的概念；轉(zhuǎn)基因動物的建立方法；顯微注射法建立轉(zhuǎn)基因的一般程序四、 實(shí)驗(yàn)1、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c任務(wù) 掌握組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中的基本實(shí)驗(yàn)操作方法，加深對基本理論和基本方法的認(rèn)識，培養(yǎng)學(xué)生科研實(shí)驗(yàn)的能力，適應(yīng)未來學(xué)科發(fā)展對人才的要求2、 實(shí)驗(yàn)教學(xué)基本要求1） 掌握組織細(xì)胞實(shí)驗(yàn)器皿的清洗，包裝與消毒2） 掌握各種培養(yǎng)用液的配置與過濾或消毒的方法3） 掌握培養(yǎng)室內(nèi)的無菌操作、取材及組織的分離、細(xì)胞凍存、復(fù)蘇與細(xì)胞運(yùn)送的方法及原理4） 掌握原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)的方法5） 掌握小鼠腹水瘤細(xì)胞小鼠腹腔傳代、抽腹水、細(xì)胞接種培養(yǎng)、小鼠胞妹剖取材的方法6） 熟悉微生物污染的檢測、微生物污染的排除7） 了解腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)與單細(xì)胞分離培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)3、 實(shí)驗(yàn)教材或指導(dǎo)書 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目一覽表序號實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目內(nèi)容提要實(shí)驗(yàn)類型學(xué)時分配主要儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)備注1組織細(xì)胞培養(yǎng)的器皿準(zhǔn)備及動物實(shí)驗(yàn)1、清洗器皿2、腫瘤細(xì)胞小鼠腹腔傳代實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)、設(shè)計性實(shí)驗(yàn)4培養(yǎng)液、試管、移液管、注射器、小鼠、腫瘤細(xì)胞病理學(xué)教研室、細(xì)胞培養(yǎng)室2腫瘤細(xì)胞原肛培養(yǎng)及傳代1、包裝2、腫瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)3、貼壁細(xì)胞解凍、培養(yǎng)驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)、設(shè)計性實(shí)驗(yàn)4液氮罐、搪瓷盆、離心機(jī)、凈化工作臺、倒置顯微鏡、眼科剪、青霉素上瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)液病理學(xué)教研室、細(xì)胞培養(yǎng)室3腫瘤細(xì)胞計數(shù)、接種1、抽濾、高壓、高溫消毒2、克隆化方法示教驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)4濾器、高壓蒸氣消毒罐、高溫電熱箱、試管、移液管、光學(xué)顯微鏡病理學(xué)教研室、細(xì)胞培養(yǎng)室4腹水抽取、細(xì)胞解凍、凍存、運(yùn)輸1、抽腹水、細(xì)胞計