含量測定分析方法驗證的可接受標準簡介審評四部 黃曉龍摘要：本文介紹了在對含量測定所用的分析方法進行方法學驗證時，各項指標的可接受標準，以利于判斷該分析方法的可行性。 關鍵詞：含量測定 分析方法驗證 可接收標準 在進行質量研究的過程中，一項重要的工作就是要對質量標準中所涉及到的分析方法進行方法學驗證，以保證所用的分析方法確實能夠用于在研藥品的質量控制。為規范對各種分析方法的驗證要求，我國已于2005年頒布了分析方法驗證的指導原則。該指導原則對需要驗證的分析方法及驗證的具體指標做了比較詳細的闡述。但是文中未涉及各具體指標在驗證時的可接受標準，國際上已頒布的指導原則中也未發現相關的要求。另一方面，大多數藥品研發單位在進行質量研究時，已逐步認識到分析方法驗證的必要性與重要性，大都也在按照指導原則的要求進行分析方法驗證，但驗證完后卻因沒有一個明確的可接受標準，而難以判斷該分析方法是否符合要求。本文結合國外一些大型藥品研發企業在此方面的要求，提出了在對含量測定方法進行驗證時的可接受標準，供國內的藥品研發單位在進行研究時參考。 1準確度 該指標主要是通過回收率來反映。驗證時一般要求分別配制濃度為80、100和120的供試品溶液各三份，分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率。 可接受的標準為：各濃度下的平均回收率均應在98.0%-102.0%之間，9個回收率數據的相對標準差（RSD）應不大于2.0%。 2線性 線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗證方法為： 在80至120的濃度范圍內配制6份濃度不同的供試液，分別測定其主峰的面積，計算相應的含量。以含量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸分析。 可接受的標準為：回歸線的相關系數（R）不得小于0.998，Y軸截距應在100響應值的2以內，響應因子的相對標準差應不大于2.0%。 3精密度 1）重復性 配制6份相同濃度的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進行測試，所得6份供試液含量的相對標準差應不大于2.0%。 2）中間精密度 配制6份相同濃度的供試品溶液，分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進行測試，所得12個含量數據的相對標準差應不大于2.0%。 4專屬性 可接受的標準為：空白對照應無干擾，主成分與各有關物質應能完全分離，分離度不得小于2.0。以二極管陣列檢測器進行純度分析時，主峰的純度因子應大于980。 5檢測限 主峰與噪音峰信號的強度比應不得小于3。 6定量限 主峰與噪音峰信號的強度比應不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液主峰的保留時間的相對標準差應不大于2.0%。 7耐用性 分別考察流動相比例變化5、流動相pH值變化0.2、柱溫變化5、流速相對值變化20時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次。可接受的標準為：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質峰必須達到基線分離；各條件下的含量數據（n=6）的相對標準差應不大于2.0%。 8、系統適應性 配制6份相同濃度的供試品溶液進行分析，主峰峰面積的相對標準差應不大于2.0%，主峰保留時間的相對標準差應不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質峰必須達到基線分離，主峰的理論塔板數應符合質量標準的規定。有關物質分析方法驗證的可接受標準簡介黃曉龍摘要：本文介紹了在對有關物質檢查所用的分析方法進行方法學驗證時，各項指標的可接受標準，以利于判斷該分析方法的可行性。關鍵詞：有關物質檢查 分析方法驗證 可接收標準藥品中的有關物質泛指在藥品的生產與儲存過程中產生的工藝雜質或降解產物。由于這些有關物質的存在會影響到藥品的純度，進而可能會產生毒副作用，所以有關物質的控制是藥品研發的一個重要方面，也是我們在藥品審評中一直重點關注的要點之一。而要對有關物質進行嚴格的控制，就離不開專屬性強、靈敏度高的分析方法，這就涉及到分析方法的篩選與驗證。從現有的申報資料看，藥品研發單位已基本上意識到分析方法驗證的重要性，但是對驗證時各具體指標是否可行尚沒有一個明確的可接受標準，從而難以對驗證結果進行評判。為解決這一問題，本文結合國外一些大型藥品研發企業在此方面的要求，提出了在對有關物質檢查方法進行驗證時的可接受標準，供國內的藥品研發單位在進行研究時參考。1準確度該指標主要是通過回收率來反映。驗證時一般要求根據有關物質的定量限與質量標準中該雜質的限度分別配制三個濃度的供試品溶液各三份（例如某雜質的限度為0.2%，則可分別配制該雜質濃度為0.1、0.2和0.3的雜質溶液），分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率，并計算9個回收率數據的相對標準差（RSD）。該項目的可接受的標準為：各濃度下的平均回收率均應在80%-120%之間，如雜質的濃度為定量限，則該濃度下的平均回收率可放寬至70%-130%，相對標準差應不大于10%。2線性線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗證方法為：在定量限至一定的濃度范圍內配制6份濃度不同的供試液，分別測定該雜質峰的面積，計算相應的含量。以含量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸分析。可接受的標準為：回歸線的相關系數（R）不得小于0.990，Y軸截距應在100響應值的25以內，響應因子的相對標準差應不大于10%。3精密度1）重復性配制6份雜質濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進行測試，所得6份供試液含量的相對標準差應不大于15%。2）中間精密度配制6份雜質濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進行測試，所得12個含量數據的相對標準差應不大于20%。4專屬性可接受的標準為：空白對照應無干擾，該雜質峰與其它峰應能完全分離，分離度不得小于2.0。5檢測限雜質峰與噪音峰信號的強度比應不得小于3。6定量限雜質峰與噪音峰信號的強度比應不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液雜質峰保留時間的相對標準差應不大于2.0%，峰面積的相對標準差應不大于5.0%。7耐用性分別考察流動相比例變化5、流動相pH值變化0.2、柱溫變化5、檢測波長變化5nm、流速相對值變化20以及采用三根不同批號的色譜柱進行測定時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次。可接受的標準為：各雜質峰的拖尾因子不得大于2.0，雜質峰與其他成分峰必須達到基線分離；各條件下的雜質含量數據（n=6）的相對標準差應不大于2.0%，雜質含量的絕對值在0.1以內。8、系統適應性配制6份相同濃度的雜質溶液進行分析，該雜質峰峰面積的相對標準差應不大于2.0%，保留時間的相對標準差應不大于1.0%。另外，雜質峰的拖尾因子不得大于2.0，理論塔板數應符合質量標準的規定。9溶液穩定性按照分析方法分別配置對照品溶液與供試品溶液，平行測定兩次主成分與雜質的含量，然后將上述溶液分別貯存在室溫與冰箱冷藏室（4）中，在1、2、3、5和7天時分別平行測定兩次主成分與雜質的含量。可接受的標準為：主成分的含量變化的絕對值應不大于2.0%，雜質含量的絕對值在0.1以內，并不得出現新的大于報告限度的雜質。FDA關于仿制藥申請中原料藥雜質研究的指導原則（討論稿）介紹審評七室 史繼峰 摘要：本文主要介紹了FDA關于仿制藥雜質研究的最新指導原則。該指導原則對1999年版的同名指導原則進行了修訂，文中對仿制藥的雜質研究及限度控制進行了詳細闡述。介紹該指導原則，希對我國仿制藥研制有一些提示。 關鍵字：FDA 仿制藥 雜質研究 指導原則 仿制藥申請：原料藥雜質研究指導原則（討論稿）于2005年1月28日在FDA網站發布。FDA對1999年版同名指導原則進行修訂是基于以下兩點考慮：其一，為了與2003年ICH修訂的Q3A（R）“新藥原料藥雜質研究指導原則” 相一致，對仿制藥申請（ANDAs）同名指導原則中的“雜質列表、可接受的標準及雜質的合理控制（限度與方法）內容進行更新。其二，刪除1999年版指導原則中與Q3A（R）敘述重復的部分（如雜質分類、分析過程及方法等等）。 限于篇幅，本文僅對其最重要部分“雜質的合理控制（QUALIFICATIONS OF IMPURITIES）”（原文第四部分）作介紹。 雜質的合理控制（QUALIFICATIONS OF IMPURITIES） A 質控限度的考慮 ICH Q3A (R)中推薦的“質控限度”是根據原料藥每日劑量來制訂的。如果所制訂的限度超過該限度值，就必須提供所訂限度的合理性依據。某些情況下，“質控限度”可調高或降低。比如，當有證據表明某藥物中的雜質與副作用相關，就很有必要降低該雜質限度。相反，如果雜質與安全性無多大關聯，雜質限度值可以設定高一些。FDA會根據患者人群、藥物分類及歷史數據等因素考慮申請者對雜質限度的調整。 B 雜質限度的研究方法 如果雜質水平超過了ICH Q3A(R)中推薦的“質控限度”，那么可以參考附錄1中的決策樹來制訂雜質的合理限度。一般情況下，與其提供額外的論證資料還不如把雜質水平控制在限度值以下更為簡便。當然，利用充足的文獻數據和資料也可以為雜質限度提供依據。雜質限度研究應考慮諸多因素，包括患者人群、每日劑量、給藥途徑和用藥持續時間等。雜質限度研究可以用含有擬控制雜質的原料藥，也可以直接用分離出來的雜質進行。雜質限度研究可以采用下面三種方法。 第一，對比分析法 ANDA中原料藥的雜質可以采用相同的分析方法（如HPLC研究方法），與FDA已批準的同品種進行對比研究。一般情況下，已批準同品種應選擇對照藥（RLD）。然而，如果無法獲得RLD藥物，也可以與具有相同給藥途徑的藥物進行對比研究（如片劑與膠囊比較）。建議用具有可比性的樣品（如樣品的留樣時間要一致）進行穩定性研究，以獲得有意義的雜質對比研究結果。 如果原料藥雜質水平與FDA已批準的同品種的雜質水平相當，那么可以認為該雜質得到合理控制。 第二，科學文獻和主要代謝物法 如果已定性雜質的水平得到科學文獻的充分論證，那么該雜質的限度就無需進一步論證。此外，如果某雜質本身也是原料藥在體內的主要代謝物，通常也認為該雜質已得到合理控制。 第三，遺傳毒性研究法 考慮到遺傳毒性試驗既費時間又代價不菲，此法一般是在前兩種方法都無法對雜質合理研究論證才采取的方法。這項研究可以采用含擬控制雜質的制劑或原料藥，也可以使用分離得到的雜質直接進行研究。 總之，雜質合理控制的最基本原則就是考慮其安全因素。如果滿足以下一點或幾點要求，某雜質基本可認為得到合理控制： 當實測水平和擬接受的雜質標準沒有超過FDA已批同類藥品的雜質水平。 當雜質本身就是原料藥的主要代謝物。 當實測水平和擬接受的雜質標準得到科學文獻的充分論證。 當實測水平和擬接受的雜質標準未超過體內遺傳毒性研究的雜質水平。 從FDA關于仿制藥申請的雜質研究指導原則可知，我國對仿制藥申請的要求正在與國際先進水平接近，但從審評的情況看，只有少數申報單位的研究能達到要求。譯者盼望本譯文對仿制藥的研制者有一些啟示，并期望與大家共同討論。對雜質研究的技術指導原則常見問題的認識審評四部 黃曉龍 2005年3月18日國家食品藥品監督管理局注冊司正式發布了2003年開始起草的化學藥16個技術指導原則。為配合這些指導原則的實施，有必要采用各種方式對這些指導原則進行宣傳，以加深各有關方面對指導原則內涵的理解。根據在雜質研究的技術指導原則的起草過程中及發布后所收集的意見進行分析，發現不少同仁對其中的一些內容尚不太理解，作為主要起草人，我想談一些個人的看法，以供大家在學習使用該指導原則時參考。 1質控限度如何使用的問題 在該指導原則中，根據原料藥與制劑的臨床用藥量的大小分別提出了單個雜質的質控限度。但在進行質量研究與標準制訂時如何使用這些限度，尚存在一些疑義。現對該限度的使用解釋如下：在本指導原則中反復強調，在制訂質量標準中的雜質限度時需首先考慮雜質的安全性。而雜質的安全性評價主要是綜合藥物研發過程中所進行的藥理毒理及臨床研究中的毒副作用與不良反應來判斷的。由于上述研究所用的樣品本身會包含一定種類與數量的雜質，所以如果在這些研究中并未明顯反映出與雜質有關的毒副作用，則可認為該雜質已經通過了安全性的驗證。在此前提之下，如果該雜質的含量同時也在正常的制備工藝所允許的限度范圍內，那么根據試驗樣品中雜質的含量所確定的限度可認為是合理的。之所以引入質控限度的規定，主要是為了減少對雜質安全性的驗證。如果某一雜質的含量低于規定的質控限度，則不必對該雜質的安全性進行確認，除非已知該雜質具有明顯的毒性。 2附件中為何不設定總雜質限度的問題 在指導原則中提出的各種限度都是針對單個雜質的限度。之所以未規定總雜質的限度，主要是考慮：就每一個具體的藥品而言，所含雜質種類的多寡不一，每個雜質的含量也不盡相同，因此，很難在指導原則中給出一個統一的總雜質限度。盡管指導原則中未規定總雜質的具體限度，但是作為雜質控制的一個重要參數，指導原則中已明確要求分別制訂每一個已知雜質、未知雜質及總雜質的限度。 3為何設定鑒定限度的問題 在國外相關