2025年艾梅乙技能操作考試試題及答案試題一：酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測HIV抗體操作操作要求：使用某品牌HIV-1/2抗體檢測試劑盒（雙抗原夾心法），對編號為20250601-05的5份血清樣本進行檢測，完成從樣本處理到結果判讀的全流程操作，需包含質量控制步驟。操作步驟及評分標準：1.實驗前準備（10分）-檢查實驗室環境：溫度22±2℃，濕度50±10%（2分）；確認生物安全柜已開啟30分鐘，紫外線消毒記錄完整（2分）。-試劑與耗材檢查：試劑盒在有效期內（2分），取出包被板、酶結合物、底物液、終止液等，平衡至室溫（30分鐘）（2分）；準備移液器（10μl、100μl、1ml）并校準（2分）。2.樣本處理（15分）-樣本編號核對：5份樣本編號與申請單一致（2分）；觀察樣本無溶血、脂血、黃疸（2分）。-離心處理：樣本以3000rpm離心10分鐘（3分），取上清液（避免吸到沉淀）（2分）；轉移至1.5ml離心管，標記清晰（2分）。-加樣準備：用100μl移液器吸取樣本，每孔加入100μl（3份樣本各加2孔，設陰/陽性對照各2孔）（2分）。3.溫育與洗板（20分）-溫育：封板膜密封酶標板，37℃溫育60±5分鐘（5分）；記錄溫育起始時間（2分）。-洗板：棄去孔內液體，每孔加入300μl洗滌液（pH7.4PBS-Tween20，0.05%），浸泡30秒后甩干（3分）；重復洗板5次（最后一次拍干）（5分）；檢查孔內無殘留液體（2分）。4.加酶結合物與二次溫育（15分）-酶結合物稀釋：按說明書比例（1:1000）用稀釋液配制（3分），漩渦振蕩混勻（2分）。-加樣：每孔加入100μl酶結合物（樣本孔、陰/陽性對照孔）（5分），避免氣泡（2分）。-二次溫育：37℃溫育30±5分鐘（3分）。5.顯色與終止（15分）-底物液配制：臨用前按1:1混合A液（H?O?）與B液（TMB）（3分），避光保存（2分）。-加底物：每孔加入100μl，37℃避光顯色15±2分鐘（5分），觀察陽性對照孔顯色（2分）。-終止反應：每孔加入50μl2MH?SO?（終止液），加入順序與底物一致（3分）。6.結果判讀與記錄（20分）-讀數：酶標儀波長450nm（參考波長630nm）讀取OD值（3分），記錄陰/陽性對照OD值（2分）。-臨界值（CO）計算：CO=陰性對照平均OD值×2.1（需滿足陰性對照OD≤0.15，陽性對照OD≥1.0）（5分）。-結果判定：樣本OD≥CO為陽性，<CO為陰性（5分）；若陰性對照失控（OD>0.15）或陽性對照失控（OD<1.0），需重新檢測（3分）。-記錄：填寫檢測原始記錄表（樣本編號、OD值、結果、操作人員、日期）（2分）。答案示例（以某實際操作為例）：-陰性對照平均OD=0.08，CO=0.08×2.1=0.168；-樣本20250601OD=0.21（陽性），20250602OD=0.12（陰性），20250603OD=0.17（灰區，需復檢）；-陽性對照OD=2.3（符合要求），陰性對照OD=0.07（符合要求）；-原始記錄完整，無漏項。試題二：梅毒螺旋體快速檢測（免疫層析法）操作操作要求：使用某品牌梅毒螺旋體抗體快速檢測試劑（雙抗原夾心法），對編號為20250606-10的5份血漿樣本進行檢測，需說明結果判讀標準及陽性樣本后續處理流程。操作步驟及評分標準：1.實驗前準備（10分）-環境與試劑檢查：室溫18-25℃（2分），試劑在有效期內（2分），平衡至室溫（15分鐘）（2分）；準備一次性吸管、計時器、生物安全垃圾袋（2分）；樣本已離心（3000rpm×10分鐘）（2分）。2.加樣操作（15分）-樣本處理：用吸管吸取血漿，垂直滴加3滴（約100μl）于加樣孔（5分），避免氣泡或溢出（3分）。-加緩沖液：立即滴加2滴緩沖液（約80μl）（5分），記錄時間（2分）。3.結果判讀（25分）-判讀時間：15-20分鐘內完成（超時無效）（5分）；-結果判定標準：-陽性：檢測線（T）和質控線（C）均顯色（10分）；-陰性：僅質控線（C）顯色（5分）；-無效：質控線（C）未顯色（無論T線是否顯色）（5分）。4.陽性樣本處理（20分）-復檢：用同一方法復檢（5分），若仍陽性，換用不同原理試劑（如TPPA）確認（5分）；-初篩陽性需注明“待確認”（3分），確認陽性報告“梅毒螺旋體抗體陽性”（3分）；-登記：錄入實驗室信息系統（LIS），包括樣本編號、檢測時間、結果、操作人員（4分）。5.生物安全（20分）-廢棄物處理：檢測卡放入感染性廢物袋（雙層黃色垃圾袋）（5分），吸管、手套等按醫療廢物處理（5分）；-臺面消毒：用0.5%含氯消毒液擦拭（作用30分鐘）（5分）；-個人防護：操作前后洗手（7步洗手法）（3分），脫手套后消毒（2分）。答案示例：-樣本20250606：T線與C線均顯色（陽性）；-樣本20250607：僅C線顯色（陰性）；-樣本20250608：C線未顯色（無效，需重測）；-陽性樣本20250606復檢仍陽性，換用TPPA檢測，結果陽性，最終報告“梅毒螺旋體抗體陽性”。試題三：乙肝病毒血清學標志物定量檢測（化學發光法）操作操作要求：使用全自動化學發光免疫分析儀（型號：CL-8000），檢測編號為20250611-15的5份血清樣本的乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗體（HBeAb）、乙肝核心抗體（HBcAb）（俗稱“乙肝兩對半”），需包含定標、質控及異常結果處理。操作步驟及評分標準：1.儀器與試劑準備（15分）-開機預熱：儀器開機后預熱30分鐘（2分），檢查水位、清洗液、廢液桶（2分）；-試劑裝載：各項目試劑（HBsAg、HBsAb等）裝入試劑倉，確認有效期（3分），條碼掃描正確（2分）；-定標：使用廠家提供的校準品（2-5點）進行定標（3分），定標曲線R2≥0.99（2分），記錄定標結果（1分）。2.樣本處理與上樣（15分）-樣本核對：編號與申請單一致（2分），無溶血、脂血（2分）；-離心：3000rpm×10分鐘（2分），取上清至專用樣本杯（2分），加蓋防蒸發（2分）；-上樣：樣本杯放入樣本架，條碼面朝向掃描區（3分），設置檢測項目（2分）。3.室內質量控制（20分）-質控品選擇：使用高、中、低濃度質控品（3個水平）（3分），與樣本同時檢測（2分）；-質控規則：采用1?s（1個質控點超過±3s）、2?s（2個連續質控點超過±2s）規則（5分）；-質控判斷：若質控失控，立即查找原因（試劑失效、儀器故障、操作誤差）（5分），糾正后重測（3分），記錄失控處理過程（2分）。4.檢測流程（20分）-加樣：儀器自動吸取樣本（50μl）、磁珠（包被抗體）、發光底物（吖啶酯標記抗體）（5分）；-溫育：37℃孵育18分鐘（2分），磁分離清洗3次（去除未結合物質）（3分）；-檢測：光電倍增管讀取發光強度（RLU）（5分），通過定標曲線轉換為濃度（IU/mL或S/CO）（5分）。5.結果判讀與報告（20分）-參考區間：HBsAg（<0.05IU/mL）、HBsAb（<10mIU/mL）、HBeAg（<0.1S/CO）、HBeAb（>1.0S/CO）、HBcAb（>1.0S/CO）（5分）；-異常結果處理：HBsAg≥0.05IU/mL（陽性）需復核（3分），HBeAg陽性提示病毒復制活躍（2分），HBsAb≥10mIU/mL提示保護性抗體（2分）；-報告審核：雙人核對結果（樣本編號、項目、數值、參考區間）（3分），電子報告發送至LIS，紙質報告存檔（5分）。答案示例：-樣本20250611：HBsAg0.8IU/mL（陽性），HBeAg2.5S/CO（陽性），HBcAb3.0S/CO（陽性）→“大三陽”（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）；-樣本20250612：HBsAb50mIU/mL（陽性），其余陰性→“既往感染或接種疫苗后”；-質控結果：高值質控HBsAg5.2IU/mL（靶值5.0±0.5），在控；低值質控HBsAg0.03IU/mL（靶值0.02±0.01），在控。試題四：艾梅乙檢測實驗室生物安全操作操作要求：模擬處理檢測過程中發生的意外事件（如樣本管破裂、試劑濺入眼睛），說明應急處理流程及日常生物安全規范。操作步驟及評分標準：1.樣本管破裂處理（25分）-立即停止操作（2分），戴手套、護目鏡（2分）；-用吸水紙覆蓋破裂處（2分），傾倒0.5%含氯消毒液（有效氯5000mg/L）（5分），作用30分鐘（3分）；-用鑷子夾取碎片放入銳器盒（5分），污染區域再次消毒（3分），記錄事件及處理過程（3分）。2.試劑濺入眼睛處理（25分）-立即至洗眼器處，用大量清水沖洗15分鐘（5分），翻開眼瞼沖洗（5分）；-聯系實驗室主管（3分），前往醫院眼科檢查（3分）；-記錄暴露時間、試劑名稱、處理措施（5分），啟動職業暴露登記（4分），必要時進行醫學監測（5分）。3.日常生物安全規范（50分）-個人防護：操作時穿防護服、戴手套（乳膠或丁腈）、口罩（醫用外科）、護目鏡（2分）；離室前脫卸（內面朝內折疊）（2分），洗手（7步洗手法）（2分）；-樣本管理：接收時核對數量、狀態（2分），保存于2-8℃（HBV/HCV/HIV樣本保存7天，梅毒樣本保存14天）（3分），轉移時使用防漏容器（2分）；-廢棄物管理：感染性廢物（樣本管、檢測卡）高壓蒸汽滅菌（121℃×30分鐘）后焚燒（5分）；化學廢物（廢洗液）分類收集，交有資質單位處理（5分）；-實驗室消毒：每日工作結束后用0.5%含氯消毒液擦拭臺面（3分），紫外線消毒生物安全柜30分鐘（2分）；-培訓與演練：每半年進行生物安全培訓（2分），每年模擬2次意外事件演練（2分），記錄培訓與演練結果（2分）；-應急預案：制定《實驗室生物安全事件處置預案》（2分），明確