HPLC法測定愈骨療傷膠囊中川續斷皂苷的含量卞俊，陳海飛，宣偉東（解放軍第411醫院南京軍區藥學專科中心，上海，200434）摘要 目的：采用高效液相法測定愈骨療傷膠囊中川續斷皂苷的含量。方法：色譜柱Kromasil ODS-1 C18柱（4.6mm250mm，5m），流動相：乙腈-水（30：70），檢測波長：210nm，流速：1 mlmin-1。結果：川續斷皂苷的線性范圍是0.4g3.28g（r=0.9994，n=7），回收率103.4%，RSD=1.76%。結論：該方法簡便快捷，結果準確可靠，可作為愈骨療傷膠囊的質量控制手段。關鍵詞 愈骨療傷膠囊；HPLC；川續斷皂苷Determination of Asperosaponin in Yugu Liaoshang capsule by HPLCBIAN Jun， CHEN Hai-fei， XUAN Wei-dong ( .411 hospital of PLA， Shanghai 200434， China)ABSTRACT: OBJECTIVE To determine Asperosaponin in Yugu Liaoshang capsule by HPLC. METHODS The chromatography procedure was carried out using Kromasil ODS-1 C18 (4.6 mm250mm, 5 m) as an analytic column and a mixture of 30 volume of Acetonitrile,70 volume of water as a mobile phase at a flow rate of 1.0 mlmin-1.The detection wave length was set at 210 nm. RESULTS Asperosaponin line range was between 0.4 g and 3.28 g (r=0.9994, n=7).The average recovery rate and RSD value of Asperosaponin ware 103.4% and 1.76%. CONSLUSION The method is simple, accurate, and reliable, it and can be used for the quality assess of Yugu Liaoshang Capsule.KEY WORDS :Yugu Liaoshang Capsule； Asperosaponin ；HPLC愈骨療傷膠囊是依據解放軍411醫院傳統驗方，經現代提取技術、制備工藝加工制成的非標制劑，由川續斷、骨碎補、自然銅、地必蟲等11味中藥組成。臨床治療骨折取得良好效果。該制劑以川續斷科川續斷屬植物川續斷（Dipsacus asper Wall ）川續斷的根為君藥，具有補肝腎、強筋、續折傷、止崩漏等功效1。川續斷化學成分比較復雜，其中含有多種皂苷，其中川續斷皂苷是其主要成分2。本研究采用HPLC法檢測愈骨療傷膠囊中川續斷皂苷的含量，經實驗證明，該方法簡便快速、專屬性強。1 儀器與試藥儀器日本島津SPD-10A高效液相色譜儀，SK2200H型超聲波清洗儀器（上海科導超聲儀器有限公司），AB104-N型電子分析天平（梅特勒-扎利多上海儀器有限公司），川續斷皂苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，約20 mg，批號111685-200401），乙腈為色譜純（上海凌峰化學試劑有限公司）；水為蒸餾水；其它試劑為分析純，愈骨療傷膠囊（四一一醫院制劑室，批號20070804）。2 方法與結果2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil ODS-1 C18柱（4.6 mm250 mm， 5m）；流動相：乙腈-水（30：70）；檢測波長：210 nm，流速：1 mlmin-1。；柱溫：室溫；近樣量：20 l。2.2 對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液制備精密稱取川續斷皂苷對照品適量，加甲醇溶解，制成每1 ml含川續斷皂苷對照品1 mg的溶液，即得對照品溶液；精密稱取膠囊內容物0.03 g，加入甲醇15 ml后稱其質量，超聲30 min，放冷并補其失重，0.45 m微孔濾膜過濾，即得供試品溶液；取處方比例及工藝制備缺川續斷的陰性樣品，同供試品溶液制備的方法制得陰性對照溶液。在該色譜條件下，陰性對照應無干擾。色譜圖見圖1。2.3 線性關系考察取對照品溶液用甲醇稀釋為0.164、0.109、0.082、0.0547、0.041、0.0273、0.0205mg/ml進樣，每次進樣20l。按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積為Y軸，濃度為X軸進行線性回歸得到回歸方程：y=867560x（r=0.9994，n=7）。以上結果表明在0.4g3.28g范圍內，川續斷皂苷顯良好線性關系。2.4 精密度考察取對照品溶液用甲醇稀釋成高（0.082 mg/ml）、中（0.041mg/ml）、低（0.0205mg/ml）3種濃度的溶液，每個濃度重復進樣6次，每次進樣20l，按圖1專屬性實驗圖譜 A-陰性對照；B-愈骨療傷膠囊；C-川續斷皂苷對照品Fig.1 HPLC of specific testA-blank sample; B-sample; C-refercence 上述色譜條件測定峰面積。低、中、高濃度峰面積RSD分別為1.88%，1.66%和1.36%。2.5 重現性考察精密稱取愈骨療傷膠囊五份，照供試品制備方法平行處理，按上述色譜條件測定峰面積。其RSD為1.37%。2.6 加樣回收率取已知含量的愈骨療傷膠囊9份，分別精密加入1ml濃度為0.164g/ml的川續斷皂苷對照品，按供試品溶液制備處理，測定，計算加樣回收率，平均回收率為103.4%，RSD=1.76%。說明回收率達到良好效果。2.7 穩定性考察取愈骨療傷膠囊1份，按供試品溶液制備方法制備，在0、2、4、6、8、10時進樣，每次進樣20l，得RSD=0.7%。說明在10h內川續斷皂苷穩定性良好。2.8 樣品含量測定精密稱取3個批次的愈骨療傷膠囊內容物，按照供試品的處理方法平行處理，上清液過濾待進樣，按上述色譜條件測定峰面積，計算含量。3個批次的愈骨療傷膠囊中川續斷皂苷的含量分別為1.52%，1.64%，1.68%。3 討論實驗過程中，在190nm-400nm波長范圍內進行紫外掃描發現，川續斷皂苷在210nm處有最大吸收峰，故選用210nm作為檢測波長。供試品溶液選擇多種方法進行制備，包括正丁醇萃取、加水超聲、加乙腈超聲、加熱回流等方法，發現正丁醇萃取的方法重現性較差，而水和乙腈作為溶劑時則含量測定偏低。甲醇超聲的制備方法不僅有較好的重現性，而且方法簡單、快速，因此選擇該法作為供試品的制備方法。實驗結果表明，HPLC法對愈骨療傷膠囊內容物中川續斷皂苷進行定量分析，具有較好的準確度和靈敏度，實驗的重復性高。本方法可用于愈骨療傷膠囊中川續斷皂苷的定性及定量研究，為愈骨療傷膠囊的質量控制建立了分析方法。REFERENCES1 Ch. P(2005) Vol （中國藥典2005年版.一部）S. Beijing: Chemical Industry Press，2005: 2312 Zhang Y W，XUE Z. The chemical components resesrch of Dipsacus asper WallJ .Acta Pharm sin(藥學學報) ，1991，26（9）：676-681HPLC法測定愈骨療傷膠囊中川續斷皂苷的含量卞俊，陳海飛，宣偉東（解放軍第411醫院南京軍區藥學專科中心，上海，200434）摘要 愈骨療傷膠囊以川續斷為君藥，具有補肝腎、強筋、續折傷、止崩漏等功效。本研究采用HPLC法測定川續斷的主要成分川續斷皂苷的含量，對愈骨療傷膠囊的質量進行有效的控制。供試品溶液選擇多種方法進行制備，包括正丁醇萃取、加水超聲、加乙腈超聲、加熱回流等方法，其中甲醇超聲的制備方法不僅有較好的重現性，而且方法簡單、快速，因此選擇該法作為供試品的制備方法。檢測的條件為色譜柱：Kromasil ODS-1 C1