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文檔簡介
2025年艾梅乙技能操作考試試題及答案試題一:酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測HIV抗體操作操作要求:使用某品牌HIV-1/2抗體檢測試劑盒(雙抗原夾心法),對編號為20250601-05的5份血清樣本進行檢測,完成從樣本處理到結果判讀的全流程操作,需包含質量控制步驟。操作步驟及評分標準:1.實驗前準備(10分)-檢查實驗室環境:溫度22±2℃,濕度50±10%(2分);確認生物安全柜已開啟30分鐘,紫外線消毒記錄完整(2分)。-試劑與耗材檢查:試劑盒在有效期內(2分),取出包被板、酶結合物、底物液、終止液等,平衡至室溫(30分鐘)(2分);準備移液器(10μl、100μl、1ml)并校準(2分)。2.樣本處理(15分)-樣本編號核對:5份樣本編號與申請單一致(2分);觀察樣本無溶血、脂血、黃疸(2分)。-離心處理:樣本以3000rpm離心10分鐘(3分),取上清液(避免吸到沉淀)(2分);轉移至1.5ml離心管,標記清晰(2分)。-加樣準備:用100μl移液器吸取樣本,每孔加入100μl(3份樣本各加2孔,設陰/陽性對照各2孔)(2分)。3.溫育與洗板(20分)-溫育:封板膜密封酶標板,37℃溫育60±5分鐘(5分);記錄溫育起始時間(2分)。-洗板:棄去孔內液體,每孔加入300μl洗滌液(pH7.4PBS-Tween20,0.05%),浸泡30秒后甩干(3分);重復洗板5次(最后一次拍干)(5分);檢查孔內無殘留液體(2分)。4.加酶結合物與二次溫育(15分)-酶結合物稀釋:按說明書比例(1:1000)用稀釋液配制(3分),漩渦振蕩混勻(2分)。-加樣:每孔加入100μl酶結合物(樣本孔、陰/陽性對照孔)(5分),避免氣泡(2分)。-二次溫育:37℃溫育30±5分鐘(3分)。5.顯色與終止(15分)-底物液配制:臨用前按1:1混合A液(H?O?)與B液(TMB)(3分),避光保存(2分)。-加底物:每孔加入100μl,37℃避光顯色15±2分鐘(5分),觀察陽性對照孔顯色(2分)。-終止反應:每孔加入50μl2MH?SO?(終止液),加入順序與底物一致(3分)。6.結果判讀與記錄(20分)-讀數:酶標儀波長450nm(參考波長630nm)讀取OD值(3分),記錄陰/陽性對照OD值(2分)。-臨界值(CO)計算:CO=陰性對照平均OD值×2.1(需滿足陰性對照OD≤0.15,陽性對照OD≥1.0)(5分)。-結果判定:樣本OD≥CO為陽性,<CO為陰性(5分);若陰性對照失控(OD>0.15)或陽性對照失控(OD<1.0),需重新檢測(3分)。-記錄:填寫檢測原始記錄表(樣本編號、OD值、結果、操作人員、日期)(2分)。答案示例(以某實際操作為例):-陰性對照平均OD=0.08,CO=0.08×2.1=0.168;-樣本20250601OD=0.21(陽性),20250602OD=0.12(陰性),20250603OD=0.17(灰區,需復檢);-陽性對照OD=2.3(符合要求),陰性對照OD=0.07(符合要求);-原始記錄完整,無漏項。試題二:梅毒螺旋體快速檢測(免疫層析法)操作操作要求:使用某品牌梅毒螺旋體抗體快速檢測試劑(雙抗原夾心法),對編號為20250606-10的5份血漿樣本進行檢測,需說明結果判讀標準及陽性樣本后續處理流程。操作步驟及評分標準:1.實驗前準備(10分)-環境與試劑檢查:室溫18-25℃(2分),試劑在有效期內(2分),平衡至室溫(15分鐘)(2分);準備一次性吸管、計時器、生物安全垃圾袋(2分);樣本已離心(3000rpm×10分鐘)(2分)。2.加樣操作(15分)-樣本處理:用吸管吸取血漿,垂直滴加3滴(約100μl)于加樣孔(5分),避免氣泡或溢出(3分)。-加緩沖液:立即滴加2滴緩沖液(約80μl)(5分),記錄時間(2分)。3.結果判讀(25分)-判讀時間:15-20分鐘內完成(超時無效)(5分);-結果判定標準:-陽性:檢測線(T)和質控線(C)均顯色(10分);-陰性:僅質控線(C)顯色(5分);-無效:質控線(C)未顯色(無論T線是否顯色)(5分)。4.陽性樣本處理(20分)-復檢:用同一方法復檢(5分),若仍陽性,換用不同原理試劑(如TPPA)確認(5分);-初篩陽性需注明“待確認”(3分),確認陽性報告“梅毒螺旋體抗體陽性”(3分);-登記:錄入實驗室信息系統(LIS),包括樣本編號、檢測時間、結果、操作人員(4分)。5.生物安全(20分)-廢棄物處理:檢測卡放入感染性廢物袋(雙層黃色垃圾袋)(5分),吸管、手套等按醫療廢物處理(5分);-臺面消毒:用0.5%含氯消毒液擦拭(作用30分鐘)(5分);-個人防護:操作前后洗手(7步洗手法)(3分),脫手套后消毒(2分)。答案示例:-樣本20250606:T線與C線均顯色(陽性);-樣本20250607:僅C線顯色(陰性);-樣本20250608:C線未顯色(無效,需重測);-陽性樣本20250606復檢仍陽性,換用TPPA檢測,結果陽性,最終報告“梅毒螺旋體抗體陽性”。試題三:乙肝病毒血清學標志物定量檢測(化學發光法)操作操作要求:使用全自動化學發光免疫分析儀(型號:CL-8000),檢測編號為20250611-15的5份血清樣本的乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗體(HBsAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗體(HBeAb)、乙肝核心抗體(HBcAb)(俗稱“乙肝兩對半”),需包含定標、質控及異常結果處理。操作步驟及評分標準:1.儀器與試劑準備(15分)-開機預熱:儀器開機后預熱30分鐘(2分),檢查水位、清洗液、廢液桶(2分);-試劑裝載:各項目試劑(HBsAg、HBsAb等)裝入試劑倉,確認有效期(3分),條碼掃描正確(2分);-定標:使用廠家提供的校準品(2-5點)進行定標(3分),定標曲線R2≥0.99(2分),記錄定標結果(1分)。2.樣本處理與上樣(15分)-樣本核對:編號與申請單一致(2分),無溶血、脂血(2分);-離心:3000rpm×10分鐘(2分),取上清至專用樣本杯(2分),加蓋防蒸發(2分);-上樣:樣本杯放入樣本架,條碼面朝向掃描區(3分),設置檢測項目(2分)。3.室內質量控制(20分)-質控品選擇:使用高、中、低濃度質控品(3個水平)(3分),與樣本同時檢測(2分);-質控規則:采用1?s(1個質控點超過±3s)、2?s(2個連續質控點超過±2s)規則(5分);-質控判斷:若質控失控,立即查找原因(試劑失效、儀器故障、操作誤差)(5分),糾正后重測(3分),記錄失控處理過程(2分)。4.檢測流程(20分)-加樣:儀器自動吸取樣本(50μl)、磁珠(包被抗體)、發光底物(吖啶酯標記抗體)(5分);-溫育:37℃孵育18分鐘(2分),磁分離清洗3次(去除未結合物質)(3分);-檢測:光電倍增管讀取發光強度(RLU)(5分),通過定標曲線轉換為濃度(IU/mL或S/CO)(5分)。5.結果判讀與報告(20分)-參考區間:HBsAg(<0.05IU/mL)、HBsAb(<10mIU/mL)、HBeAg(<0.1S/CO)、HBeAb(>1.0S/CO)、HBcAb(>1.0S/CO)(5分);-異常結果處理:HBsAg≥0.05IU/mL(陽性)需復核(3分),HBeAg陽性提示病毒復制活躍(2分),HBsAb≥10mIU/mL提示保護性抗體(2分);-報告審核:雙人核對結果(樣本編號、項目、數值、參考區間)(3分),電子報告發送至LIS,紙質報告存檔(5分)。答案示例:-樣本20250611:HBsAg0.8IU/mL(陽性),HBeAg2.5S/CO(陽性),HBcAb3.0S/CO(陽性)→“大三陽”(HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+);-樣本20250612:HBsAb50mIU/mL(陽性),其余陰性→“既往感染或接種疫苗后”;-質控結果:高值質控HBsAg5.2IU/mL(靶值5.0±0.5),在控;低值質控HBsAg0.03IU/mL(靶值0.02±0.01),在控。試題四:艾梅乙檢測實驗室生物安全操作操作要求:模擬處理檢測過程中發生的意外事件(如樣本管破裂、試劑濺入眼睛),說明應急處理流程及日常生物安全規范。操作步驟及評分標準:1.樣本管破裂處理(25分)-立即停止操作(2分),戴手套、護目鏡(2分);-用吸水紙覆蓋破裂處(2分),傾倒0.5%含氯消毒液(有效氯5000mg/L)(5分),作用30分鐘(3分);-用鑷子夾取碎片放入銳器盒(5分),污染區域再次消毒(3分),記錄事件及處理過程(3分)。2.試劑濺入眼睛處理(25分)-立即至洗眼器處,用大量清水沖洗15分鐘(5分),翻開眼瞼沖洗(5分);-聯系實驗室主管(3分),前往醫院眼科檢查(3分);-記錄暴露時間、試劑名稱、處理措施(5分),啟動職業暴露登記(4分),必要時進行醫學監測(5分)。3.日常生物安全規范(50分)-個人防護:操作時穿防護服、戴手套(乳膠或丁腈)、口罩(醫用外科)、護目鏡(2分);離室前脫卸(內面朝內折疊)(2分),洗手(7步洗手法)(2分);-樣本管理:接收時核對數量、狀態(2分),保存于2-8℃(HBV/HCV/HIV樣本保存7天,梅毒樣本保存14天)(3分),轉移時使用防漏容器(2分);-廢棄物管理:感染性廢物(樣本管、檢測卡)高壓蒸汽滅菌(121℃×30分鐘)后焚燒(5分);化學廢物(廢洗液)分類收集,交有資質單位處理(5分);-實驗室消毒:每日工作結束后用0.5%含氯消毒液擦拭臺面(3分),紫外線消毒生物安全柜30分鐘(2分);-培訓與演練:每半年進行生物安全培訓(2分),每年模擬2次意外事件演練(2分),記錄培訓與演練結果(2分);-應急預案:制定《實驗室生物安全事件處置預案》(2分),明確
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