加試特訓(九)1請回答下列有關微生物的相關問題。資料一微生物在現代生物技術中應用非常廣泛，如釀酒制醋等。獲取純種釀酒酵母菌的基本程序是：配制培養基接種培養觀察記錄純化培養。(1)酵母菌的培養最好使用下列哪種培養基()a牛肉膏蛋白胨培養基b麥芽汁瓊脂培養基c無土栽培培養基dms培養基(2)采用劃線分離法接種時，開始接種時要灼燒接種環，目的是_。要把接種后的培養基和一個未接種的培養基同時放入恒溫箱培養，設置“未接種的培養基”的目的是_。(3)如果將分離出來的純種釀酒酵母接種到葡萄汁中發酵，如何獲得酒精含量更高的果酒？_。(4)把從酵母細胞中提取的淀粉酶固定在尼龍布上制成固定化酶，與傳統酶應用技術相比，此技術最顯著的優點是_。(5)某實驗小組欲按上述方法從土壤中篩選出能分泌淀粉酶的芽孢桿菌，應將菌液涂布接種于以_為唯一碳源的固體培養基上，30 條件下培養。為避免污染，需將培養皿呈_狀態放置；篩選時應將適量的碘液滴加在平板中的菌落周圍，如果菌落周圍的現象是出現透明圈，則說明此種菌能夠_。從平板中挑取實驗效果明顯的目的菌株，采用_法接種于新的培養基平板，可對菌株進行進一步的純化。資料二基因工程中常選用一些微生物作為工程菌，下圖為大腸桿菌及質粒載體的結構模式圖。(6)a代表的物質和質粒的化學本質相同，都是_，二者還具有其他共同點，如_，_(寫出兩條即可)。(7)若質粒dna分子的切割末端為，則與之連接的目的基因的切割末端應為_；可使用_把質粒和目的基因連接在一起。(8)氨芐青霉素抗性基因在質粒dna上被稱為_，其作用是_。(9)下列常在基因工程中用做載體的是()a蘇云金芽孢桿菌抗蟲基因b土壤農桿菌環狀rna分子c大腸桿菌的質粒d動物細胞的染色體答案(1)b(2)滅菌檢驗培養基是否被污染(3)往葡萄汁中加入適量的蔗糖(4)可重復使用(產品易純化)(5)淀粉倒置分泌淀粉酶使淀粉發生水解劃線分離(6)dna能夠自主復制具有遺傳效應(7)dna連接酶(8)標記基因篩選到含有重組dna分子的受體細胞(9)c解析(1)“細菌喜葷，霉菌喜素”，a培養基適用于細菌培養，b培養基適用于真菌培養；c培養基適用于植物體培養，d培養基適用于植物組織培養。(2)開始接種時要對接種環灼燒滅菌，接種后的培養基和一個未接種的培養基同時放入恒溫箱培養，目的是檢驗培養基在接種中是否被污染。(3)葡萄汁中添加蔗糖發酵能促進酵母菌快速生長，加快發酵產生酒精更多。(4)使用固定化酶的優點是酶制劑更加穩定、可以重復使用、產品易純化等。(5)以淀粉為唯一碳源的固體培養基通常只生長能利用淀粉的微生物。培養皿在培養過程中會有冷凝水從蓋上滴落到培養基上，培養皿倒置培養可以防止菌體隨水滴擴散，使分離菌種失敗。培養基中含淀粉遇碘液會顯藍色，若菌體能分解利用淀粉，其菌落周圍會出現透明圈。通過劃線分離法可以進一步分離純化菌種。(6)a為擬核，與質粒的化學本質相同，都為dna，均為大腸桿菌的遺傳物質，可以自主復制，并具有遺傳效應。(7)相同的限制性核酸內切酶切割目的基因和質粒，產生粘性末端的堿基序列互補，可以通過dna連接酶連接。(8)質粒上的抗性基因作為標記基因，可以用于篩選含有重組dna分子的受體細胞。(9)作為基因工程中的載體，應能夠自主復制，并具有標記基因和多個限制性核酸內切酶切點。2在工業生產中，淀粉酶主要是通過固定化酶技術將其用于淀粉的分解，淀粉酶廣泛分布于動物、植物和微生物中。請回答下列相關問題：(1)在上個世紀50年代，酶已經大規模地應用于各個生產領域，到了70年代又發明了固定化酶技術。固定化酶技術將酶固定在不溶于水的載體上，使酶既能與_接觸，又能與_分離，同時固定在載體上的酶還能_。常用的固定方法有_。(2)“淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測”實驗中：淀粉酶固定在_上，使用了下圖中方法_(填出號碼及名稱)。實驗中，用滴管滴加淀粉溶液時，使淀粉溶液以_流速過柱，目的是_。灌注了固定化酶的注射器在使用完后要_，放置在_中保存。(3)正常大鼠體內因含有淀粉酶基因可以正常利用淀粉。但研究發現某一突變型大鼠因體內缺少淀粉酶基因無法利用淀粉。現科研人員通過基因改造使其可以正常利用淀粉。具體流程如下：卵母細胞除從活體輸卵管中采集外，還可從已處死的雌鼠_中獲取。圖中的淀粉酶基因作為_，質粒作為_，二者需用_切割后連接成重組載體，該過程與質粒上含有_有關。子代大鼠如果_和_，即可分別在分子水平和個體水平上說明淀粉酶基因已成功表達。在上述轉基因大鼠的培育過程中，所用到的主要胚胎工程技術是_、早期胚胎培養和胚胎移植。答案(1)反應物產物反復利用吸附法、共價偶聯法、交聯法和包埋法(2)石英砂乙0.3 ml/min使淀粉充分與酶接觸用10倍柱體積的蒸餾水洗滌4 冰箱(3)卵巢目的基因載體同一種限制性核酸內切酶限制性核酸內切酶的切割位點檢測到相應蛋白質(淀粉酶)可利用淀粉體外受精解析(1)固定化酶技術將水溶性的酶通過物理或化學的方法固定在不溶于水的載體上，使酶既能與反應物接觸，又能與產物分離，酶可以重復利用。常用的固定方法有吸附法、共價偶聯法、交聯法和包埋法。(2)教材實驗中淀粉酶固定在圖乙所示的石英砂上。為了使淀粉充分與酶接觸，淀粉溶液以較慢的速度0.3 ml/min流速過柱。使用完畢的注射器要用10倍柱體積的蒸餾水洗滌后放置在4 冰箱中保存。(3)獲取卵母細胞的途徑有2條：從活體輸卵管中采集或從已處死的雌鼠卵巢中獲取。目的基因為淀粉酶基因，質粒為載體，兩者必須用相同的限制性核酸內切酶切割，有相同的粘性末端才能連接，能被限制性核酸內切酶切割，是因為具有限制性核酸內切酶的切割位點。如果檢測到相應蛋白質(淀粉酶)，即可在分子水平上說明目的基因已經表達，如果檢測到大鼠可以利用淀粉，即可在個體水平上說明目的基因已經表達。在上述轉基因大鼠的培育過程中，所用到的主要胚胎工程技術是體外受精、早期胚胎培養和胚胎移植。3在我們的周圍存在著各種各樣的微生物，比如大腸桿菌、酵母菌、乳酸菌、霉菌等。微生物與人類的生活、健康有著密切的聯系。請回答下列相關問題：(1)檢查飲用水中大腸桿菌數量時必須進行無菌操作。實驗前所需的各種器材如三角燒瓶、培養皿等需要經過_法滅菌。在微生物培養或分離過程中，下列操作不恰當的是_。a在超凈臺中進行接種時應該關閉紫外燈b擴大培養時必須保證氧氣的供應c控制液體培養基中營養物質的濃度d空白的培養基平板需進行無菌實驗(2)微生物與人類的生活關系越來越密切，在制作果酒、果醋、泡菜的過程中，用到的主要微生物分別是_。在果醋、泡菜和果酒的制作過程中，均利用相應微生物的代謝特點進行條件控制，其中需要提供氧氣的是_的制作。泡菜腌制原理是_和_等主要微生物利用菜中的_和其他營養物質進行發酵，產生有機酸和醇類物質。(3)因為培養基里面含有微生物或動植物細胞生長所必需的營養物質和成分，所以常用培養基來保存或增殖微生物或動植物細胞。配制培養大腸桿菌的培養基時，根據“細菌喜葷，霉菌喜素”的規律，通常在培養基中加入_作為營養物質，還需要考慮溫度、滲透壓和_等條件。大腸桿菌培養和分離的實驗中，在lb液體培養基中進行_，培養液經_后，在lb固體培養基上進行_，并將培養皿_放在恒溫培養箱中培養，可以獲得如圖效果。通常對獲得的純菌種可以依據_的形狀、大小等特征進行初步的鑒定。根據微生物的特點，可以利用相應的培養基進行分離或培養，例如用_的培養基分離能產生脲酶的微生物，用_的培養基培養蘋果青霉，可提高果膠酶的產量。利用固體培養基可以進行微生物培養和植物細胞培養，兩者的培養基明顯不同的是()a瓊脂的添加 b有機物的添加c激素的添加 d滅菌的處理答案(1)高壓蒸汽滅菌b(2)酵母菌、醋化醋桿菌、乳酸菌果醋假絲酵母乳酸菌糖(3)蛋白胨和酵母提取物ph擴大培養稀釋涂布分離倒置菌落僅以尿素為氮源富含果膠c解析(1)無菌操作包括多種滅菌方法，對實驗器皿如培養皿等采用高壓蒸汽滅菌法滅菌。擴大培養一般用液體培養基，是否要通入空氣要根據微生物的需求而定，不能一概而論。(2)在制作果酒、果醋、泡菜的過程中，分別用到的主要微生物是酵母菌、醋化醋桿菌和乳酸菌。果醋發酵屬于需氧發酵，需要向發酵裝置中通入空氣。泡菜腌制原理是假絲酵母和乳酸菌等主要微生物利用菜中的糖和其他營養物質進行發酵，產生有機酸和醇類物質。(3)細菌需要的營養物質主要為蛋白胨、酵母提取物等。培養基配制除考慮營養物質、溫度、滲透壓等之外還要特別注意ph適宜。通常液體培養基用于菌種擴大培養或生產，固體培養基用于研究鑒定和菌種分離，菌種分離常用劃線分離和涂布分離，其中涂布分離前常常需要稀釋樣品。接種后的培養皿應倒置培養，避免培養皿蓋上的冷凝水滴落到培養基上，造成菌體隨水滴擴散，不能獲得單菌落。固體培養基上生長的微生物能形成菌落，菌落的形狀、大小、顏色、軟硬等特征可用于菌種的鑒定。分離能產生脲酶的微生物應用以尿素為唯一氮源的培養基。培養蘋果青霉獲得大量果膠酶時應用含果膠豐富的培養基。植物組織培養的培養基中必須加入植物激素作為生長調節物質才能完成，有機物的需求較少但不能缺少，而一般微生物培養時不需要激素添加，有機物較多。4人參果果實有淡雅的清香，果肉清爽多汁，風味獨特。具有高蛋白、低糖、低脂，還富含維生素c，以及多種人體所必需的微量元素，尤其是硒、鈣的含量大大地高于其他的果實和蔬菜。某興趣小組將人參果制成果酒，并嘗試將其口感欠佳的葉子制作泡菜。請回答下列相關問題：(1)下圖為人參果果酒生產工藝流程簡圖，據圖回答問題：選料“？”粉碎滅菌接種發酵“？”果酒流程中“？”處的內容依次應為_、_。制作果酒時，溫度應該控制在_，果酒釀造過程中如果果汁滅菌不合格，含有醋化醋桿菌，在酒精發酵旺盛時，醋化醋桿菌能否將果汁中的糖發酵為醋酸？說明理由。_。果酒制作離不開酵母菌，與醋化醋桿菌相比，酵母菌在結構上的主要特點是_。人參果果酒制作過程中，接種完成后要先向發酵罐中通入一段時間的無菌空氣，目的是_。(2)下圖是人參果葉子的腌制及亞硝酸鹽含量測定的實驗流程示意圖，請據圖回答：制作泡菜宜選用新鮮的蔬菜或其他原料，原因是_。泡菜腌制過程中起主要作用的菌種是_。在制作泡菜的過程中，因為操作不當，造成泡菜腐爛。下列原因中正確的是()a罐口密閉缺氧，抑制了乳酸菌和需氧腐生細菌的生長繁殖b罐口密閉不嚴，氧氣使乳酸菌的生長繁殖受到抑制，需氧腐生細菌的生長繁殖加快c罐口密閉不嚴，氧氣使酵母菌和需氧腐生細菌的生長繁殖減慢d罐口密閉缺氧，促進了乳酸菌和需氧腐生細菌的生長繁殖測定亞硝酸鹽含量的方法是_。亞硝酸鹽可與對氨基苯磺酸發生重氮化反應，反應產物再與n1萘基乙二胺偶聯，形成_色產物。繪制標準曲線時，應以亞硝酸鈉質量為橫坐標，以_為縱坐標。三壇泡菜分別在腌制過程中的第3、5、7、9、11、13天分別對食鹽濃度為4%、6%、8%的泡菜做了亞硝酸鹽含量的檢測，得到以下數據：食鹽濃度發酵天數1號壇4%2號壇6%3號壇8%第3天1.61.20.5第5天3.25.52第7天3.84.01.8第9天3.51.81.6第11天3.41.21.5第13天3.21.21.2請根據表中數據，對泡菜的制作提出兩條建議_、_。(3)科學家將分離得到的人參果韌皮部細胞進行克隆，最終由單個細胞發育成了完整的新人參果植株。具體操作步驟如下所示：科學家所用的這種植物克隆技術叫做_。該項技術表明，當植物細胞處于_狀態時，在一定的營養物質、_和其他外界條件的作用下，可能表現出_，發育成完整植株。答案(1)沖洗過濾2530 不能因醋化醋桿菌是好氧型細菌，而果酒發酵是無氧環境(或因醋化醋桿菌需要在有氧且溫度是3035 條件下，才能將糖轉化為醋酸，而此時發酵罐中的條件是無氧且溫度是2530 )有成形的細胞核在有氧條件下，使酵母菌迅速繁殖，增加數量(2)亞硝酸鹽的含量低假絲酵母和乳酸菌b光電比色法紫紅光密度值泡菜腌制時間最好長于13天適當地增加食鹽的濃度(3)(植物)組織培養離體(植物)激素細胞的全能性解析(1)果酒生產的工藝流程為：選料沖洗粉碎滅菌接種發酵過濾果酒。醋化醋桿菌的最適生長溫度為3035 。如果果汁滅菌不合格，含有醋化醋桿菌，由于果酒發酵旺盛時是無氧環境，且溫度為2530 ，不適合醋化醋桿菌生存，故醋化醋桿菌不能將果汁中的糖發酵為醋酸。醋化醋桿菌是原核生物，無細胞核，酵母菌是真核生物，有細胞核及多種細胞器。果酒制作過程中，接種完成后要先向發酵罐中通入一段時間的無菌空氣，在有氧條件下，使酵母菌迅速繁殖，增加數量，有利于后期發酵。(2)制作泡菜宜選用新鮮的蔬菜是因為其中亞硝酸鹽的含量低，蔬菜中的氮元素會被微生物分解產生亞硝酸鹽。泡菜腌制過程中起主要作用的菌種是假絲酵母和乳酸菌，先期發酵以假絲酵母為主，以后發酵以乳酸菌為主。在制作泡菜的過程中，罐口密閉不嚴，氧氣使乳酸菌的生長繁殖受到抑制，需氧腐生細菌的生長繁殖加快，造成泡菜腐爛。測定亞硝酸鹽含量的方法是光電比色法，亞硝酸鹽可與顯色劑反應產生紫紅色物質。繪制標準曲線時，應以標準溶液中亞硝酸鈉質量為橫坐標，以光密度值為縱坐標。分析表中數據可以發現，泡菜中亞硝酸鹽的含量隨時間延長，先增加，13天后開始下降；泡菜中亞硝酸鹽的含量還與使用鹽水濃度有關，鹽水濃度適當增大亞硝酸鹽的含量相對減少。(3)由圖可知，為植物組織培養過程，a為離體培養，b為脫分化形成愈傷組織，c為再分化形成胚狀體，d表示胚狀體經過有絲分裂發育成幼苗，e為幼苗成長為植株。植物組織培養的原理是植物細胞的全能性。5如圖為某同學根據雜交瘤技術的方法，設計生產破傷風桿菌抗體的實驗方案。請據圖回答問題。(1)該方案的目的是_。該方案能達到預期效果嗎？_。原因是_。(2)圖中為_過程，常用_作為誘導劑。該細胞繼承了_，因此，不僅能_，還能產生_。圖中進行細胞培養的目的是_。圖中的培養能獲得_細胞，便于大規模培養。(3)在制備破傷風桿菌抗體的過程中，進行了兩次篩選，其目的是不相同的，是通過篩選獲得_，是通過篩選獲得_。(4)破傷風桿菌的抗體最終可從_和_中提取。(5)破傷風桿菌是原核生物，可歸為微生物。一般而言，為了獲得純凈的微生物培養物，最為關鍵的是無菌操作。下列有關無菌操作的敘述中，錯誤的是()a對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行滅菌b將培養器皿、接種用具和培養基等進行滅菌c為避免周圍環境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行d實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸答案(1)制備單克隆抗體不能沒有將抗原注入小鼠體內，無法獲得產生單一抗體的b淋巴細胞(2)細胞融合和篩選滅活的病毒雙親細胞的遺傳物質大量繁殖特異性抗體在體外條件下使雜交瘤細胞大量增殖足夠量產生特定抗體的雜交瘤(3)雜交瘤細胞產生特定抗體的雜交瘤細胞(4)細胞培養液小鼠腹水(5)a解析(1)由圖示的程序圖可知，該方案的目的是制備單克隆抗體。b淋巴細胞有以下特點：在體外不能無限增殖；只有受到抗原刺激后才能產生相應抗體；與骨髓瘤細胞融合成雜交瘤細胞后既可無限增殖，又能產生大量所需抗體。所以單克隆抗體制備過程首先需要注射與生產單克隆抗體發生特異性免疫反應的抗原，否則小鼠體內不會發生特異性免疫反應，產生合成所需抗體的b淋巴細胞。(2)獲得b淋巴細胞后，因為b淋巴細胞不能大量增殖，雖能產生抗體，但數量有限，因此需要與骨髓瘤細胞融合，融合必須在誘導劑的誘導下才能發生，常用的是滅活的病毒。兩細胞融合有三種類型：b淋巴細胞b淋巴細胞，骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞，b淋巴細胞骨髓瘤細胞，我們需要的是雜種細胞，它結合了雙親的遺傳物質，具備大量增殖和產生抗體的能力，所以需培養篩選。單克隆抗體生產中，經篩選獲得的雜交瘤細胞需要體外培養獲得大量的克隆細胞。圖中的培養能獲得足量的雜交瘤細胞。(3)第一次篩選是選擇需要的雜交瘤細胞，第二次篩選是在雜交瘤細胞中選出能產生所需抗體的雜交瘤細胞。(4)獲得的雜交瘤細胞需轉移到體外培養液中或小鼠腹腔中生產大量的單克隆抗體。(5)對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒而不是滅菌。6回答下列有關微生物和動植物細胞培養的問題：(1)下表是用于從土壤中分離純化土壤細菌的培養基配方。請回答：試劑牛肉膏蛋白胨nacl瓊脂水用量5 g10 g5 g20 g1 000 ml培養基的類型有很多，但培養基中一般都含有水、碳源、_和無機鹽。上述培養基配方中能充當碳源的成分是_。培養基配制完成以后，一般還要調節ph，并對培養基進行_處理。該培養基從物理性質上分類屬于_。分離純化微生物最常使用的接種方法是_和_。假設培養結束后，發現培養基上菌落連成一片，可能的原因是什么？_、_(列舉兩項)。(2)動物器官的體外培養技術對于研究器官的生理、病理過程及其機制意義重大。如圖是一個新生小鼠的肝臟小塊培養裝置示意圖，請回答下列問題：肝臟切成小薄片，這有利于肝臟細胞_。氣室中充入5%co2，氣體的主要作用是_。培養液中添加抗生素是為了抑制細菌生長，但要注意選擇抗生素的_，以保證抗生素對肝臟無害。圖中培養過程所用的培養基與植物組織培養基成分的主要不同是_。(3)植物組織培養過程中對植物樣本進行消毒，可將植物樣本先放入70%酒精中浸泡10 min，再放入5%_溶液中浸泡5 min，并重復一次，最后用無菌水沖洗。培養基除了含有必需的營養物質和凝固物質外，還必須加入_。消毒后的植物樣本要先后培養在_培養基和_培養基中，在合適條件下可培養得到幼苗。幼苗在定植前需經過一段時間的鍛煉，即逐漸降低幼苗生活環境中的_，以使幼苗能適應自然環境。答案(1)氮源牛肉膏和蛋白胨滅菌固體培養基劃線分離法涂布分離法稀釋倍數不夠，菌液的濃度太高劃線時或劃完第一次沒有滅菌即接著劃第二次培養過程中滅菌不嚴格，受到了其他微生物的污染(任選兩項)(2)吸收氧氣和營養物質、排出代謝廢物維持培養液適宜的ph種類和劑量動物細胞培養基中必須含有血清等(3)次氯酸鈉植物激素發芽(生芽)生根(順序不能錯)濕度解析(1)培養基中都應含有水、無機鹽、碳源、氮源。配制培養基時加入了瓊脂，因此該培養基屬于固體培養基。培養基配制完成后要調ph和滅菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元素，可作為有機碳源。分離純化微生物一般用劃線分離法和涂布分離法。劃線分離法中每次劃線前都要將接種環灼燒滅菌，以殺死上次劃線時接種環上殘留的菌種；采用涂布分離法時稀釋度要足夠高，否則會使微生物不能分散成單個細胞。(2)把肝臟切成小薄片，有利于肝臟細胞的呼吸代謝，即吸收氧氣和營養物質、排出代謝廢物。氣室中充入5%co2的作用是形成碳酸來維持培養液適宜的ph。同時也要注意選擇抗生素的種類和數量來抑制細菌生長。動物細胞培養過程中為保證順利增殖，培養基中一般要加入血清等。(3)植物組織培養中對外植體的消毒過程為放入70%酒精中浸泡10 min，再放入5%次氯酸鈉溶液中浸泡5 min，并重復一次，最后用無菌水沖洗。植物組織培養基中除含有必需的營養物質和凝固物質外，還必須加入植物激素作為生長調節物質。植物組織培養快速繁殖的一般程序是先誘導生芽得叢狀苗，后誘導生根得試管苗，故培養時先用生芽培養基后用生根培養基。試管苗的生活環境與自然環境相差很大，光照弱濕度大且恒溫，因此在試管苗移栽前要煉苗，主要是逐漸減少濕度、增強光照和變溫等，其中減少濕度最關鍵。7干擾素是治療癌癥的重要藥物，它必須從血液中提取，每升人血只能提取0.5 g，所以價格昂貴。現在某一基因公司用下圖所示的方式生產干擾素。請回答下列有關基因工程和酵母菌的相關問題：(1)干擾素基因在基因工程中稱為_。用_技術可使獲得的基因迅速擴增。此基因與細菌的質粒結合，形成重組dna分子要用_處理基因和質粒特定核苷酸之間的_，使兩者露出相同的粘性末端，再用_將二者連接成重組dna分子，然后將其導入酵母菌體內。酵母菌在基因工程中稱為_。(2)科學家在培養轉基因植物時，常用_中的質粒做載體。(3)分離純化所需受體酵母菌時可采用下圖所示兩種方法，圖b的分離方法是_。利用獲得的突變酵母菌和葡萄汁進行酒精發酵實驗，發酵過程中下列方法不能防止雜菌入侵的是()a彎曲玻璃管中加水封口b發酵液中添加某種抑制物如抗菌素c發酵過程必須保證所有用具都是清潔的d人工接種發酵的葡萄需經高錳酸鉀浸泡消毒答案(1)目的基因pcr同種限制性核酸內切酶磷酸二酯鍵dna連接酶受體細胞(2)農桿菌(3)涂布分離法b解析(1)干擾素基因作為目的基因，可用pcr技術擴增。形成重組dna分子時要用到的工具有限制性核酸內切酶、dna連接酶、基因進入受體細胞的載體。(2)培育轉基因植物時常用農桿菌做載體。(3)分離純化微生物有涂布分離和劃線分離法兩種，b屬于涂布分離法。在酒精發酵過程中需防止雜菌入侵，方法有許多，如彎曲導氣玻璃管中加水封口，發酵過程必須保證所有用具都是清潔的，人工接種發酵的葡萄需經高錳酸鉀浸泡消毒等，但發酵液中添加抗菌素只能抑制部分細菌生長，不能抑制其他微生物如霉菌的生長。8果膠酶基因廣泛存在于各種微生物中，如細菌、真菌和放線菌中。某一科研機構通過轉基因技術將黑曲霉菌中的果膠酶基因轉入到奶牛體內，培育出可產生果膠酶的轉基因奶牛。請據圖回答下列問題：(1)圖中b、c指的生物工程技術名稱_、_；外源基因是指_。d與親本a、b牛的最根本區別是_。(2)在動物細胞培養過程中，當貼壁細胞分裂生長到細胞表面_時，細胞會停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的_。此時，瓶壁上形成的細胞層數是_。(3)現用某種大分子染料，對細胞進行染色時，觀察到死細胞被染色，而活細胞不染色，原因是_。檢查某種毒物是否能改變細胞染色體的數目，最好選用_期的細胞用顯微鏡進行觀察。(4)為了檢測轉基因奶牛產生的果膠酶活